miRNA-132通過Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞成骨分化的研究

陳國勇 吳芳

[摘要]目的：探討miRNA-132通過Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化。方法：細(xì)胞培養(yǎng)，觀察牙周膜干細(xì)胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）形態(tài)。成骨誘導(dǎo)，檢測成骨樣分化情況。成脂誘導(dǎo)，檢測成脂分化情況。將PDLSCs細(xì)胞分為3組，分別為對照組、miRNA-132模擬組和miRNA-132抑制劑組，采用八肽膽囊收縮素（Cholecystokinin octapeptide，CCK-8）檢測PDLSCs細(xì)胞增殖，酶聯(lián)免疫檢測堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase protein，ALP）活性，茜素紅染色檢測礦化結(jié)節(jié)沉積，采用實時熒光定量PCR（Real-time quantitative PCR，qRT-PCR）法檢測成骨相關(guān)基因，采用Western blot檢測Wnt/β-catenin相關(guān)通路蛋白。結(jié)果：miRNA-132模擬組的PDLSCs細(xì)胞增殖能力、ALP活性及礦化結(jié)節(jié)數(shù)量顯著高于對照組，miRNA-132抑制劑組明顯低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。miRNA-132模擬組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯高于對照組，miRNA-132抑制劑組顯著低于對照組和miRNA-132模擬組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。miRNA-132模擬組中的GSK3β和β-catenin蛋白的表達(dá)明顯高于對照組，miRNA-132抑制劑組明顯低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。XAV-939組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯低于對照組，miRNA-132模擬組表達(dá)高于對照組和XAV-939組，miRNA-132模擬組+XAV-939組表達(dá)高于XAV-939組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：過表達(dá)miRNA-132可以促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化，抑制miRNA-132表達(dá)從而抑制了人牙周膜干細(xì)胞的成骨分化，miRNA-132調(diào)節(jié)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化，其機(jī)制可能是通過Wnt/β-catenin信號通路來實現(xiàn)的。

[關(guān)鍵詞]miRNA-132;Wnt/β-catenin;牙周膜干細(xì)胞;成骨分化;ALP;Runx2;OCN

[中圖分類號]R780.2? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2022）06-0088-05

miRNA-132 Promotes Osteogenic Differentiation of Periodontal Ligament Stem Cells through Wnt/β-catenin Signaling Pathway

CHEN Guoyong，WU Fang

（Department of Stomatology，Zhuzhou Central Hospital，Zhuzhou 412007，Hunan，China）

Abstract： Objective? To investigate the effect of miRNA-132 on osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells through Wnt / β - catenin signaling pathway. Methods? The morphology of PDLSCs was observed by cell culture. Osteogenic induction and osteogenic differentiation were detected. Adipogenic induction and adipogenic differentiation were detected. PDLSCs cells were divided into three groups： the control group， the miRNA-132 simulation group and the miRNA-132 inhibitor group. The proliferation of PDLSCs cells was detected by CCK-8. ALP activity was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Mineralized nodule deposition was detected by alizarin red staining. Osteogenesis related genes were detected by qRT-PCR， and Wnt/β-catenin related pathway protein was detected by Western blot. Results? TThe proliferation ability， ALP activity and the number of mineralized nodules of PDLSCs in the miRNA-132 simulation group were significantly higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The miRNA-132 inhibitor group was significantly lower than the control group and miRNA-132 simulation group （P<0.05）. The relative expression of ALP， Runx2， OCN and Osterix mRNA in the miRNA-132-132 simulation group was significantly higher than those in the control group， and the miRNA-132 inhibitor group was significantly lower than the control group and miRNA-132 simulation group （P<0.05）. The expression of GSK3β and β-catenin protein in the miRNA-132 simulation group was significantly higher those that in control group， and the miRNA-132 inhibitor group was significantly lower than the control group and miRNA-132 simulation group （P<0.05）. The relative expression of ALP， Runx2， OCN and Osterix mRNA in the XAV-939 group was significantly lower than those in the control group （P<0.05）. The expression in the miRNA-132 simulation group was higher than those in the control group and the XAV-939 group （P<0.05）. The expression in the miRNA-132 simulation + XAV-939 group was higher than those in the XAV-939 group （P<0.05）. Conclusion? Overexpression of miRNA-132 can promote the osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells， and inhibit the expression of miRNA-132， thus inhibiting the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells. The mechanism of miRNA-132 regulating the osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells may be through Wnt/β-catenin signaling pathway.

