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    經(jīng)典名方易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)HPLC特征圖譜的建立及量值傳遞研究

    2022-07-12 09:11:14李華露李秋桐劉華蘭劉陶世嵇晶程建明郭青

    李華露,李秋桐,劉華蘭,劉陶世,嵇晶,程建明,郭青

    (1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇 南京 210023;2.江蘇省經(jīng)典名方工程研究中心,江蘇 南京 210023;3.江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,江蘇 南京 210019)

    易黃湯是國(guó)家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的首批100首古代經(jīng)典名方目錄之一,源自明末清初著名醫(yī)家傅山所著《傅青主女科》,由山藥(一兩,炒)、芡實(shí)(一兩,炒)、白果(十枚,碎)、黃柏(二錢,鹽水炒)和車前子(一錢,酒炒)組成,具有固腎止帶和清熱祛濕的功效,是治療婦科帶下病的常用方[1]。方劑中山藥、芡實(shí)專補(bǔ)任脈之虛,又能利水,為君藥。白果收澀止帶,兼除濕熱,為臣藥。用少量黃柏苦寒入腎,清熱燥濕,車前子甘寒,清熱利濕,均為佐藥。諸藥合用,重在補(bǔ)澀,輔以清利;健脾益腎,清熱祛濕,則帶下自愈[2]。易黃湯在臨床上被廣泛應(yīng)用于治療陰道炎、盆腔炎、宮頸炎等腎虛濕熱型帶下病[3-4]。

    目前,關(guān)于易黃湯的研究多集中于藥理及臨床方面[5-6],關(guān)于其物質(zhì)基準(zhǔn)研究的報(bào)道較少?!敖?jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)”是經(jīng)典名方復(fù)方制劑生產(chǎn)的化學(xué)基準(zhǔn)和生物效應(yīng)基準(zhǔn),其特征圖譜及量值傳遞分析是物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量研究的關(guān)鍵。易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)需遵循傳統(tǒng)處方的組成和煎藥方法進(jìn)行制備,復(fù)方制劑易黃湯顆粒工藝的確定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù)皆來自“易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)”的研究[7]。易黃湯作為一個(gè)由5味藥組成的中藥復(fù)方,其質(zhì)量控制及量值傳遞研究應(yīng)以全方化學(xué)組成為研究重點(diǎn),而目前對(duì)易黃湯的含量測(cè)定及量值傳遞研究?jī)H涉及京尼平苷酸和鹽酸小檗堿2個(gè)成分[8-9],其研究結(jié)果不足以達(dá)到對(duì)全方進(jìn)行較好質(zhì)控的要求。本研究在制備15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,擬建立易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的HPLC特征圖譜和4種指標(biāo)性成分(尿囊素、沒食子酸、京尼平苷酸和小檗堿)的HPLC含量測(cè)定方法,并對(duì)4種成分在飲片-湯劑-物質(zhì)基準(zhǔn)的量值傳遞進(jìn)行研究,為易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和易黃湯復(fù)方制劑的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 儀器

    2 L陶瓷藥罐(配套電爐底座FTS-10A功率武火500 W,文火200 W,壺福有限公司)、2695型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司);2998PDA型紫外檢測(cè)器;FA1104型電子分析天平(上海天平儀器廠);YP20002型電子天平(上海越平學(xué)儀器有限公司);DK-98-Ⅱ型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司);DGG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);FW100型高速粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司);YWLG-10型凍干機(jī)(南京研沃生物有限公司)。

    1.2 試藥

    乙腈(色譜純,德國(guó)Merck公司,批號(hào):JA084630)、醋酸(色譜純,美國(guó)Fisher公司,批號(hào):104645)、甲醇(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):20200105)、水為自制超純水。尿囊素(批號(hào):111501-200202,純度≥98%)、沒食子酸(批號(hào):110831-201605,純度≥98%)、京尼平苷酸(批號(hào):111828-201805,純度98.1%)對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;黃柏堿(批號(hào):P11J9L65514,純度≥98%)、小檗堿(批號(hào):Y31J9H67024,純度≥98%)對(duì)照品均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。

