Cys-C、sTRAIL、PDGF 血清表達(dá)與慢性乙肝肝硬化病情程度間關(guān)聯(lián)性及預(yù)后預(yù)測價(jià)值探究

廉娜

（河南省焦作煤業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司中央醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 焦作454000）

流行病學(xué)調(diào)查顯示， 我國肝硬化多繼發(fā)于乙型肝炎病毒（HBV）感染，并隨慢性乙肝患者增多，發(fā)病率呈明顯升高趨勢[1-2]，同時(shí)，根據(jù)相關(guān)并發(fā)癥嚴(yán)重程度， 慢性乙肝肝硬化患者1 年內(nèi)病死率可達(dá)1~57%[3]。 Child-Pugh 肝功能分級(jí)為臨床常用慢性乙肝肝硬化患者肝損傷評(píng)估指標(biāo)， 但受主觀因素影響，準(zhǔn)確性較差。 近年來，隨醫(yī)學(xué)研究不斷發(fā)展，利用有創(chuàng)性小的血清學(xué)指標(biāo)，監(jiān)測肝硬化發(fā)展進(jìn)程已成為研究熱點(diǎn)。 據(jù)報(bào)道， 在慢性乙肝患者中，隨時(shí)間延長，肝實(shí)質(zhì)反復(fù)炎癥導(dǎo)致肝細(xì)胞外基質(zhì)大量增生出現(xiàn)纖維化加重， 且在此基礎(chǔ)上隨病情進(jìn)展可破壞肝小葉結(jié)構(gòu)， 進(jìn)一步發(fā)展成為肝硬化[4-5]。 而血清胱抑素-C（Cys-C）水平上升，可反映肝臟炎癥過程。 可溶性腫瘤細(xì)胞壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（sTRAIL）可調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，參與感染、炎癥、自身免疫性疾病與細(xì)胞凋亡的過程。 血小板衍生生長因子（PDGF）可刺激肝纖維組織增生，促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展。 既往研究已證實(shí)血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 在慢性乙肝患者中的應(yīng)用價(jià)值，但關(guān)于上述指標(biāo)與慢性乙肝肝硬化患者病情程度的關(guān)系及聯(lián)合表達(dá)對慢性乙肝肝硬化患者預(yù)后預(yù)測價(jià)值鮮有報(bào)道。基于此，本研究初次探討血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)與慢性乙肝肝硬化病情程度的相關(guān)性及對預(yù)后的預(yù)測價(jià)值。 具體分析如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2017 年11 月至2019 年5 月我院慢性乙肝肝硬化患者119 例設(shè)為研究組，另選取健康體檢者119 例設(shè)為對照組。研究組：女53例，男66 例，年齡46~78 歲，平均（62.19±7.22）歲；體質(zhì)量指數(shù) （BMI）17.2~27.6kg/m2， 平均 （23.36±1.54）kg/m2； 慢 性 乙 肝 病 程7.5~30.8 年， 平 均（20.83±4.75）年；依據(jù)Child-Pugh 肝功能分級(jí)分為輕度（A 級(jí)）49 例、中度（B 級(jí)）41 例、重度（C 級(jí)）29例；對照組：女50 例，男69 例，年齡48~76 歲，平均 （61.95±6.87） 歲；BMI 17.0~27.8kg/m2， 平 均（22.92±1.63）kg/m2。 兩組基本資料 （年齡、 性別、BMI）均衡可比（P＞0.05）。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）研究組均符合《2015 JSGE 循證臨床實(shí)踐指南：肝硬化》[6]中診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)腹部CT、B 超、肝組織活檢等證實(shí)為肝硬化；乙肝表面抗原（HBsAg）陽性＞6 個(gè)月；（2）兩組臨床資料均完整，且患者及家屬簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）合并甲肝、丙肝感染或獲得性免疫缺陷綜合征者；（2）合并酒精性肝病、代謝遺傳性肝病、 原發(fā)性膽汁性肝硬化或其他類型肝病者；（3）肝癌或其他部位惡性腫瘤者；（4）腎、肺等重要臟器器質(zhì)性病變者；（5）既往有肝臟手術(shù)史者；（6）合并冠心病、糖尿病等基礎(chǔ)疾病者；（7）認(rèn)知功能障礙或精神行為異常者。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 空腹取6 mL 靜脈血， 離心12 min，3 000 r/min，離心半徑16 cm，分離取血清，置于-20 ℃冰箱低溫保存：（1） 采用乳膠增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測血清Cys-C 水平， 試劑盒購自鄭州科欣生物技術(shù)有限公司；（2）采用單克隆雙抗體夾心ABC 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA） 檢測血清sTRAIL 水平， 試劑盒購自上海鈺博生物科技有限公司；（3） 采用ELISA 法檢測血清PDGF 水平，試劑盒購自上海廣銳生物科技有限公司， 上述操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.3.2 治療方法 研究組均接受甘草酸二銨腸溶膠囊保肝治療，飯后口服，每次3 粒，3 次/d，同時(shí)口服恩替卡韋，每次0.5 mg，1 次/d，持續(xù)服用12 個(gè)月。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比表示， 采用χ2檢驗(yàn)，Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化關(guān)聯(lián)性采用Logistic 回歸分析， 采用Spearman 相關(guān)性進(jìn)行兩變量的相關(guān)性分析， 繪制受試者工作特征曲線 （ROC） 得到曲線下面積（AUC），檢驗(yàn)Cys-C、sTRAIL、PDGF 對慢性乙肝肝硬化預(yù)后預(yù)測價(jià)值，AUC＞0.9 表示預(yù)測性能較高，0.71～0.90 表示有一定的預(yù)測性能，0.5～0.7 表示預(yù)測性能較差，＜0.5 表示沒有預(yù)測效能，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá) 研究組血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)高于對照組 （P＜0.05）。 見表1。

