利用微衛(wèi)星標(biāo)記研究燕山紅玉及親本遺傳結(jié)構(gòu)及肉用性能標(biāo)記

何玲鈺，王金帥，祁鈺杰，呂建國，史國翠，李祥龍,3

（1.河北科技師范學(xué)院動物科技學(xué)院，河北 秦皇島 066000；2.唐山市畜牧技術(shù)推廣站，河北 唐山 063000；3.河北省特色動物種質(zhì)資源挖掘與創(chuàng)新重點(diǎn)實驗室，河北 秦皇島 066000）

近些年來， 中國市場上逐漸流行一種名為“燕山紅玉”的品種雞，父本為以色列的安卡紅肉雞父母代，母本為法國巴布考克B380 蛋雞父母代的紅羽純黑尾雞， 其后代為4 系配套肉雜雞，故有別名“紅玉380”和“紅肉雜”之稱。 該品種雞體征明顯，全身為亮紅色，尾巴為黑色，無雜毛，外表十分美觀。 而且該品種的雞生長速度也很快，抗病性能也較高，屬于肉食雞，有很高的經(jīng)濟(jì)價值，且有不錯的抗病能力，在肉雞市場中占有很大的比例。

微衛(wèi)星標(biāo)記， 又稱簡單重復(fù)序列或串聯(lián)重復(fù)序列， 是均勻分布在真核生物基因組中的簡單重復(fù)序列，片段較小，結(jié)構(gòu)較為簡單，具有1～30 次的重復(fù)，可以應(yīng)用于動物起源、親緣關(guān)系、遺傳多樣性等研究，如吳信生等、樊斌等、王斌等利用微衛(wèi)星標(biāo)記分別對雞、豬、牛的遺傳多樣性與親緣關(guān)系進(jìn)行分析，黃勛和等、劉偉等、屠云潔等利用相同技術(shù)分析了不同地方雞種的起源以及遺傳多樣性豐富程度。本試驗以燕山紅玉及其親本群體為研究對象，研究燕山紅玉及其親本群體之間微衛(wèi)星標(biāo)記遺傳多樣性以及與性別、肉用性能之間顯著相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記，為燕山紅玉肉雞選育提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

該試驗的試驗動物燕山紅玉雞苗選自河北振志家禽育種有限公司，室內(nèi)籠養(yǎng)，在雞苗25 日齡時稱重，隨機(jī)選取體重接近的健康公母雛雞各100 羽，并將其平均分為2 組，分別為籠養(yǎng)公雞和籠養(yǎng)母雞。 在120 日齡時，將試驗動物進(jìn)行屠宰，公母各隨機(jī)選擇30 只，屠宰前，禁食禁水12 小時。 屠宰時，記錄下來每只雞的編號，采用頸外放血法，熱水浴進(jìn)行脫毛。 雞血液和肝臟基因組DNA 的提取均采用上海生工Ezup 柱式動物組織基因組DNA 抽屜試劑盒提取，型號B518251。 利用文本文檔進(jìn)行popgene軟件運(yùn)算的編程；利用popgene32 軟件計算各種值；利用軟件PIC-CALC 0.6 軟件計算多態(tài)信息含量PIC；利用PHYLIP3.5 軟件包，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。

2 微衛(wèi)星分析

2.1 群體遺傳多樣性分析

2.1.1 微衛(wèi)星擴(kuò)增結(jié)果

結(jié)果顯示，20 個微衛(wèi)星位上，共檢測出191個等位基因，并且在這些位點(diǎn)上，每個位點(diǎn)上都均可檢測到4～14 個等位基因，平均等位基因數(shù)為9.6 個。 呈現(xiàn)出豐富的多態(tài)性，說明群體遺傳多樣性比較豐富。

2.1.2 不同群體微衛(wèi)星多樣性

燕山紅玉及其親本群體微衛(wèi)星遺傳多樣性如表1 所示。 由表1 可以看出，燕山紅玉及其雜交親本群體20 個微衛(wèi)星位點(diǎn)的I 范圍在1.011 ～1.291， 其 中 最 小 為B380 黑 尾 母 雞（1.011），最大為燕山紅玉公雞（1.291）。 整體差異不大。 Fis 平均值為0.1174，表明群體內(nèi)的近交程度并不嚴(yán)重。 5 個雞群的觀察雜合度（0.462 ～0.582） 均 低 于 期 望 雜 合 度 （0.533 ～0.645）。 平均觀察雜合度為0.5356，平均期望雜合度為0.6034，均大于0.5，屬于高度多態(tài)。

表1 群體遺傳多樣性

2.1.3 燕山紅玉及其雜交親本群體間的遺傳距離分析

燕山紅玉及其雜交親本群體間的遺傳相似度、 遺傳距離及其聚類關(guān)系圖如表3 和圖1 所示。 由表3 可以看出，不同群體遺傳距離變化幅度0.040～0.271。 燕山紅玉母雞和燕山紅玉公雞之間的遺傳距離最小（0.040）， 遺傳多樣性低，B380 白尾母雞與安卡紅公雞及B380 白尾母雞與安卡紅公雞及B380 黑尾母雞和安卡紅公雞之間的遺傳距離最大（0.271）。 遺傳距離可以用來衡量群體間遺傳變異大小， 群體分化時間與遺傳距離在某種程度上呈正比關(guān)系。