    山藥藥材為薯蕷科植物薯蕷DioscoteaoppositeThunb.的干燥根莖;芡實(shí)藥材為睡蓮科植物芡EuryaleferoxSalisb.的干燥成熟種仁;白果藥材為銀杏科銀杏屬植物銀杏GinkgobilobaL.的干燥成熟種子;車前子藥材為車前科車前屬植物車前PlantagoasiaticaL.的干燥成熟種子;黃柏藥材為蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchinenseSchneid.的干燥樹皮,上述藥材經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)巢建國(guó)教授鑒定,均符合2020年版《中國(guó)藥典》相關(guān)藥材的質(zhì)量要求。

    炒山藥、炒芡實(shí)、炒白果、酒車前子和鹽黃柏飲片均為自制,其炮制加工方法見表1。

    表1 易黃湯飲片來源Table 1 Sources of Yihuang Decoction pieces

    2020年版《中國(guó)藥典》中僅載有車前子和鹽車前子,因經(jīng)典名方易黃湯中車前子規(guī)定為酒車前子,故為保證與原有藥方同等功效,本研究按酒炙法炮制車前子。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[10],酒炙后,車前子中的京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量均較生品顯著增加,在出膏率方面,酒炙車前子的出膏率也高于生車前子。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 易黃湯15批物質(zhì)基準(zhǔn)的制備

    按照課題組前期研究建立的易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)最佳制備工藝制備易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn),根據(jù)隨機(jī)數(shù)表法對(duì)5味飲片進(jìn)行隨機(jī)組合及排序,15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)飲片的批號(hào)見表2。取炒白果粉碎過1號(hào)篩,酒車前子包煎,同其它飲片置于藥罐中煎煮2次,第1次加8倍量水,浸泡30 min,加蓋煎煮30 min;第2次取藥渣再加7倍量水煎煮25 min,趁熱濾過。合并2次濾液減壓濃縮至生藥含量為1.0 g·mL-1,冷凍干燥48 h,將得到的凍干粉密封于20 mL棕色西林瓶中,即分別得到15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)所對(duì)應(yīng)實(shí)物。

    表2 易黃湯15批物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)的飲片批次Table 2 15 batches of Yihuang Decoction substance benchmark corresponding to the batches of decoction pieces

    2.2 易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)HPLC特征圖譜的建立

    2.2.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以0.1%乙酸水為流動(dòng)相A,乙腈為流動(dòng)相B,梯度洗脫:0~10 min,2%B;10~15 min,2%~3%B;15~25 min,3%~10%B;25~35 min,10%~18%B;35~46 min,18%~28%B;46~60 min,28%~65%B;60~63 min,65%~95%B;63~64 min,2%B;64~70 min,2%B。檢測(cè)波長(zhǎng):0~6.5 min,205 nm;6.5~25 min,280 nm;25~35 min,254 nm;35~70 min,280 nm。流速0.5 mL·min-1;柱溫25 ℃;進(jìn)樣量10 μL。特征圖譜見圖1。

    2.2.2 供試品及對(duì)照品溶液的制備

    2.2.2.1 物質(zhì)基準(zhǔn)供試品溶液的制備 取易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入15%甲醇50 mL,稱定質(zhì)量,超聲60 min(功率250 W,頻率40 kHz),放冷,再稱定質(zhì)量,用15%甲醇補(bǔ)足失質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.2.2.2 單味飲片和陰性對(duì)照供試品溶液的制備 分別稱取處方量的炒山藥、炒芡實(shí)、炒白果、酒車前子、鹽黃柏5味飲片,按2.1項(xiàng)下易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)制備工藝和2.2.2.1項(xiàng)下的處理方法,得單味飲片供試品溶液;同法按處方量分別制備缺炒山藥、缺炒芡實(shí)、缺炒白果、缺酒車前子、缺鹽黃柏的5個(gè)陰性對(duì)照供試品溶液。

    2.2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 稱定尿囊素、沒食子酸、京尼平苷酸、黃柏堿、小檗堿適量,置于棕色容量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。

    2.2.3 特征圖譜方法學(xué)考察

    2.2.3.1 精密度考察 取易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉,按2.2.2.1項(xiàng)下方法制備一份供試品溶液,按2.2.1項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次。特征圖譜相似度>0.98;特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.61%,相對(duì)峰面積RSD均小于4.31%,表明儀器的精密度良好。

