禽流感的診斷及防控

文│牛金鵬（山東省諸城市畜牧業(yè)發(fā)展中心）

禽流感（AI）是一種人畜共患的傳染病。AI給養(yǎng)禽業(yè)造成難以估量的損失，同時(shí)對(duì)人體健康及生命安全也會(huì)造成巨大的威脅。導(dǎo)致高致病性禽流感的H5N1病毒和導(dǎo)致低致病性禽流感的H7N9病毒能跨過種屬屏障引發(fā)人類感染，甚至導(dǎo)致感染者死亡。筆者主要介紹了AI的病原學(xué)、流行病學(xué)特征、致病機(jī)理、診斷方法和預(yù)防措施，以供相關(guān)人員參考。

一、病原學(xué)及流行病學(xué)特征

AI是由AIV造成的急性暴發(fā)型禽呼吸道傳染疫病。AIV為甲型流感病毒，正黏病毒科、流感屬。其外觀具有多形性，表面具有一層較厚的囊膜，直徑為80～120納米。依據(jù)病毒粒子表面結(jié)構(gòu)，AIV分成9個(gè)N亞型、15個(gè)H亞型。AIV基因結(jié)構(gòu)是分節(jié)的單股負(fù)鏈RNA。AIV基因由8個(gè)負(fù)鏈ssRNA片段構(gòu)成，翻譯超過11種蛋白質(zhì)，HA和NA是兩種主要表層糖蛋白，在致病力、感染特異性方面起重要作用。

AIV的表面具有一層較厚的囊膜，使其對(duì)氯仿、乙醚等脂溶劑非常敏感。去氧膽酸鈉、福爾馬林、十二烷基磺酸鈉和輕胺等物質(zhì)能迅速破壞病毒結(jié)構(gòu)，大大降低了感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)。AIV抗低溫能力極強(qiáng)，在自然條件下，尤其是在溫度低、濕度高的條件下，其生存能力強(qiáng)、生存時(shí)間長(zhǎng)。動(dòng)物糞便內(nèi)的AIV病毒在4℃溫度下可生存30～50天，且具有極強(qiáng)的傳染性，在20℃的溫度下可生存1周左右，保存在甘油中可保持感染性1年。AIV病毒對(duì)熱極其敏感，56℃條件下30分鐘便會(huì)喪失活性；60℃條件下10分鐘或65～70℃條件下幾分鐘也能達(dá)到同樣效果。自然陽光直射下，病毒在2天或更短時(shí)間內(nèi)也會(huì)失活。如果用較強(qiáng)的紫外線直接照射病毒，AIV感染力、神經(jīng)氨酸酶活性和血凝素活性損失速度極快。部分蛋白酶對(duì)AIV的影響極大，有些特殊的蛋白酶甚至?xí)?dǎo)致病毒無法吸附在機(jī)體細(xì)胞上，進(jìn)而導(dǎo)致其損失血凝素活性及感染性。如果使用胰蛋白酶處理病毒，AIV活性不會(huì)降低，有時(shí)反而會(huì)升高。

AIV亞型種類繁多，根據(jù)致病能力可將其分為3類，分別是較弱的非致病性、一般的低致病性和較強(qiáng)的高致病性。大多數(shù)AIV亞型病毒株對(duì)家禽的影響較低，一般屬于非致病性，小部分屬于低致病性，但也有例外，如H5和H7亞型毒株。這兩種病毒毒性非常強(qiáng)，不僅傳播速度快，而且極易導(dǎo)致禽流感，感染病毒后的死亡率極高，該病毒不但感染多種家禽和野生禽類，還可感染哺乳動(dòng)物。潛伏期相對(duì)較短，發(fā)病率、死亡率相對(duì)較高，傳播范圍相對(duì)較窄。通常情況下，低致病性禽流感的發(fā)病率、死亡率相對(duì)較低，但傳播范圍非常廣。當(dāng)鳥類感染低致病性禽流感時(shí)，如果不及時(shí)采取合理措施將很難根除，疫情將繼續(xù)蔓延，病毒毒力將進(jìn)一步增強(qiáng)。