表1 兩組Cys-C、sTRAIL、PDGF 比較（±s）

表1 兩組Cys-C、sTRAIL、PDGF 比較（±s）

組別 n研究組對照組119 119 t P Cys-C（mg/L） sTRAIL（pg/mL）1.13±0.24 0.79±0.14 13.349＜0.001 219.80±45.44 86.41±19.39 29.453＜0.001 PDGF（pg/mL）122.68±20.69 26.91±9.11 46.213＜0.001

2.2 Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化關(guān)聯(lián)性 以慢性乙肝肝硬化作因變量， 將Cys-C、sTRAIL、PDGF 作自變量，納入Logistic 回歸分析模型，結(jié)果顯示，Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化具有顯著關(guān)聯(lián)性（P＜0.05）。 見表2。

表2 Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化關(guān)聯(lián)性

2.3 不同病情程度患者血清指標(biāo)表達(dá) 不同病情程度慢性乙肝肝硬化患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)間存在顯著差異（P＜0.05），且中度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)高于輕度患者（P＜0.05）；重度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)高于中度患者（P＜0.05）。 見表3。

表3 不同病情程度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)（±s）

表3 不同病情程度患者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)（±s）

組別 n輕度中度重度F 值P 值49 41 29 Cys-C（mg/L） sTRAIL（pg/mL）0.93±0.15 1.16±0.23 1.41±0.29 44.604＜0.001 138.86±50.61 227.70±61.15 345.41±56.97 124.673＜0.001 PDGF（pg/mL）78.91±21.38 127.64±23.11 189.61±32.91 177.075＜0.001

2.4 血清指標(biāo)與慢性乙肝肝硬化病情程度相關(guān)性Spearman 分析得知，Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化病情程度呈正相關(guān)性（P＜0.05），見表4。

表4 Cys-C、sTRAIL、PDGF 與慢性乙肝肝硬化病情程度相關(guān)性

2.5 不同預(yù)后患者Cys-C、sTRAIL、PDGF 比較 隨訪6 個(gè)月， 研究組119 例患者中HBV-DNA 陽性者31 例， 預(yù)后良好者血清Cys-C、sTRAIL、PDGF表達(dá)低于預(yù)后不良者（P＜0.05），見表5。