    2.2.3.2 重復(fù)性考察 取易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉,制備供試品溶液6份,進(jìn)樣分析,特征圖譜相似度>0.96;特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.12%,相對(duì)峰面積RSD均小于1.25%,表明方法的重復(fù)性良好。

    2.2.3.3 穩(wěn)定性考察 取易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉,制備供試品溶液1份,分別于樣品制備后0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣,特征圖譜相似度>0.93;特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.21%,相對(duì)峰面積RSD均小于4.42%,表明樣品的穩(wěn)定性良好。

    2.2.4 易黃湯15批物質(zhì)基準(zhǔn)的對(duì)照特征圖譜及其相似度評(píng)價(jià) 將樣品所得色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012A版)軟件進(jìn)行分析,對(duì)照?qǐng)D譜采用中位數(shù)法生成,使用多點(diǎn)校正對(duì)色譜峰進(jìn)行匹配,生成全譜峰匹配圖。供試品特征圖譜中應(yīng)呈現(xiàn)與參照物色譜峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)的色譜峰。其中與參照物峰(峰6,京尼平苷酸)保留時(shí)間對(duì)應(yīng)的峰為S峰,分別在相對(duì)保留時(shí)間為0.161(峰1)、0.206(峰2,尿囊素)、0.444(峰3)、0.743(峰4,沒食子酸)、0.932(峰5)、1.000(峰6,京尼平苷酸)、1.314(峰7,黃柏堿)、1.332(峰8)、1.383(峰9)、1.402(峰10)、1.460(峰11)、1.485(峰12)、1.671(峰13)、1.688(峰14)、1.991(峰15,小檗堿)左右處呈現(xiàn)15個(gè)共有峰,見圖1。

    15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的特征圖譜見圖1,特征圖譜全譜圖相似度結(jié)果見表3。從結(jié)果可知,15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的特征圖譜相似度>0.96,表明易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的制備工藝穩(wěn)定,不同批次間的差異較小。

    表3 易黃湯15批物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜的相似度Table 3 The similarity of 15 batches of Yihuang Decoction substance benchmark

    通過分別將5種單味飲片樣品、缺單味飲片陰性樣品和全方物質(zhì)基準(zhǔn)樣品特征圖譜各擬合出1張對(duì)照?qǐng)D譜,對(duì)易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜共有峰進(jìn)行色譜峰歸屬,見圖2。通過比對(duì)單味飲片樣品、缺單味飲片的陰性樣品和全方物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)照?qǐng)D譜,發(fā)現(xiàn)單味藥的特征峰均可傳遞到全方物質(zhì)基準(zhǔn)的對(duì)照譜圖中。物質(zhì)基準(zhǔn)中峰1、峰2、峰3、峰5歸屬于炒山藥;峰4歸屬于炒芡實(shí);峰6歸屬于酒車前子;峰8、峰10歸屬于炒白果;峰7、峰9、峰11、峰12、峰13、峰14、峰15歸屬于鹽黃柏。

    2.3 易黃湯中4種指標(biāo)性成分的轉(zhuǎn)移率及含量測(cè)定

    按2020版《中國(guó)藥典》一部含量測(cè)定方法[11]測(cè)定酒車前子中京尼平苷酸、鹽黃柏中小檗堿的含量;山藥中尿囊素和芡實(shí)中沒食子酸的含量測(cè)定方法如下。

    2.3.1 色譜條件

    2.3.1.1 HPLC法測(cè)定炒山藥飲片中尿囊素的含量 Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以純水為流動(dòng)相A,以甲醇-乙腈(1∶1)為流動(dòng)相B,梯度洗脫:0~15 min,2%~4%B;15~22 min,4%~5%B;22~25 min,5%~15%B;25~30 min,15%~35%B;30~40 min,35%~60%B;40~45 min,60%~90%B;檢測(cè)波長(zhǎng):205 nm;流速:0.8 mL·min-1;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

