液相色譜-質(zhì)譜法測定豬肉中禁用獸藥五氯酚酸鈉測量不確定度評(píng)定

楊柳 許瑞清 崔小芳 劉建春

摘 要：目的：建立接近零值時(shí)測量不確定度的評(píng)定方法案例，為禁用物質(zhì)提供一種評(píng)定方法。方法：依據(jù)GB 23200.92—2016和JJF 1059.1—2012，以豬肉樣品為例，分析樣品測量過程中引入的不確定度，利用GUM法加以評(píng)定。結(jié)果：本次評(píng)定的測量不確定度結(jié)果報(bào)告為0.197[0，0.491] μg/kg，k=2。結(jié)論：測量不確定度的主要來源為工作曲線變動(dòng)。

關(guān)鍵詞：禁用獸藥;零值;測量不確定度;五氯酚酸鈉;液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

Evaluation of Uncertainty in the Determination of Banned Veterinary Drug Sodium Pentachlorophenolate in Pork by Liquid Chromatography-mass Spectrometry

YANG Liu1， XU Ruiqing2， CUI Xiaofang2， LIU Jianchun1

（1.Shanxi Inspection and Testing Center， Taiyuan 030032， China; 2.Shanxi Jinshuo Biological Medicine Technology Co.， Ltd.， Jinzhong 030600， China）

Abstract： Objective： An evaluation method case of measurement uncertainty close to zero is established to provide an evaluation method for prohibited substances. Method： According to GB 23200.92—2016 and JJF 1059.1—2012， taking pork samples as an example， the uncertainty introduced in the measurement process of samples was analyzed and evaluated by gum method. Result： The measurement uncertainty of this evaluation was reported as 0.197[0，0.491] μg/kg ， k=2. Conclusion： The main source of measurement uncertainty is the variation of working curve.

Keywords： banned veterinary drugs; zero value; measurement uncertainty; sodium pentachlorophenolate; liquid chromatography mass spectrometry

五氯酚酸鈉即五氯酚鈉，可用作落葉樹休眠期噴射劑，以防治褐腐病，也用作除草或殺蟲劑[1]。中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第250號(hào)公告將五氯酚酸鈉列入食品動(dòng)物中禁止使用的藥品及其他化合物清單。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Thermo U3000-AB seicx 4500Qtrap液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，賽默飛世爾科技有限公司;P-SAX固相萃取柱（60 mg/3 mL），月旭科技（上海）股份有限公司;UW620H電子天平，日本島津公司。

五氯酚酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/mL，由壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供）;乙腈、甲醇均為質(zhì)譜級(jí)。

采用GB 23200.92—2016[2]進(jìn)行測量。由同一檢驗(yàn)員在相近的時(shí)間內(nèi)，對(duì)同一份豬肉樣品測定10次，對(duì)測量結(jié)果評(píng)定測量不確定度。

1.2 檢測方法

稱取均質(zhì)試樣2 g，置于10 mL聚丙烯離心管中，加入6 mL 5%三乙胺的乙腈-水溶液，均質(zhì)提取2 min。3 000 r/min離心5 min，收集上清液于離心管中。重復(fù)上述提取步驟1次，合并上清液，混勻。將提取溶液轉(zhuǎn)入經(jīng)過預(yù)處理的MAX固相萃取柱中，1滴/s流速使樣液全部通過固相萃取柱，棄去流出液。依次用5 mL 5%氨水溶液、5 mL甲醇、5 mL 2%甲酸的甲醇-水溶液淋洗，棄去流出液，抽干固相萃取柱5 min以上。以4 mL 4%甲酸甲醇溶液洗脫，洗脫液收集于10 mL具刻度試管，40 ℃水浴下氮吹至1 mL，用水定容至2 mL，混勻。過0.22 μm濾膜，供測定。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

采用吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL定容至10 mL容量瓶中的方法，2級(jí)稀釋配制成10 ng/mL的五氯酚酸鈉中間使用液，依次吸取相應(yīng)體積置于10 mL容量瓶中，用基質(zhì)液定容，配成0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL和5.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作系列。

1.4 儀器條件

（1）色譜條件。SHISEIDO CAPCELL PAK MG III C18（150 mm×2.0 mm，5μm）色譜柱;流動(dòng)相：甲醇+5 mmol/L乙酸銨溶液（60+40），等度洗脫;流速：300 μL/min;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣量：1 μL。

