膿毒癥患者腸道細菌紊亂與PCT、D-乳酸、內毒素水平的相關性

王溪 黃桔秀 王穎 朱海勇 陳燕

1.臺州市中心醫(yī)院（臺州學院附屬醫(yī)院）全科醫(yī)學科，浙江臺州 318000；2.臺州市中心醫(yī)院（臺州學院附屬醫(yī)院）急診科，浙江臺州 318000；3.臨海市第一人民醫(yī)院ICU，浙江臺州 317000；4.浙江省臺州醫(yī)院特需病房，浙江臺州 317000

膿毒癥是一種全身炎癥反應綜合征，是嚴重感染、外科手術后常見的并發(fā)癥，主要臨床癥狀有呼吸急促、心率加快等，具有患病率高、死亡率高的特點。據(jù)相關流行病學調查結果顯示，細菌、病毒、真菌等病原體感染為其主要危險因素。降鈣素原（procalcitonin，PCT）是甲狀腺C 細胞產(chǎn)生的一種蛋白質，D-乳酸（D-Lactate，D-LA）是腸道細菌發(fā)酵的產(chǎn)物；內毒素（endotoxin，ET）是菌體毒性物質的總稱，位于細胞壁最外層。本文研究中對PCT、D-乳酸、內毒素表達檢測，旨在探究PCT、D-乳酸、內毒素在膿毒癥中的表達以及三者在該病中與腸道細菌紊亂關系的相關性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月～2021 年1 月臺州市中心醫(yī)院收治的膿毒癥患者56 例設為膿毒癥組，其中輕度膿毒癥患者32 例，重度膿毒癥患者24 例，另選取同期體檢的健康志愿者30 名設為健康組做對照。膿毒癥組男29 例，女27 例，平均年齡（45.5±15.6）歲，平均體質量指數(shù)（23.1±2.4）kg/m；健康組男17 例，女13 例，平均年齡（47.5±16.4）歲，平均體質量指數(shù)（24.5±2.8）kg/m。兩組研究對象年齡、性別、體質量指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)臺州市中心醫(yī)院批準。

納入標準：①符合《2012 國際嚴重膿毒癥及膿毒性休克診療指南》 中的關于膿毒癥的診斷標準，確診為膿毒癥腸道細菌紊亂患者；②所有患者臨床資料齊全，且自愿參與本次研究。

排除標準：①妊娠期或哺乳期女性；②患有自身免疫類疾病者；③患有過敏性疾病者；④患有動脈粥樣硬化者。

1.2 檢測方法

1.2.1 糞便常規(guī)檢查檢測研究對象腸道菌群情況采集所有研究對象1 g 糞便，置于厭氧試管中，加入磷酸緩沖鹽溶液，震蕩均勻，2000 r/min 離心15 min，收集上清液，將該混合液稀釋度標記為10-1；厭氧試管中加入150 μl，添加0.9%氯化鈉注射液100 μl，混合均勻，將此標本稀釋度標記為10-2，繼續(xù)稀釋至10-8。將瓊脂培養(yǎng)基置于沸水中直至溶化，放置于48℃恒溫水中待用，將60 μl 細菌混懸液于加入平皿上，傾注瓊脂培養(yǎng)基混合混勻，恒溫培養(yǎng)48 h。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測PCT、D-乳酸、內毒素水平采集所有研究對象靜脈血5 ml，1000 r/min 離心5 min，-50℃?zhèn)溆?。將待測血清加入加稀釋液將進行稀釋，酶標板置于桌面，每孔加入100 μl，膠紙封住反應孔，將其充分混合均勻，37℃靜置50 min，棄反應液，每孔注滿洗滌液，浸泡2 min，甩干，洗滌3 次，每孔加入生物素化抗體40 μl，膠紙封住反應孔，恒溫孵育40 min，每孔注滿洗滌液，浸泡2 min，甩干洗滌3次，每孔加入加酶標抗體40 μl，膠紙封住反應孔，恒溫靜置30 min，每孔加入顯色劑40 μl，避光顯色15 min，每孔加入終止液40 μl，待其混合均勻，在全自動酶標儀450 nm 波長處測量PCT、D-乳酸、內毒素水平。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 兩組腸道菌群失調比較

與健康組比較，膿毒癥組患者腸道菌群失調率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與輕度膿毒癥患者比較，重度膿毒癥患者腸道菌群失調率較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組腸道菌群失調程度比較[n（%）]

2.2 兩組血清PCT、D-乳酸、內毒素水平比較

與健康組比較，膿毒癥組患者PCT、D-乳酸、內毒素水平較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清PCT、D-乳酸、內毒素水平比較（）

