正交試驗法優(yōu)選二陳湯經(jīng)方顆粒水提工藝*

張 倩，崔建軍

（1.甘肅藥業(yè)集團科技創(chuàng)新研究院有限公司，甘肅 蘭州 730000；2.蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046）

二陳湯被公認(rèn)為是中醫(yī)方劑學(xué)中祛痰劑之代表方，古籍中同名方劑約有十一首，其中《太平惠民和劑局方》中記載的二陳湯較為常用。二陳湯的立法源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》《金匾要略》，南北朝至隋唐時期，對痰飲病的認(rèn)識有了較大發(fā)展，不少方劑中出現(xiàn)了半夏、橘皮、茯苓、甘草或生姜也開始作為相對的固定配伍，形成了《局方》二陳湯的原始雛形。

《局方》中二陳湯主藥為半橘苓草，與生姜和烏梅同服，以致半夏之毒，增強其化痰止咳之功。而后考慮到烏梅酸澀收斂，與濕痰不宜、與半夏抵觸而予以舍棄；也因其屬于“藥引子”而忽略，臨床也多不用?！吨嗅t(yī)方劑大辭典》中載方名“二陳”的加減方238 條，明確注明烏梅的僅10 條，只占4.8%[1]?！吨袊幍洹?015 版一部收載的傳統(tǒng)中成藥二陳丸，由陳皮、半夏、茯苓、甘草4 味中藥組成，在制法中加入生姜壓榨取汁，但并未提及烏梅。因此，可見后世對二陳方中的生姜與烏梅并不強調(diào)。而現(xiàn)今方中半夏已由半夏的炮制品姜半夏或法半夏替代，毒性已減。另外，由于二陳是治痰基礎(chǔ)方，后世醫(yī)家常以二陳湯為基礎(chǔ)加減變化，形成諸多衍化方，不僅針對濕痰、還可治療熱痰、寒痰、燥痰、風(fēng)痰。為方便今后隨癥加減用藥，現(xiàn)僅對四味二陳湯的工藝進行研究。

本研究以二陳古籍經(jīng)方為基礎(chǔ)，以傳統(tǒng)中藥理論為指導(dǎo)，選取水為提取溶劑，保證經(jīng)典名方原有湯劑的藥效；以現(xiàn)代制劑工藝為抓手，將原湯劑或丸劑改變?yōu)轭w粒劑，以提高中藥的生物利用度，增加穩(wěn)定性，同時，有利于工業(yè)生產(chǎn)，且服用方便。中藥顆粒適應(yīng)現(xiàn)今的臨床需求，更適應(yīng)快節(jié)奏的生活方式和生產(chǎn)特點，對實現(xiàn)中藥產(chǎn)業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化、國際化有著深遠(yuǎn)的意義。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

DGG-9123A 恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信儀器公司）；AL-204 電子天平（萬分之一，METTLERTOLEDO）；HH-6 型恒溫水浴鍋（常州國華電器公司）；UPH-I-10T純化水系統(tǒng)（成都超純科技公司）；MH-1000 電熱套（北京科偉永興儀器公司）；SHIMADZU Prominence型高效液相儀；SPD-M20A 型二極管陣列檢測器；LC Solution 工作站（日本島津公司）。

1.2 試藥

橙皮苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，含量以93.7%計，批號：110721-201311）；甲醇（色譜純），水（超純水），其余試劑（均為分析純）；研究所使用的法半夏、陳皮、茯苓、甘草原料藥材均領(lǐng)自蘭州佛慈制藥股份有限公司原料庫，已由公司質(zhì)量部檢驗人員按照中國藥典相關(guān)要求檢驗合格，并分別進行了挑揀、清洗、干燥。

2 試驗方法

2.1 提取方式的確定

通過查閱文獻，對二陳湯中各味藥材有效成分進行統(tǒng)計，具體統(tǒng)計見表1，可以得知這些有效成分大多溶于水，同時參考二陳湯的傳統(tǒng)制備方式，選擇水作為提取溶劑，并通過加熱回流方式，進行二陳湯的提取。

表1 二陳湯中藥材有效成分

2.2 水提工藝的研究

2.2.1 藥材吸水率的測定

按照處方量，分別精密稱取四味藥材加以混合，然后加入10 倍量的水去浸泡，在此過程中，每隔一段時間（30 min 左右）記錄一次藥材的浸泡情況，當(dāng)發(fā)現(xiàn)藥材完全浸透后將多余的水瀝去，計算吸水率（%），平均吸水率為174.7%（表2）。