Key words： miRNA-132; Wnt/β-Catenin; PDLSCs; osteogenic differentiation; ALP; Runx2; OCN

牙周炎是一種與微生物相關(guān)、并由宿主介導(dǎo)，最終導(dǎo)致牙周附著喪失的慢性炎癥性疾病，主要表現(xiàn)為牙周韌帶組織、牙骨質(zhì)、牙槽骨損傷和牙齒松動脫落，是引起牙齒缺失的主要原因[1]。目前，高達(dá)40%以上的人群存在牙周炎疾病，高發(fā)人群主要集中在35歲以上，年齡越大發(fā)生牙周炎的幾率越高[2]。牙周組織完全不同于其他組織，一旦牙周骨組織喪失，憑借自身的修復(fù)能力或者簡單的牙周治療無法實現(xiàn)再生，主要原因是由于在牙周炎的微環(huán)境中牙周膜干細(xì)胞（Periodontal ligament stem cells，PDLSCs）的分化能力受損導(dǎo)致[3]。PDLSCs具有多向分化潛能，可以維持自身干性和自我更新能力，被認(rèn)為是組織工程中具有再生組織的種子細(xì)胞[4]。Wnt信號通路是存在于多細(xì)胞真核生物中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，分為經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路和非經(jīng)典Wnt/Ca2+、Wnt/PCP等信號通路[5]。其中Wnt/β-catenin信號通路是目前研究最多的一條通路，在胚胎分化、中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成、干細(xì)胞的定向分化中發(fā)揮著重要的作用[6]。miRNA在生物學(xué)調(diào)節(jié)方面起著重要的作用，miRNA-132被認(rèn)為是調(diào)節(jié)血管生長的開關(guān)，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用[7]。但關(guān)于在牙周膜干細(xì)胞的成骨分化中的相關(guān)報道較少，因此，本研究旨在探討miRNA-132是否可通過激活Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)PDLSCs的成骨分化，以期為臨床治療牙周炎提供一定的理論依據(jù)。

1? 材料和方法

1.1 主要試劑：胎牛血清購自美國Gibco公司，miRNA-132 mimics、miRNA-132 inhibitor購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司，Wnt通路抑制劑XAV-939購自南京建成科技有限公，磷酸鹽緩沖液購自廣州賽國生物科技有限公司，胰蛋白酶購自碧云天生物技術(shù)有限公司，茜素紅染色液、油紅O染色液購自天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠，CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑盒購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 取材：收集臨床上年齡18～35歲的非牙周炎患者25例，均為無炎癥的阻生智齒或正畸牙，經(jīng)患者同意，知情確認(rèn)，并且通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。收集后放入含有少量20%胎牛血清完全培養(yǎng)基的無菌培養(yǎng)皿中，準(zhǔn)備實驗操作使用。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)：將牙齒轉(zhuǎn)移至無菌培養(yǎng)皿，用5%雙抗的PBS沖洗牙齒，并滴加培養(yǎng)液，采用無菌手術(shù)刀片刮取根中1/3牙周膜組織，放置培養(yǎng)瓶底部，分化離純原代PDLSCs，在5% CO2的37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，原代PDLSCs放置于1%抗生素和20%胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時進(jìn)行傳代培養(yǎng)，PBS沖洗，0.25%胰蛋白酶消化，使用移液槍吹打后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，離心處理，棄上清，新鮮培養(yǎng)基重懸，放在新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)基每3 d更新一次，第3～5代的PDLSCs用于后續(xù)實驗。