表2 群體間遺傳相似度和遺傳距離

圖1 遺傳聚類圖

2.2 微衛(wèi)星標(biāo)記在不同尾羽顏色之間差異

表3 給出了具有不同顏色尾羽的群體間基因頻率和基因型頻率差異達(dá)顯著水平的微衛(wèi)星標(biāo)記。 一般情況下，兩個群體在某一位點(diǎn)等位基因頻率分布相同，說明其之間遺傳距離為零；反之， 則說明遺傳距離較大。 由表3 可知， 位點(diǎn)LEI0094 中，安卡紅（黑尾）與B380 白尾基因頻率差異最小，安卡紅黑尾與紅玉公雞（黑尾）基因頻率差異最大；位點(diǎn)MCW0165 中，B380 白尾與紅玉母雞（黑尾為主）基因頻率差異最小，安卡紅（黑尾）與紅玉母雞（黑尾）基因頻率差異最大。

表3 微衛(wèi)星標(biāo)記基因頻率在群體之間差異顯著性

2.3 不同性別之間差異顯著的微衛(wèi)星標(biāo)記

表4 給出了不同性別之間基因頻率和基因型頻率差異達(dá)顯著水平的微衛(wèi)星標(biāo)記。

表4 微衛(wèi)星在不同性別之間的顯著性

2.4 微衛(wèi)星標(biāo)記與屠宰性能

2.4.1 與屠宰性能顯著相關(guān)的微衛(wèi)星位點(diǎn)

與屠宰性能顯著相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記如表5所示。 MCW0330 位點(diǎn)與全凈膛率存在顯著性差異；ADL0112 位點(diǎn)與半凈膛率存在顯著性差異；ADL0278 位點(diǎn)與爪和腺胃存在極顯著性差異；LEI0166 位點(diǎn)與腺胃存在顯著性差異；MCW0014 位點(diǎn)與屠宰率、心、腺胃、肌胃均存在顯著性差異；MCW0206 位點(diǎn)與腿肌存在極顯著性差異， 與腿肌率、 翅膀存在顯著性差異 ；MCW0248位點(diǎn)與肝存在顯著性差異。 本次試驗中， 共有7 個位點(diǎn)與屠宰性能存在顯著差異，這表明，這些微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)可能與屠宰性能指標(biāo)之間存在一定連鎖關(guān)系。 上述結(jié)果表明，MCW0330、 ADL0112、ADL0278、LEI0166、MCW0014、MCW0206、 MCW0248 位點(diǎn)與燕山紅玉肉雞的部分屠宰性能指標(biāo)之間均存在顯著性差異，即它們之間存在一定連鎖關(guān)系。

表5 模型中達(dá)顯著水平的標(biāo)記

2.4.2 顯著相關(guān)微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型分析

表6 給出了與屠宰性能顯著相關(guān)微衛(wèi)星位點(diǎn)各基因型的比較最終結(jié)果。 結(jié)果表明，MCW0330 位點(diǎn)CC 型個體全凈膛率最大，MCW0014 位點(diǎn)DD 型屠宰率最大，MCW0206位點(diǎn)GG 型腿肌率最大；

表6 微衛(wèi)星標(biāo)記與屠宰性能的多重比較結(jié)果

ADL0112 位點(diǎn)BD 型半凈膛最大；

ADL0278 位點(diǎn)EE 型爪最大，AI 型腺胃最大；

LEI0166 位點(diǎn)EE 型腺胃最大，MCW0014位點(diǎn)AA 型心臟最大，MCW0206 位點(diǎn)FF、AF 型腿肌及翅膀均為最大，MCW0248 位點(diǎn)CF、CH型肝臟最大。

2.4.3 微衛(wèi)星標(biāo)記的不同基因型與屠宰性能的關(guān)聯(lián)性及多重比較

本次試驗共得到7 個微衛(wèi)星標(biāo)記與屠宰性能之間存在顯著差異， 分別MCW0330、ADL0112、ADL0278、LEI0166、MCW0014、MCW0206、MCW0248 位點(diǎn)， 而這些差異的存在則說明：這些微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)可能與屠宰性能指標(biāo)之間存在著一定連鎖關(guān)系。

將微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型與具有顯著性差異的性狀進(jìn)行多重比較，結(jié)果表明：微衛(wèi)星中的位點(diǎn)MCW0330 中CC 型對全凈膛率有顯著性影響；位點(diǎn)MCW0014 中DD 型對屠宰率有顯著影響，AA 型對心臟及腺胃均有顯著性影響，EE 型對肌胃有顯著性影響；位點(diǎn)MCW0206 中GG 型和BG 型均對腿肌率、腿肌及翅膀均有顯著性影響； 位點(diǎn)ADL0112 中BD 型對半凈膛有顯著影響； 位點(diǎn)ADL0278 中EI 型對爪有顯著性影響，AI 型對腺胃有顯著性影響；位點(diǎn)LEI0166 中EE型對腺胃有顯著性影響； 位點(diǎn)MCW0248 中CF型、CH 型對肝臟均有顯著性影響。

3 結(jié)論

3.1 燕山紅玉及其雜交親本群體具有豐富的遺傳多樣性。

3.2 微 衛(wèi) 星 位 點(diǎn) MCW0330、ADL0112、ADL0278、LEI0166、MCW0014、MCW0206 和MCW0248 與屠宰性能存在顯著相關(guān)。

3.3 微衛(wèi)星位點(diǎn)LEI0094、MCW0165 與尾羽顏色顯著相關(guān)。

3.4 微 衛(wèi) 星 位 點(diǎn)MCW0034、MCW0123 和MCW0295 與性別存在顯著相關(guān)。