表5 研究組不同預(yù)后患者血清指標(biāo)比較（±s）

表5 研究組不同預(yù)后患者血清指標(biāo)比較（±s）

組別 n預(yù)后良好預(yù)后不良88 31 t P Cys-C（mg/L） sTRAIL（pg/mL）0.99±0.20 1.53±0.31 11.087＜0.001 198.71±34.67 279.67±50.11 9.885＜0.001 PDGF（pg/mL）97.64±18.62 193.76±26.59 21.963＜0.001

2.6 Cys-C、sTRAIL、PDGF 對慢性乙肝肝硬化預(yù)后預(yù)測價(jià)值 繪制Cys-C、sTRAIL、PDGF 對慢性乙肝肝硬化預(yù)后預(yù)測價(jià)值ROC 曲線，Cys-C AUC 為0.718，95%CI 為0.629～0.797，Z 值為3.709，P 值為0.000，當(dāng)截?cái)嘀担?.46 mg/L 時(shí)，敏感度為54.84%、特 異 性 為84.09%；sTRAIL AUC 為0.781，95%CI為0.696～0.851，Z 值為5.660，P 值為0.000，當(dāng)截?cái)嘀担?31.00 pg/mL 時(shí)，敏感度為77.42%、特異性為69.32%；PDGF AUC 為0.809，95%CI 為0.727 ～0.875，Z 值 為7.272，P 值 為0.000， 當(dāng) 截 斷 值＞131.31 pg/mL 時(shí)， 敏感度為70.97%、 特異性為81.82%；聯(lián)合檢測AUC 為0.875，95%CI 為0.788～0.962，Z 值 為8.467，P 值 為0.000， 敏 感 度 為77.42%、特異性為92.05%。 見圖1。

圖1 血清Cys-C、sTRAIL、PDGF對慢性乙肝肝硬化預(yù)后預(yù)測價(jià)值

3 討論

肝纖維化是機(jī)體對慢性肝損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，也是慢性乙肝進(jìn)展為肝硬化的必經(jīng)環(huán)節(jié)[7-8]。 因此準(zhǔn)確判斷肝纖維化程度， 對判斷肝硬化病情嚴(yán)重程度、評(píng)估預(yù)后具有積極意義。

Cys-C 屬胱蛋白超家族中一員，具有抑制或調(diào)節(jié)組織蛋白酶活性作用， 是早期反映腎小球?yàn)V過率的生化標(biāo)記物， 亦是評(píng)估早期腎功能損害的靈敏性指標(biāo)[9-10]。本研究結(jié)果顯示，慢性乙肝肝硬化患者血清Cys-C 表達(dá)明顯高于健康體檢者。 血清Cys-C 表達(dá)上調(diào)，一定程度會(huì)影響基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的平衡， 參與細(xì)胞外膠原蛋白的生成與沉積，加重肝纖維化，參與慢性乙肝肝硬化的發(fā)生、進(jìn)展[11]。另外，趙直光等[12]通過研究血清Cys-C 與Child-Pugh 肝功能分級(jí)關(guān)聯(lián)性可知，血清CysC 是乙型肝炎性肝硬化發(fā)生的高危因素， 并與Child-Pugh 評(píng)分存在正相關(guān)關(guān)系，與本研究觀點(diǎn)一致。 肝組織損傷后，可激活半胱氨酸蛋白酶等組織蛋白酶， 增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞及肝細(xì)胞線粒體外膜通透性， 促進(jìn)大量凋亡因子釋放，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，而機(jī)體為對抗組織蛋白酶所致“損害效應(yīng)”，會(huì)應(yīng)激性增加CysC 含量，最終形成惡性循環(huán)， 加重慢性乙肝肝硬化患者病情程度[13]。 經(jīng)ROC 曲線進(jìn)一步證實(shí)，當(dāng)截?cái)嘀担?.46 mg/L 時(shí)， 血清Cys-C 對慢性乙肝肝硬化患者預(yù)后的預(yù)測特異性可達(dá)84.09%， 有力佐證了血清Cys-C 表達(dá)具有成為預(yù)測慢性乙肝肝硬化患者預(yù)后的特異性指標(biāo)潛力，可選取個(gè)性化治療方案，判斷預(yù)后提供新靶點(diǎn)。