1.2.3 成骨誘導(dǎo)：將生長狀態(tài)良好的PDLSCs接種于6孔板中，觀察細(xì)胞的融合情況，當(dāng)達(dá)到60%時，更換成骨培養(yǎng)液，每3 d更換一次，21 d后，棄掉原培養(yǎng)液，PBS沖洗，4%多聚甲醛固定20 min，PBS再次沖洗，每孔加入2 ml的2%茜素紅染色液，40 min后，雙蒸水沖洗，顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.4 成脂誘導(dǎo)：將生長狀態(tài)良好的PDLSCs接種于6孔板中，觀察細(xì)胞的融合情況，當(dāng)達(dá)到60%時更換成骨培養(yǎng)液，每3 d更換一次，21 d后，棄掉原培養(yǎng)液，PBS沖洗，4%多聚甲醛固定20 min，PBS再次沖洗，每個孔加入2 ml的油紅O染色液，40 min后雙蒸水沖洗，顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.5 PDLSCs細(xì)胞增殖檢測：采用CCK-8檢測，將PDLSCs細(xì)胞分為3組，分別為對照組、miRNA-132模擬組和miRNA-132抑制劑組，對照組加入等量的PBS，miRNA-132模擬組和miRNA-132抑制劑組分別轉(zhuǎn)染miRNA-132 mimics、miRNA-132 inhibitor，孵育21 d。再將3組的PDLSCs消化、離心，重懸計數(shù)，加入適量完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為2×104個/毫升，24 h后更換培養(yǎng)基，觀察1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d六個時間的細(xì)胞增殖情況，棄掉原培養(yǎng)基，加CCK-8溶液，孵育45 min，酶標(biāo)儀450 mm下檢測OD值。

1.2.6 ALP活性檢測：將3組PDLSCs棄去培養(yǎng)液，PBS洗滌，將3組分別加入2 ml 0.2% TritonX-100，過夜，取上清，按照堿性磷酸酶（ALP）檢測試劑盒的說明書，進(jìn)行嚴(yán)格操作，3組各取5 μl置于96孔板中，加入雙蒸水30 μl，基質(zhì)液50 μl，緩沖液50 μl，0.02 mg/ml酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，加入150 μl顯色劑，充分混勻，酶聯(lián)免疫檢測儀檢測520 nm下測定吸光度。

1.2.7 茜素紅染色檢測礦化結(jié)節(jié)沉積：將生長狀態(tài)良好的PDLSCs接種于6孔板中，21 d后，4%多聚甲醛固定后，茜素紅染色，顯微鏡下觀察并拍照，然后10%氯化十六烷基吡啶加入染色板中溶解礦物結(jié)節(jié)，用酶標(biāo)儀在562 nm處測定溶液的吸光度，以定量礦化基質(zhì)沉積的含量。

1.2.8 成骨相關(guān)基因檢測：采用qRT-PCR法檢測成骨相關(guān)基因ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)量，對3組細(xì)胞進(jìn)行RNA提取，再進(jìn)行RNA純化，采用超微量分光光度計測定RNA的濃度和純度，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，使用Real Time PCR擴(kuò)增儀，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，然后進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d，檢測不同組Runx2、OSX、ALP的表達(dá)水平。以GAPDH作為內(nèi)參基因。為了驗證miRNA-132可通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控PDLSCs的成骨分化，取PDLSCs細(xì)胞將其分成4組，分別為對照組、XAV-939組、miRNA-132模擬組和miRNA-132模擬組+XAV-939組。對照組加入等量的PBS，XAV-939組轉(zhuǎn)染XAV-939抑制劑，miRNA-132模擬組轉(zhuǎn)染miRNA-132 mimics，miRNA-132模擬組+XAV-939組同時轉(zhuǎn)染miRNA-132 mimics和XAV-939抑制劑，孵育21 d，具體成骨相關(guān)基因檢測按照以上方法進(jìn)行操作，具體引物序列見表1。