2.3 膿毒癥組不同程度膿毒癥患者血清PCT、D-乳酸、內毒素水平比較

與輕度膿毒癥患者比較，重度膿毒癥患者PCT、D-乳酸、內毒素水平較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 膿毒癥組不同程度膿毒癥患者血清PCT、D-乳酸、內毒素水平比較（）

2.4 膿毒癥組患者APACHEⅡ、MAGE 比較

與輕度膿毒癥患者比較，重度膿毒癥患者APACHEⅡ評分較高，MAGE 水平較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 膿毒癥組患者APACHEⅡ、MAGE 比較（）

2.5 Logistic 回歸分析膿毒癥患者腸道細菌紊亂與PCT、D-乳酸、內毒素相關性

膿毒癥患者腸道細菌紊亂作為因變量，PCT、D-乳酸、內毒素為自變量進行多因素Logistic 回歸分析，結果顯示，PCT、D-乳酸、內毒素為膿毒癥患者腸道細菌紊亂的發(fā)生因素，與膿毒癥患者腸道細菌紊亂的發(fā)生相關，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 Logistic 回歸分析膿毒癥患者腸道細菌紊亂與PCT、D-乳酸、內毒素相關性

2.6 PCT、D-乳酸、內毒素相關性分析

使用Pearson 對PCT、D-乳酸、內毒素相關性分析發(fā)現(xiàn)，PCT、D-乳酸呈正相關（r=0.781，P=0.001）；PCT、內毒素呈正相關（r=0.696，P=0.001）；D-乳酸、內毒素呈正相關（r=0.670，P=0.001）。

3 討論

膿毒癥是由病原微生物侵入人體任何部位后感染而引起，是臨床常見的疾病之一。據(jù)國外流行病學調查結果顯示，膿毒癥的病死率已超過心肌梗死成為非心臟病死亡主要原因。膿毒癥發(fā)病機制多樣，可能與立克次體、螺旋體等病原細菌感染相關，主要表現(xiàn)為心率加快、白細胞增加等。近年來，我國膿毒癥患病率及病死率逐年上升，已成為研究熱點。

本文研究顯示，膿毒癥患者血清中PCT 水平較高。PCT 是一種單拷貝基因，位于11 號染色體上，可反應出全身炎癥反應的活躍度。相關學者調查結果發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者存在腸道細菌紊亂情況，可能與患者免疫應答紊亂相關。另據(jù)廖宴等研究顯示，膿毒癥患者的嚴重程度和預后可由PCT、CRP 水平及血小板相關參數(shù)評估。本研究結果發(fā)現(xiàn)，PCT 在膿毒癥患者血清中水平較高，且隨著病情的加重水平隨之上升，重度膿毒癥患者血清中PCT 水平較高，PCT 水平變化與膿毒癥患者腸道細菌紊亂具有相關性，可作為膿毒癥患者腸道細菌紊亂的檢測指標，D-乳酸又稱D-2-羥基丙酸，是一種化工中間體。有關研究顯示，急性胃腸損傷分級、D-乳酸、內毒素均是膿毒癥患者的獨立危險因素，三者聯(lián)合可較準確預測膿毒癥患者的預后。

本文研究顯示，膿毒癥患者血清中內毒素水平較高。內毒素是革蘭陰性桿菌的細胞壁的成分之一，覆蓋于細胞壁的黏肽上，耐熱性較強，可引起機體微循環(huán)障礙等。相關調查結果顯示，降鈣素原、血乳酸、內毒素水平隨著病情的加重水平隨之上升，可作為評估重癥肺炎合并膿毒癥病情嚴重程度的指標。本研究結果發(fā)現(xiàn)，隨著膿毒癥患者病情的加重患者血清中內毒素水平隨之升高，內毒素水平在重度膿毒癥患者血清中呈現(xiàn)高表達，且其水平變化和膿毒癥患者腸道細菌紊亂呈現(xiàn)出相關性，可用于膿毒癥患者腸道細菌紊亂的診斷。

圖1 PCT、D-乳酸、內毒素相關性分析圖

綜上所述，本文中對膿毒癥患者腸道細菌紊亂與PCT、D-乳酸、內毒素的關系研究結果發(fā)現(xiàn)，PCT、D-乳酸、內毒素在膿毒癥腸道細菌紊亂患者血清中水平異常上升，且隨著病癥的不斷加重，PCT、D-乳酸、內毒素的水平隨之升高，有望成為診斷膿毒癥腸道細菌紊亂患者病情嚴重程度的臨床指標。