sTRAIL 通過結(jié)合細(xì)胞膜上相應(yīng)受體， 在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、 免疫自穩(wěn)及免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用[14]。 本研究發(fā)現(xiàn)，血清sTRAIL 在慢性乙肝肝硬化患者中過度表達(dá)， 考慮可能為活化肝星狀細(xì)胞（HSC）表面TRAIL 受體蛋白表達(dá)升高，導(dǎo)致HSC對TRAIL 所致肝細(xì)胞凋亡敏感度也隨之增強(qiáng)，從而引發(fā)組織、細(xì)胞嚴(yán)重壞死，加快肝纖維化進(jìn)展。經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析， 血清sTRAIL 表達(dá)與慢性乙肝肝硬化患者病情程度存在明顯正相關(guān)性。血清sTRAIL 與可溶性血管細(xì)胞黏附分子-1 （sVCAM-1）具有協(xié)同作用，當(dāng)血清sTRAIL 水平異常高表達(dá)時(shí)，載體調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子會(huì)產(chǎn)生主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，而經(jīng)細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)， 損傷肝細(xì)胞會(huì)形成多元性瀑布效應(yīng)，從而誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，加劇肝臟損傷嚴(yán)重程度，加重病情程度[15]。 進(jìn)一步對比不同預(yù)后患者血清sTRAIL 表達(dá)顯示， 血清sTRAIL 在預(yù)后不良患者呈異常升高態(tài)勢，提示血清sTRAIL 高表達(dá)可能會(huì)增加慢性乙肝肝硬化患者死亡風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響預(yù)后改善。 推測早期下調(diào)血清sTRAIL 水平可能是促進(jìn)慢性乙肝肝患者預(yù)后改善的重要原因。

PDGF 與細(xì)胞表面PDGF 受體結(jié)合，能介導(dǎo)下游信號(hào)通道轉(zhuǎn)導(dǎo)，在肝纖維化發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[16]。 通過ELISA 法檢測發(fā)現(xiàn)，血清PDGF 在慢性乙肝肝硬化患者中呈異常高表達(dá)狀態(tài)， 并隨病情程度加重出現(xiàn)升高趨勢，與林勇[17]結(jié)果相似。同時(shí)，劉典勛等[18]報(bào)道也證實(shí)，血清PDGF 表達(dá)提示乙型肝炎肝硬化患者肝功能損傷狀況。PDGF 能激活并活化靜止HSC，縮短HSC 分裂周期時(shí)間，加快HSC 增殖， 同時(shí)又促使新合成細(xì)胞遷移至相關(guān)部位，迅速結(jié)合受體，產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)與相應(yīng)膠原蛋白，誘導(dǎo)HSC 分泌轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）等細(xì)胞因子， 一定程度會(huì)促進(jìn)纖維連結(jié)蛋白及蛋白多糖的合成，加重肝臟組織損害程度[19]。 但Cys-C、sTRAIL、PDGF 預(yù)測慢性乙肝肝硬化患者預(yù)后價(jià)值均存在一定局限性， 故本研究采用聯(lián)合預(yù)測方式，結(jié)果顯示，Cys-C、sTRAIL、PDGF 聯(lián)合預(yù)測慢性乙肝肝硬化患者AUC 優(yōu)于上述指標(biāo)單一預(yù)測，提示三者聯(lián)合對慢性乙肝肝硬化患者預(yù)后具有一定指導(dǎo)價(jià)值，可為臨床預(yù)后評(píng)估提供新途徑。

綜上可知，血清Cys-C、sTRAIL、PDGF 表達(dá)與慢性乙肝肝硬化患者病情程度存在明顯正相關(guān)性， 三者聯(lián)合有望成為評(píng)估慢性乙肝肝硬化患者預(yù)后的有效手段，為臨床判斷病情程度、預(yù)測預(yù)后提供循證指導(dǎo)。