1.2.9 Wnt/β-catenin相關(guān)通路蛋白檢測：采用Western blot檢測，將三組轉(zhuǎn)染并成骨誘導(dǎo)后的PDLSCs加入RIPA裂解，用BCA蛋白檢測試劑盒對收集的總蛋白濃度進(jìn)行定量，所有蛋白樣品通過10% SDS-PAGE膠分離，轉(zhuǎn)移到PVDF膜，依次加入相應(yīng)的GSK3β（1：500稀釋）和β-catenin（1：500稀釋）一抗，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG（1：1 000稀釋）室溫避光孵育，TBST清洗，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物試劑盒和化學(xué)成像系統(tǒng)檢測免疫反應(yīng)蛋白。用Image J軟件對蛋白表達(dá)進(jìn)行定量，GAPDH作為內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，符合正態(tài)分布的定量數(shù)據(jù)使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）描述，兩組資料間比較采用t檢驗進(jìn)行，多組資料間比較采用SNK-q檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 PDLSCs形態(tài)學(xué)觀察：原代細(xì)胞培養(yǎng)7～14 d顯微鏡觀察，組織塊周圍有牙周膜細(xì)胞爬出，見圖1A;分離純化后的PDLSCs，24 d后細(xì)胞長滿至孔底2/3，細(xì)胞體積小，胞體豐滿，部分呈長梭形，部分呈圓形和橢圓形，核漿多，胞漿少，傳代后細(xì)胞呈旋渦狀和放射狀排列，見圖1B。

2.2 PDLSCs的鑒定：茜素紅染色顯示，體外礦化誘導(dǎo)的條件下，PDLSCs形成礦化結(jié)節(jié)，可向成骨樣分化的潛能，見圖2A;油紅O染色結(jié)果顯示，體外成脂誘導(dǎo)條件下，形成油紅O染色的脂滴，可向成脂分化的潛能，見圖2B。

2.3 miRNA-132對PDLSCs細(xì)胞增殖的影響：CCK-8檢測結(jié)果表明，miRNA-132模擬組的PDLSCs細(xì)胞增殖能力明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132抑制劑組的PDLSCs細(xì)胞增殖能力顯著低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖3。

2.4 miRNA-132對ALP活性和礦化結(jié)節(jié)沉積的影響：ALP活性檢測結(jié)果顯示，miRNA-132模擬組中的ALP活性明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132抑制劑組中的ALP活性顯著低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見圖4。茜素紅染色檢測結(jié)果顯示，miRNA-132模擬組中礦化結(jié)節(jié)的數(shù)量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132抑制劑組中礦化結(jié)節(jié)的數(shù)量明顯低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見圖5。

2.5 miRNA-132對PDLSCs成骨相關(guān)基因表達(dá)的影響：miRNA-132模擬組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132抑制劑組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)顯著低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖6。

2.6 miRNA-132對Wnt/β-catenin相關(guān)通路蛋白表達(dá)的影響：miRNA-132模擬組中的GSK3β和β-catenin蛋白的表達(dá)明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132抑制劑組中的GSK3β和β-catenin蛋白的表達(dá)顯著低于對照組和miRNA-132模擬組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖7。

2.7 miRNA-132可通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控PDLSCs的成骨分化：XAV-939組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132模擬組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯高于對照組和XAV-939組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;miRNA-132模擬組+XAV-939組中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)高于XAV-939組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖8。

3? 討論

牙周膜是位于牙骨質(zhì)和牙槽骨之間的致密非礦化結(jié)締組織，在牙周組織的維持和再生中起著非常重要的作用[8]。而PDLSCs是一種多向分化潛能的干細(xì)胞，可以向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成牙細(xì)胞方向分化，并且可以礦化骨組織[9]。為實現(xiàn)口腔骨組織維持、修復(fù)、骨再生以及正畸牙周改建提供重要的臨床應(yīng)用價值，PDLSCs成骨向分化是多種調(diào)控介質(zhì)和行為模式的生物學(xué)過程，為牙周組織或其他組織結(jié)構(gòu)再生提供了一定的理論依據(jù)。相關(guān)研究表明，miR-125b通過靶向下調(diào)Cx43而抑制PDLSCs的成骨分化[10]，miR-124可靶向調(diào)控OSX對PDLSCs成骨分化能力產(chǎn)生抑制作用，提示miR-124在PDLSCs組織修復(fù)再生過程中發(fā)揮重要作用[11]。但miRNA-132通過Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化確未出現(xiàn)相關(guān)報道，因此對其進(jìn)行探討，分析miRNA-132與Wnt/β-catenin信號通路的關(guān)系以及對牙周膜干細(xì)胞的成骨分化作用。