二、致病機(jī)理

AIV侵入機(jī)體的第一步是由病毒顆粒HA蛋白受體結(jié)合區(qū)和機(jī)體細(xì)胞表面糖蛋白或糖脂分子末端唾液酸受體結(jié)合，然后進(jìn)入細(xì)胞溶酶體，隨后將病毒粒子轉(zhuǎn)入至細(xì)胞內(nèi)。在細(xì)胞核內(nèi)，病毒mRNA合成后被轉(zhuǎn)運(yùn)媒介運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)中，并在核糖體內(nèi)翻譯成蛋白質(zhì)。在這一過程中，合成的NP進(jìn)入細(xì)胞核，并與合成的病毒RNA形成核衣殼。其他新合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行裝配。AIV感染可破壞細(xì)胞mRNA前體，進(jìn)而抑制宿主蛋白質(zhì)的翻譯，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或裂解死亡。

三、診斷

感染AI后，由于感染病毒的種類、時(shí)間、繼發(fā)感染及所感染毒株的強(qiáng)度不同，臨床癥狀會(huì)有一定差異。感染后的病變也會(huì)由于毒株強(qiáng)度、發(fā)病程度、發(fā)病種類的不同而具有一些不同的特點(diǎn)。同時(shí)，AI無特征性病理變化。因此，長(zhǎng)期以來，AI的診斷主要依賴于病原的分離鑒定。近年來，隨著血清學(xué)診斷技術(shù)和分子生物診斷技術(shù)的進(jìn)步，AI診斷方法得以拓展。

病毒分離鑒定（VI）技術(shù)具體步驟如下：采集發(fā)病禽類的氣管和泄殖腔深部病料，對(duì)病料進(jìn)行稀釋，將其制成10%的懸液，同時(shí)使用病料接種SPF雞胚，培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集雞胚尿囊液樣本，再采用特定方法檢測(cè)血凝活性。若測(cè)試結(jié)果表明樣本血凝活性為陰性，則將采集的雞胚尿囊液盲傳幾代，再次檢測(cè)樣本的病毒血凝性。若測(cè)試結(jié)果表明樣本血凝活性為陽性，則利用新城疫（ND）抗血清作為試驗(yàn)原料，進(jìn)行血凝抑制（HI）試驗(yàn)，以此方法排除ND感染的可能性。如果測(cè)試結(jié)果表明NDV血清HI檢測(cè)為陰性，則采用瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）來檢測(cè)AIV的病原特異性。最后，用AIV分型血清做HI試驗(yàn)和神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)（NI），以確定AIV的亞型。

血清學(xué)診斷技術(shù)有很多種，得到廣泛應(yīng)用的主要包括：血凝抑制（HI）試驗(yàn)、血凝（HA）試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）、病毒中和試驗(yàn)（VNT）、免疫熒光試驗(yàn)（IFT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)（NIT）。其中有兩種方法被普遍采用，即HA和HI法，這兩種方法快捷、方便、特異性優(yōu)良，可以用來進(jìn)行亞型鑒定。但這兩種方法的缺點(diǎn)是不能檢測(cè)新的亞型。與上述兩種方法相比，AGID法更加便于操作，常用試驗(yàn)為免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)（IDD）。VNT為病毒鑒定的經(jīng)典方法，但操作復(fù)雜、耗費(fèi)時(shí)長(zhǎng)、成本較高，在臨床上基本不使用。IFT的檢測(cè)靈敏度高于VI或與之相當(dāng)，但存在假陽性可能。ELISA法具有較高的檢測(cè)靈敏度。NIT法較為可靠，檢測(cè)快速、成本低廉和重復(fù)性好。

分子生物學(xué)診斷技術(shù)：該技術(shù)具有檢測(cè)速度快的優(yōu)勢(shì)，可應(yīng)用于早期快速診斷、疫情監(jiān)測(cè)，可為及時(shí)發(fā)現(xiàn)并撲滅爭(zhēng)取到寶貴的時(shí)間。

