直腸癌患者外周血及腫瘤組織XKRX基因表達(dá)及臨床意義

潘華，陳玉星，牛萍

（南陽市第一人民醫(yī)院，河南 南陽473000）

結(jié)直腸癌具有發(fā)病率高和高死亡率的特點(diǎn),是常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率逐年升高，患者預(yù)后性較差，臨床治療上沒有顯著的進(jìn)展[1]。 因此，迫切需要對直腸癌的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究， 以期尋找到方便有效的診斷和干預(yù)指標(biāo)， 這有助于結(jié)直腸癌患者治愈率和死亡率的提高[2]。 在之前的工作中，我們從大分子數(shù)據(jù)庫中篩選出了在結(jié)腸癌細(xì)胞中高表達(dá)的XKRX 基因， 為進(jìn)行下一步的研究工作做準(zhǔn)備。 XKRX 在胎盤和腎上腺中均有表達(dá)，屬于XK 基因家族[3]。 Xk 位于在紅細(xì)胞上，是在XK/Kell血型系統(tǒng)中的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白， 與Kell 蛋白通過二硫鍵連接[4]。Kell 是一種與內(nèi)皮素-3 轉(zhuǎn)化酶活性相關(guān)的ⅱ型膜多糖蛋白，可以表達(dá)多種不同的抗原。 目前，國內(nèi)外對XKRX 與腫瘤的研究很少。 本次研究選取2018 年1 月至2019 年3 月在我院治療的直腸癌患者110 例， 探討直腸癌患者外周血及腫瘤組織XKRX 基因表達(dá)及臨床意義。 現(xiàn)有報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月至2019 年3 月在我院治療的直腸癌患者110 例 （直腸癌組），納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均經(jīng)病理學(xué)確診；（2）在我院行手術(shù)切除；（3）年齡＞18 歲；（4）患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)前行放化療等抗腫瘤治療；（2）合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤。 同時(shí)選取健康志愿者60 例作為對照組， 直腸癌組和對照組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 直腸癌組和對照組一般資料比較

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 RT-PCR 檢測： 將少量組織樣本切碎放入1.5 mL ep 管， 加入TRIZol 試劑提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，使用Mx3000P 定量PCR儀進(jìn)行檢測。使用Primer 5.0 軟件設(shè)計(jì)XKRX 引物XKRX -F：GGCACTGAACTGAATCCCCT; XKRX -R：CAGGGTGTAGCCGATCTGTC， 管家基因GAPD HGAPDH -F：CCATCAATGACCCCTTCATTGACC;GAPDH-R：GAAGGCCATGC-CAGTGAGCTTCC 作為對照。 重復(fù)3 次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 22.0 軟件，計(jì)量資料采用（±s)表示，比較使用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)， 相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直腸癌組和對照組外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量比較 直腸癌組外周血XKRK mRNA 相對表量明顯高于對照組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2、圖1。

表2 直腸癌組和對照組外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量比較

圖1 直腸癌組和對照組外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量分布圖

2.2 直腸癌和癌旁組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量比較 直腸癌組織XKRK mRNA 相對表量明顯高于癌旁組織，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3、圖2。

表3 直腸癌組織和癌旁組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量比較

圖2 直腸癌和癌旁組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量分布圖

2.3 外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量與臨床病理特征關(guān)系 Dukes 分期Ⅲ～Ⅳ、腫瘤直徑＞5 cm 患者外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量明顯高于Dukes分期Ⅰ～Ⅱ、腫瘤直徑≤5 cm 患者（P＜0.05）。 見表4。

表4 外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量與臨床病理特征關(guān)系

2.4 腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量與臨床病理特征關(guān)系 Dukes 分期Ⅲ～Ⅳ、腫瘤直徑＞5 cm 患者腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量明顯高于Dukes 分期Ⅰ～Ⅱ、腫瘤直徑≤5 cm 患者（P＜0.05）。見表5。

表5 腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量與臨床病理特征關(guān)系

2.5 相關(guān)性分析 將外周血和腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：外周血和腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量呈正相關(guān)（r=0.633，P＜0.05）。