miRNA的作用多種多樣，并具有高度的保守型，通過調(diào)控基因的表達(dá)，參與細(xì)胞的分化和組織發(fā)育[12]。近年來，miRNA與在干細(xì)胞成骨分化方面取得了較大的進(jìn)展，相關(guān)研究表明，糖尿病微環(huán)境下BMSCs，miRNA-31處于高表達(dá)，并可以抑制BMSCs的成骨分化[13]。也有研究報道，miRNA-30a作為調(diào)控MSC軟骨分化的潛在靶點，對于軟骨再生和軟骨發(fā)育相關(guān)疾病的應(yīng)用和防治具有重要意義[14]。所以說明miRNA作為一種重要的調(diào)節(jié)因子參與干細(xì)胞骨向分化。本研究主要對miRNA-132促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化進(jìn)行探討，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miRNA-132可以促進(jìn)PDLSCs細(xì)胞的增殖能力，抑制miRNA-132的表達(dá)PDLSCs細(xì)胞增殖能力出現(xiàn)明顯的降低。同時對ALP活性和礦化結(jié)節(jié)沉積情況進(jìn)行對比分析發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miRNA-132可以促進(jìn)ALP活性和礦化結(jié)節(jié)的數(shù)量，抑制miRNA-132的表達(dá)，明顯降低了ALP活性和礦化結(jié)節(jié)的數(shù)量。ALP屬于一種非常重要的水解酶，在成骨細(xì)胞分化過程中起著至關(guān)重要的作用，反應(yīng)成骨細(xì)胞啟動鈣化程序與否，可以作為成骨分化的早期標(biāo)志物[15]。礦化結(jié)節(jié)的形成表明細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，且具有新骨形成的潛力[16]。

本研究通過PDLSCs成骨相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行驗證，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miRNA-132可以使ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯升高，抑制miRNA-132的表達(dá)，可以降低ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)。又通過miRNA-132對Wnt/β-catenin相關(guān)通路蛋白表達(dá)進(jìn)行驗證，過表達(dá)miRNA-132可以使的GSK3β和β-catenin蛋白的表達(dá)明顯升高，抑制miRNA-132的表達(dá)，可以降低GSK3β和β-catenin蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步證明miRNA-132通過Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化的影響，發(fā)現(xiàn)抑制Wnt/β-catenin信號通路，ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)明顯降低;同時對miRNA-132和Wnt/β-catenin信號通路進(jìn)行抑制，發(fā)現(xiàn)ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相對表達(dá)高于單純抑制Wnt/β-catenin信號通路表達(dá)的一組。相關(guān)研究表明，MicroRNA-22通過靶向HDAC6提高ALP、Runx2、OCN和Osterix的表達(dá)，促進(jìn)人牙周膜干細(xì)胞的成骨分化[17]。也有研究表明，MicroRNA-374a通過直接靶向APC/Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化[18]。另有研究報道，MicroRNA-21通過靶向Smad5調(diào)控牙周膜干細(xì)胞的成骨分化[19]。因此說明miRNA通過靶向不同的信號通路具有調(diào)控PDLSCs成骨分化的作用。

總之，過表達(dá)miRNA-132可以促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化，抑制miRNA-132表達(dá)從而抑制了人牙周膜干細(xì)胞的成骨分化，miRNA-132調(diào)節(jié)牙周膜干細(xì)胞的成骨分化，其機(jī)制可能是通過Wnt/β-catenin信號通路來實現(xiàn)的。

[參考文獻(xiàn)]

[1]姚霜，劉曉君，周治，等.咬合調(diào)整對牙周炎正畸治療患者牙周狀況的影響[J].國際口腔醫(yī)學(xué)雜志，2017，44（1）：50-54.