表2 藥材吸水率試驗結(jié)果

2.2.2 水提條件的優(yōu)選

根據(jù)以往的經(jīng)驗和查閱大量相關(guān)文獻可知，提取次數(shù)、加水量及提取時間在中藥水提工藝中起重要作用，為主要因素，而浸泡時間常為次要因素。中藥材有效成分提取工藝的優(yōu)選所采取的最常用方法是正交實驗法。所以，分別采用以上3 個重要因素各取3 個水平進行正交試驗。正交試驗的水平及因素，見表3。

表3 水提工藝水平及因素

每次投料量為處方1.15 倍，即：半夏（制）17.24 g，陳皮17.24 g，茯苓10.34 g，甘草5.17 g，總重量為50 g。

投料后，先加入6 倍水將藥材混合后浸泡1 h，然后按照吸水率以及正交試驗提取溶劑量補足總水量，接著按照正交表L9（34）相應(yīng)水平和因素進行提取。以轉(zhuǎn)移率和出膏率（干膏）作為評價指標(biāo)，對提取效果進行全面的評估。合并提取液，將提取液濃縮至100 mL 以內(nèi)，精密稱定總提取液質(zhì)量M總，裝入容量瓶中備用。

精密量取50 g 提取液，濃縮制成干膏，并計算出膏率。并按照中國藥典2015 版陳皮項下橙皮苷含量測定方法，測定橙皮苷含量，計算橙皮苷轉(zhuǎn)移率。

2.3 出膏率（干膏）的測定

精密稱取濃縮后總提取液質(zhì)量M總，并精密稱取其中50 g（m濕膏）置于蒸發(fā)皿（已恒重，m皿）中，將蒸發(fā)皿置于水浴鍋蒸干后，放入烘箱中105 ℃干燥3 h，迅速取出蒸發(fā)皿并放入干燥器內(nèi)冷卻到室溫，迅速稱定（m干膏+皿），并按下式計算出膏率（%）（干膏）。

2.4 橙皮苷含量及轉(zhuǎn)移率的測定

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：選取十八烷基硅烷鍵合硅膠填充的色譜柱，甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）為流動相，283 nm 為檢測波長；且理論塔板數(shù)按橙皮苷計算不得低于2 000。

（2）制備對照品溶液：精密稱定適量橙皮苷對照品，制成1 mL 含1 mg 甲醇的溶液，即得。

（3）制備供試品溶液：精密移取二陳湯提取液0.5 g（m提取液）于具塞三角瓶中，精密吸取甲醇50 mL，稱定重量，超聲30 min 使其溶解，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

（4）提取液中橙皮苷含量測定法：將供試品溶液與對照品溶液各5 μL 分別注入色譜儀。

（5）制備陳皮藥材供試品：精稱本品約1 g，倒入索氏提取器中，加80 mL 石油醚（60～90 ℃），加熱回流2～3 h，棄去石油醚，藥渣揮干，加80 mL 甲醇再加熱回流至提取液無色，放冷，過濾，濾液倒入100 mL 稱量瓶，用少量甲醇分多次洗滌容器，洗液濾入同一稱量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得[2]。

（6）陳批藥材中橙皮苷含量測定法：將供試品溶液與對照品溶液各5 μL 分別注入色譜儀。

（7）測定橙皮苷轉(zhuǎn)移率（%）計算公式如下：

2.5 試驗結(jié)果與討論

2.5.1 試驗結(jié)果

正交實驗的結(jié)果，以橙皮苷轉(zhuǎn)移率和干膏出膏率兩個指標(biāo)進行計算和分析，試驗結(jié)果見表4。

表4 L9（34）二陳湯正交試驗結(jié)果（二陳湯正交試驗）

此外，通過對該項結(jié)果進行方差分析，計算平方和、自由度、均方以及F 值，以此來對試驗中的水平及因素對試驗記過的影響顯著性進行評估。

其中陳皮藥材中橙皮苷含量為6.32%，陳皮的質(zhì)量為17.24 g。

陳皮苷含量測定如圖1、圖2 所示。

圖1 陳皮苷對照品

圖2 二陳湯顆粒

查F 檢驗的臨界值FP 表F0.05（2，2）=19.0，F(xiàn)0.01（2，2）=99.0，所以，因素C 為顯著（表5）。

表5 二陳湯方差分析表

2.5.2 結(jié)果討論及結(jié)論

從以上評估結(jié)果可以得知，提取次數(shù)對于二陳湯有影響，而加水量和提取時間兩種因素對二陳湯無影響，因此，將二陳湯的水提工藝參數(shù)定為提取3次、加8 倍水、每次1 小時。

為了驗證所制定提取工藝的合理性，進行了3批驗證試驗及3 批中試放大生產(chǎn)。各項試驗結(jié)果均表明：二陳顆粒該生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可行，操作較為方便，能夠滿足大生產(chǎn)的實際操作要求。