3 討論

直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率急劇上升。 研究證實(shí)，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與多種因素有關(guān)，是由多步驟、多基因突變引起的疾病[5]。 以往的研究表明，基因在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中起著重要作用[6]。 探索癌癥發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，篩選診斷和治療的分子靶點(diǎn)，對直腸癌患者的輔助診斷和指導(dǎo)用藥具有重要的臨床意義。

直腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,它的發(fā)生和發(fā)展也有明顯的幾個(gè)階段[7]。 首先是腺癌和原位癌通常由正常上皮非典型增生形成， 最后浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，直腸癌的研究已經(jīng)達(dá)到分子水平[8-10]。 一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)結(jié)腸直腸癌是由各種遺傳變異引起的。 目前，大腸癌有四種公認(rèn)的分子途徑: 抗原呈遞細(xì)胞-β-連環(huán)蛋白-Tcf-Myc 途徑；HNPCC 途徑； 潰瘍性結(jié)腸炎-非典型細(xì)胞增殖-癌癥途徑；基因過度甲基化導(dǎo)致雌激素失活[11]。 對結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程的研究，尋找簡便有效的觀察和干預(yù)指標(biāo)， 對于結(jié)直腸癌患者治愈率和死亡率的提高具有重要的科學(xué)意義。.因此，在之前的工作中， 我們從數(shù)據(jù)庫中篩選出在結(jié)直腸癌中高表達(dá)的XKRX 基因， 并開展了下一步的研究工作[12]。 XKRX 是XK 家族的一員，Xk 家族中成員xkr4，xkr8 和xkr9 主要在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮重要的作用， 其作用機(jī)制是暴露出細(xì)胞中的磷脂絲氨酸， 隨后磷脂絲氨酸被巨噬細(xì)胞吞噬[13-14]。 據(jù)報(bào)道， XK 基因缺乏的男性患有遲發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞增多癥，稱為McLeod 綜合征，臨床表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)，神經(jīng)肌肉和血液學(xué)功能異常，目前關(guān)于XKRX 基因表達(dá)與細(xì)胞凋亡和惡性疾病發(fā)生之前的關(guān)系還沒有得到證實(shí)[15]。

本次研究結(jié)果顯示， 直腸癌組和對照組外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量比較， 直腸癌組外周血XKRK mRNA 相對表量明顯高于對照組， 差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 說明，XKRX 可能發(fā)揮原癌基因的作用，影響結(jié)直腸癌的惡性進(jìn)展。 直腸癌和癌旁組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量比較， 直腸癌組織XKRK mRNA 相對表量明顯高于癌旁組織。 說明XKRX 在結(jié)直腸癌患者癌組織中表達(dá)上調(diào)，這為進(jìn)一步研究XKRX 在結(jié)直腸癌中的作用和機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 外周血XKRK mRNA 相對表達(dá)量與臨床病理特征關(guān)系，Dukes 分期Ⅲ～Ⅳ、腫瘤直徑＞5 cm 患者外周血和腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量均明顯高于Dukes 分期Ⅰ～Ⅱ、 腫瘤直徑≤5 cm 患者[16]。 結(jié)果提示XKRK mRNA 的表達(dá)促進(jìn)了結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展，有助于直腸癌的惡性轉(zhuǎn)化。在一定程度上，XKRK mRNA 可能影響結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展。 將外周血和腫瘤組織XKRK mRNA相對表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：外周血和腫瘤組織XKRK mRNA 相對表達(dá)量呈正相關(guān)。 提示XKRK 的表達(dá)與患者外周血和腫瘤組織的發(fā)生密切相關(guān)，是一種重要的致癌基因，可作為評估直腸癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

結(jié)直腸癌組織中XKRX 基因的表達(dá)水平升高，不同病理分化程度的表達(dá)存在差異。 XKRX 基因可能參與結(jié)直腸癌的發(fā)展， 并可能影響癌細(xì)胞的遷移能力，這可能成為治療結(jié)直腸癌的新靶點(diǎn)。因此，XKRX 基因表達(dá)的檢測對結(jié)直腸癌的診斷，治療和預(yù)后具有一定的臨床意義。

綜上所述， 直腸癌患者外周血及腫瘤組織XKRX 基因表達(dá)上調(diào)，與Dukes 分期、腫瘤直徑有關(guān)，值得進(jìn)一步研究。