[2]李錚，季瑾，劉洋，等.不同嚴(yán)重程度牙周炎患牙對齦下刮治后根面牙石殘留率的影響[J].實用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2019，35（3）：385-389.

[3]Zheng Y F，Li X B，Huang Y P，et al.The circular RNA landscape of periodontal ligament stem cells during osteogenesis[J].J Periodontol，2017，88（9）：906-914.

[4]Wang Q，Ding G，Xu X.Periodontal ligament stem cells regulate apoptosis of neutrophils[J].Open Med（Wars），2017，12：19-23.

[5]Zhang F，Liu C L，Tong M M，et al.Both Wnt/β-catenin and ERK5 signaling pathways are involved in BDNF-induced differentiation of pluripotent stem cells into neural stem cells[J].Neurosci Lett，2019，708：134345.

[6]Li G，Liu J Y，Wang Y Y，et al.LNGFR targets the Wnt/β-catenin pathway and promotes the osteogenic differentiation in rat ectomesenchymal stem cells[J].Sci Rep，2017，7（1）：11021.

[7]Liu G F，Zhang S H，Li X F，et al.Overexpression of microRNA-132 enhances the radiosensitivity of cervical cancer cells by down-regulating Bmi-1[J].Oncotarget，2017，8（46）：80757-80769.

[8]Zheng M M，Zhang F P，F(xiàn)an W G，et al.Suppression of osteogenic differentiation and mitochondrial function change in human periodontal ligament stem cells by melatonin at physiological levels[J].PeerJ，2020，8：e8663.

[9]Gu X G，Li M Y，Jin Y，et al.Identification and integrated analysis of differentially expressed lncRNAs and circRNAs reveal the potential ceRNA networks during PDLSC osteogenic differentiation[J].BMC Genet，2017，18（1）：100.

[10]杜莉，曹偉靖，田瑩，等.MicroRNA-125b對人牙周膜干細(xì)胞成骨分化的影響[J].上?？谇会t(yī)學(xué)，2018，27（1）：11-17.

[11]王獻(xiàn)剛，馮保靜.miR-124靶向OSX對牙周膜干細(xì)胞成骨分化能力的調(diào)控作用[J].中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志，2020，18（2）：70-75.

[12]Chang M，Lin H，F(xiàn)u H，et al.MicroRNA-195-5p regulates osteogenic differentiation of periodontal ligament cells under mechanical loading[J].J Cell Physiol，2017，232（12）：3762-3774.

[13]范德生，甄蕾，汪黎明.miRNA-31對糖尿病小鼠來源骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外成骨分化的影響[J].口腔頜面外科雜志，2019，29（3）：137-141.

[14]王運佳，張宏其，余洪貴，等.MicroRNA-30a通過Sox9調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化的研究[J].中國矯形外科雜志，2018，26（20）：1887-1892.

[15]Niu C G，Yuan K Y，Ma R，et al.Gold nanoparticles promote osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells via the p38 MAPK signaling pathway[J].Mol Med Rep，2017，16（4）：4879-4886.

[16]Wang P，Wang Y E，Tang W Z，et al.Bone morphogenetic protein-9 enhances osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells via the JNK pathway[J].PLoS One，2017，12（1）：e0169123.

[17]Yan G Q，Wang X，Yang F，et al.MicroRNA-22 promoted osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells by targeting HDAC6[J].J Cell Biochem，2017，118（7）：1653-1658.

[18]Cheng Y，Cao F，Wu J，et al.MicroRNA-374a promotes osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells through directly targeting APC/Wnt/β-catenin signaling pathway[J].Int J of Clin Exp Pathol，2017，10（6）：6444-6452.

[19]Wei F L，Yang S Y，Guo Q Y，et al. MicroRNA-21 regulates osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells by targeting Smad5[J].Sci Rep，2017，7（1）：16608.

[收稿日期]2021-04-19

本文引用格式：陳國勇，吳芳.miRNA-132通過Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞成骨分化的研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2022，31（6）：88-92，109.