    2.3.1.2 HPLC法測(cè)定炒芡實(shí)飲片中沒食子酸的含量 Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以0.1%乙酸水為流動(dòng)相A,以乙腈為流動(dòng)相B,梯度洗脫:0~15 min,2%~10%B;15~20 min,10%~15%B;20~25 min,15%~28%B;25~40 min,28%~65%B;40~45 min,65%~95%B;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;流速:0.5 mL·min-1;柱溫:28 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

    2.3.1.3 HPLC法測(cè)定易黃湯水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中4種指標(biāo)性成分含量 Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以0.1%乙酸水為流動(dòng)相A,乙腈為流動(dòng)相B,梯度洗脫:0~10 min,2%B;10~15 min,2%~3%B;15~25 min,3%~10%B;25~35 min,10%~18%B;35~46 min,18%~28%B;46~60 min,28%~65%B;60~63 min,65%~95%B;63~64 min,2%B;64~70 min,2%B。檢測(cè)波長(zhǎng)分別為205 nm(尿囊素)、254 nm(京尼平苷酸)、280 nm(沒食子酸、小檗堿)。流速0.5 mL·min-1;柱溫25 ℃;進(jìn)樣量10 μL。各圖譜見圖3。

    注:2.尿囊素;4.沒食子酸;6.京尼平苷酸;7.黃柏堿;15.小檗堿圖1 混合對(duì)照品HPLC圖(A)及15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)HPLC特征圖譜(B)Fig.1 HPLC of mixed control solution (A) and characteristic chromatogram of 15 batches of Yihuang Decoction substance benchmark (B)

    注:A.炒山藥單味樣品;B.炒芡實(shí)單味樣品;C.炒白果單味樣品;D.酒車前子單味樣品;E.鹽黃柏單味樣品;F.缺炒山藥陰性樣品;G.缺炒芡實(shí)陰性樣品;H.缺炒白果陰性樣品;I.缺酒車前子陰性樣品;J.缺鹽黃柏陰性樣品;K.易黃湯全方樣品圖2 易黃湯專屬性考察HPLC圖Fig.2 HPLC chromatogram of Yihuang Decoction for specific investigation

    注:A.混合對(duì)照品;B.205 nm;C.254 nm;D.280 nm;2.尿囊素;4.沒食子酸;6.京尼平苷酸;15.小檗堿圖3 易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)中4種成分HPLC圖Fig.3 HPLC chromatograms of four ingredients of Yihuang Decoction substance benchmark

    2.3.2 供試品及對(duì)照品溶液的制備

    2.3.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取尿囊素、沒食子酸、京尼平苷酸、小檗堿對(duì)照品適量,精密稱定,加50%甲醇制成質(zhì)量濃度分別為1.092、0.802、1.036、1.132 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

    2.3.2.2 單味飲片供試品溶液的制備 炒山藥:取本品粉末(過3號(hào)篩)約1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入15%甲醇50 mL,稱定質(zhì)量,超聲60 min(功率250 W,頻率40 kHz),放冷,再稱定質(zhì)量,用15%甲醇補(bǔ)足失質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    炒芡實(shí):取本品粉末(過3號(hào)篩)約1 g,精密稱定,置圓底燒瓶中,精密加入純水100 mL,稱定質(zhì)量,加熱回流2 h,放冷,再稱定質(zhì)量,用純水補(bǔ)足失質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    酒車前子和鹽黃柏供試品的制備方法同《中國(guó)藥典》對(duì)應(yīng)的含量測(cè)定項(xiàng)下[11]。

    2.3.2.3 水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)供試品溶液的制備 水煎液供試品溶液的制備:精密吸取水煎液5 mL于10 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻,靜置30 min,10 000 r·min-1離心10 min,取上清液過0.45 μm微孔濾膜,即得。

    物質(zhì)基準(zhǔn)供試品溶液的制備:同2.2.2.1項(xiàng)。

    2.3.3 指標(biāo)性成分含量測(cè)定的方法學(xué)考察 京尼平苷酸和毛蕊花糖苷均為2020年版《中國(guó)藥典》中車前子藥材含量測(cè)定的指標(biāo),但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[12],車前子在煎煮過程中,毛蕊花糖苷會(huì)部分轉(zhuǎn)化為異毛蕊花糖苷,而京尼平苷酸則相對(duì)穩(wěn)定。同時(shí)京尼平苷酸作為環(huán)烯醚萜類化合物,是車前子的主要有效成分。另外由于京尼平苷酸和毛蕊花糖苷溶解性的差異,中藥水煎劑中京尼平苷酸的溶出相對(duì)較多,故綜上選擇京尼平苷酸作為含量測(cè)定的指標(biāo)。