四、防控措施

AI為烈性、急性動(dòng)物傳染疫病，一旦暴發(fā)，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)，尤其是禽類養(yǎng)殖業(yè)會(huì)造成巨大的危害，破壞性極大。同時(shí)，由于該傳染病可導(dǎo)致人類感染，致死率高，存在嚴(yán)重的后遺癥，易引發(fā)社會(huì)恐慌，導(dǎo)致?lián)p失擴(kuò)大。因此，必須采取有效措施，嚴(yán)密防控，避免出現(xiàn)不可挽回的損失。

1.阻斷傳播。對(duì)進(jìn)口活禽、禽類產(chǎn)品及生物制品進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，防止國(guó)外AIV傳入我國(guó)。同時(shí)，對(duì)跨地區(qū)調(diào)運(yùn)的易感動(dòng)物，尤其是禽類進(jìn)行嚴(yán)格檢疫。AIV檢測(cè)為陰性的方可進(jìn)行調(diào)運(yùn)?？绲貐^(qū)調(diào)運(yùn)種禽的強(qiáng)制進(jìn)行隔離檢疫，期滿檢疫合格的方可停止隔離，混群飼養(yǎng)。

2.注重飼養(yǎng)管理的科學(xué)性，保證飼料衛(wèi)生，避免飼喂霉變飼料。及時(shí)更換干燥、清潔的墊料，及時(shí)清理糞便和潮濕的墊料，保持環(huán)境衛(wèi)生。飼養(yǎng)密度要合理，采取合理的通風(fēng)措施，維持適宜的溫濕度環(huán)境，避免發(fā)生應(yīng)激。

3.強(qiáng)化生物安全工作，做好防蚊、防蠅、防鳥及防鼠工作。避免養(yǎng)殖場(chǎng)及周邊出現(xiàn)積水，一旦出現(xiàn)積水要及時(shí)清理。禽舍門窗采用窗紗進(jìn)行隔離，同時(shí)注意通風(fēng)，防止缺氧。圍墻應(yīng)使用水泥抹平，并保持整潔。在排污口設(shè)置鐵絲網(wǎng)，門口設(shè)置擋鼠板，必要位置鋪設(shè)碎石帶。同時(shí)使用物理設(shè)備或化學(xué)藥物對(duì)蚊蠅及老鼠進(jìn)行撲殺。

4.注重日常消毒滅源工作。根據(jù)位置不同，選擇不同的消毒劑做好舍外環(huán)境、舍內(nèi)過道及帶禽消毒。根據(jù)是否空欄選擇不同的消毒方式。空欄時(shí)可選擇火燒或熏蒸的方式進(jìn)行更加徹底消毒。

5.制定科學(xué)的免疫計(jì)劃，提高群體抗病能力。接種疫苗可有效預(yù)防疫病的發(fā)生，準(zhǔn)確控制疫苗用量，使用量過大會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫反應(yīng)加劇，用量過少會(huì)導(dǎo)致免疫失敗。免疫注射過程應(yīng)注意減少應(yīng)激，可采取夜間注射的方式，將禽舍燈泡更換為藍(lán)光燈泡。

6.強(qiáng)化診斷和報(bào)告。如果發(fā)現(xiàn)疑似高致病性AI疫情，要迅速向相關(guān)部門、人員報(bào)告。省級(jí)畜牧獸醫(yī)等相關(guān)部門在收到報(bào)告后要迅速派出人員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)診斷。凡是具有明顯臨床癥狀的應(yīng)懷疑其為高致病性AI疫情。迅速收集病料，送至省級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，一旦檢測(cè)結(jié)論為陽性，則可以最終確定為高致病性AI疑似病例。凡屬于這種情況的病例，要立即安排專門人員將病料送到更權(quán)威的國(guó)家級(jí)AI參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行更加全面、完善的檢測(cè)。

7.抑制和撲滅。如果發(fā)現(xiàn)有疑似疫情發(fā)生，畜牧獸醫(yī)等相關(guān)部門應(yīng)果斷采取抑制和撲滅工作，科學(xué)研判形勢(shì)，制定出科學(xué)合理的解決方案。精準(zhǔn)判定、劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)及受威脅區(qū)。對(duì)疫區(qū)周邊3～5千米范圍內(nèi)的全部禽類進(jìn)行強(qiáng)制免疫。