    根據(jù)2.2.1項(xiàng)下色譜條件建立易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)中尿囊素、沒食子酸、京尼平苷酸和小檗堿的含量測(cè)定方法,方法學(xué)考察內(nèi)容及結(jié)果見表4。結(jié)果顯示易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)中尿囊素、沒食子酸、京尼平苷酸及小檗堿含量測(cè)定方法專屬性、線性、儀器精密度、方法重復(fù)性、樣品穩(wěn)定性及方法加樣回收率均良好。

    表4 含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果(%,n=6)Table 4 Assay methodology (%,n=6)

    2.3.4 浸膏轉(zhuǎn)移率 按2.1項(xiàng)下的制備方法制備15批易黃湯水煎液,精密吸取50 mL于100 mL恒質(zhì)量后的蒸發(fā)皿中,水浴加熱成稠膏,真空干燥48 h以上至恒質(zhì)量,稱質(zhì)量,計(jì)算15批易黃湯的出膏率。水煎液出膏率=mx/M×100%。mx為干膏粉質(zhì)量,M為投料的飲片質(zhì)量。按2.1項(xiàng)下的制備方法制備15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉,將所得干粉進(jìn)行稱質(zhì)量,計(jì)算每批物質(zhì)基準(zhǔn)的干粉收得率。干粉收得率=my/M×100%。my為干粉質(zhì)量,M為投料的飲片質(zhì)量。浸膏轉(zhuǎn)移率=干粉收得率/水煎液出膏率×100%。

    2.3.5 易黃湯15批物質(zhì)基準(zhǔn)指標(biāo)成分含量測(cè)定及量值傳遞關(guān)系研究 按照2.3項(xiàng)下方法對(duì)炒山藥、炒芡實(shí)、酒車前子、鹽黃柏、15批易黃湯水煎液及物質(zhì)基準(zhǔn)進(jìn)行4種指標(biāo)性成分的含量測(cè)定,含量測(cè)定結(jié)果見表5~7,計(jì)算從飲片到水煎液和從水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉之間指標(biāo)性成分的轉(zhuǎn)移率,轉(zhuǎn)移率結(jié)果見表8~9。其中飲片到水煎液轉(zhuǎn)移率=m2/m1×100%;水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)轉(zhuǎn)移率=m3/m2×100%。其中m1為飲片中指標(biāo)性成分的總含量;m2為水煎液中指標(biāo)性成分的總含量;m3為凍干粉中指標(biāo)性成分的總含量。

    表5 飲片中指標(biāo)性成分的含量(%,n=2)Table 5 Content of index components in decoction pieces (%,n=2)

    表6 水煎液中指標(biāo)性成分的含量及出膏率(%,n=2)Table 6 Content of index components and extraction rate in Decoction (%,n=2)

    表7 物質(zhì)基準(zhǔn)中指標(biāo)性成分的含量及干粉得率(%,n=2)Table 7 Content of index components and dry powder yield in substance standard (%,n=2)

    表8 飲片到水煎液中指標(biāo)性成分的轉(zhuǎn)移率(%,n=2)Table 8 Transfer rate of index components from decoction pieces to Decoction (%,n=2)

    表9 水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)中指標(biāo)性成分的轉(zhuǎn)移率及浸膏轉(zhuǎn)移率(%,n=2)Table 9 Transfer rate of index components and extract from Decoction to substance standard (%,n=2)

    由表5~9可知,15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)中尿囊素含量為0.801%~1.087%、飲片到水煎液的轉(zhuǎn)移率為62.34%~88.17%、水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)的轉(zhuǎn)移率為73.09%~91.37%;沒食子酸的含量為0.047%~0.057%、飲片到水煎液的轉(zhuǎn)移率為59.73%~84.16%、水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)的轉(zhuǎn)移率為74.99%~89.32%;京尼平苷酸的含量為0.037%~0.081%、飲片到水煎液的轉(zhuǎn)移率為11.54%~26.98%、水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)的轉(zhuǎn)移率為71.77%~94.38%;小檗堿的含量為0.250%~0.387%、飲片到水煎液的轉(zhuǎn)移率為10.46%~16.73%、水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)的轉(zhuǎn)移率為76.54%~88.43%,均未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)(平均值的70%~130%以外)。15批易黃湯水煎液的出膏率為12.49%~16.37%,15批易黃湯凍干粉(物質(zhì)基準(zhǔn))的干粉收得率為12.30%~14.66%,水煎液-凍干粉的浸膏轉(zhuǎn)移率為82.71%~99.24%,均未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)(平均值的70%~130%以外)。以上結(jié)果顯示,易黃湯中4種指標(biāo)性成分在飲片-水煎液-凍干粉(物質(zhì)基準(zhǔn))中的傳遞均較為穩(wěn)定,根據(jù)相關(guān)規(guī)定,不同批次物質(zhì)基準(zhǔn)的指標(biāo)性成分含量及轉(zhuǎn)移率應(yīng)控制在其均值的70%~130%,本實(shí)驗(yàn)中15批易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的各指標(biāo)性成分的含量及轉(zhuǎn)移率均在范圍內(nèi),說明實(shí)驗(yàn)前期物質(zhì)基準(zhǔn)的制備工藝可以實(shí)現(xiàn)各成分含量的穩(wěn)定傳遞。

    3 討論

    經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)作為后續(xù)復(fù)方制劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制的參照,在研究過程中具有核心地位[7],指標(biāo)性成分的選擇在物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量的控制中具有重要意義。易黃湯君藥山藥中主要含有尿囊素、薯蕷皂苷元、腺苷和多糖等化學(xué)成分[13],其中尿囊素、腺苷和薯蕷皂苷常作為山藥藥材的質(zhì)控指標(biāo)[14-15];另一味君藥芡實(shí)中沒食子酸等酚酸類成分具有抗菌、抗炎等藥理作用[16-17]。佐藥車前子中主要含有環(huán)烯醚萜苷類、多糖類和黃酮類等成分[18],環(huán)烯醚萜苷類成分具有保肝、降血糖、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等作用[19];另一味佐藥黃柏中主要含有小檗堿和黃柏堿等生物堿類,具有顯著的抗炎和抗菌作用[20-21]。黃柏堿和小檗堿均為黃柏中的指標(biāo)性成分,而易黃湯中黃柏堿相對(duì)小檗堿含量較低,可僅選擇小檗堿作為含量測(cè)定中表征黃柏藥材的指標(biāo)性成分。故本實(shí)驗(yàn)選取君藥山藥中尿囊素、芡實(shí)中沒食子酸,佐藥車前子中京尼平苷酸、黃柏中小檗堿4種成分作為含量測(cè)定的指標(biāo)性成分,建立含量測(cè)定方法和進(jìn)行量值傳遞研究。

    本研究采用HPLC法建立了易黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的特征圖譜,確定了15個(gè)共有峰。對(duì)各個(gè)共有峰進(jìn)行藥味歸屬,其中炒山藥、炒芡實(shí)、炒白果、酒車前子、鹽黃柏5味藥在特征圖譜中均有體現(xiàn),所建立的特征圖譜實(shí)現(xiàn)了表征每個(gè)藥味的要求。采用HPLC法測(cè)定了易黃湯中的4個(gè)指標(biāo)性成分尿囊素、沒食子酸、京尼平苷酸、小檗堿含量,測(cè)定方法穩(wěn)定簡(jiǎn)便;以特征圖譜和指標(biāo)性成分的含量及轉(zhuǎn)移率作為研究核心,對(duì)物質(zhì)基準(zhǔn)量值傳遞過程進(jìn)行分析,為易黃湯質(zhì)量評(píng)價(jià)和復(fù)方制劑的物質(zhì)基準(zhǔn)研發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ),以期為中成藥的創(chuàng)新開發(fā)及質(zhì)量監(jiān)管提供幫助。

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