（2）質(zhì)譜條件。離子化模式：電噴霧電離負(fù)離子模式（ESI-）;質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）;定量離子對(duì)：262.7>262.7，定性離子對(duì)：264.7>264.7、266.7>266.7、268.7>268.7。

1.5 測量過程

用液相色譜質(zhì)譜儀測定工作標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的峰面積，制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。待測樣液注入儀器測定，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線定量，得出樣液濃度。

2 測量結(jié)果分析

2.1 建立測量數(shù)學(xué)模型

根據(jù)測量過程建立測量數(shù)學(xué)模型：

（1）

式中：xi為試樣中待測物含量，μg/kg;ci為樣液中待測物的濃度，ng/mL;V為試樣經(jīng)處理后定容體積，mL;m1為試樣的質(zhì)量，g。

2.2 重復(fù)性測量結(jié)果

在相近的時(shí)間內(nèi)，由同一操作人員對(duì)樣品測量，10次測定結(jié)果分別為0.210 μg/kg、0.188 μg/kg、0.186 μg/kg、0.200 μg/kg、0.203 μg/kg、0.199 μg/kg、0.190 μg/kg、0.208 μg/kg、0.203 μg/kg和0.184 μg/kg，平均值X=0.197 μg/kg，標(biāo)準(zhǔn)偏差s=0.009 39。

3 測量不確定度評(píng)定

3.1 測量重復(fù)性引入的測量不確定分量

由2.2重復(fù)性測量結(jié)果計(jì)算可得標(biāo)準(zhǔn)不確定度，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3.2 工作曲線變動(dòng)性的不確定度分量

標(biāo)準(zhǔn)工作系列溶液分別進(jìn)行3次重復(fù)測定，數(shù)據(jù)處理見表1。

根據(jù)表1中的測試數(shù)據(jù)，用最小二乘法擬合線性回歸方程，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程：y=356 880x+

44 868，b=356 880，a=44 868，R=0.998 5。由工作曲線變動(dòng)性引起被測量溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（2）

（3）

式中：n為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線測量次數(shù)，n=18;P為樣品溶液測量次數(shù)，P=10;c為工作曲線各校準(zhǔn)濃度的平均值，c=1.45 ng/mL。

被測樣品平均含量為0.197 μg/kg，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線待測物濃度為c=0.197 ng/mL，（c-c）=（0.197-1.45）=1.57，，SR=6.846×105。則標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u（c）1=0.961，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度的不確定度分量

五氯酚酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書（編號(hào)91098b，唯一標(biāo)識(shí)21090491）給出相對(duì)擴(kuò)展不確定度為U=kurel（c）=0.02（k=2），因此urel（c）2=0.01。

3.4 定容體積引起的不確定度分量

10 mL離心管定容至2 mL，依據(jù)JJG 10—2005[3]其允許誤差為±0.2 mL，其允差不確定度按均勻分布計(jì)算為。不考慮過程中由溫差引起的不確定度。其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u（V）=0.115，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

3.5 取樣量引入的不確定度分量

電子天平的允差不確定度按矩形分布計(jì)算為，取樣所用萬分之一天平稱取2 g樣品，?=0.001 g。其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

3.6 合成不確定度

上述各分量互不相關(guān)，按照不確定度傳播率公式計(jì)算相對(duì)合成不確定度：urel（x）=

標(biāo)準(zhǔn)合成不確定度為u（x） =0.197×0.665=

0.131 μg/kg。

3.7 擴(kuò)展不確定度

取95%置信概率，包含因子k=2，擴(kuò)展不確定度u=ku=2×0.147=0.262 μg/kg。

4 測量不確定度報(bào)告

用液相質(zhì)譜法測定豬肉試樣中五氯酚酸鈉測量不確定度報(bào)告為X=0.197[-0.065，0.459] μg/kg，

k=2。采用經(jīng)典方法調(diào)整，用液相質(zhì)譜法測定豬肉試樣中五氯酚酸鈉測量不確定度報(bào)告為X=

0.197[0，0.491] μg/kg，k=2。

5 結(jié)論與討論

禁用藥物是常見食品檢測項(xiàng)目，其測量值低，接近于零，即使為負(fù)數(shù)也是合理的，可以按照GUM法對(duì)測量不確定度進(jìn)行評(píng)定，報(bào)告時(shí)對(duì)報(bào)告值加以修正，本研究采用經(jīng)典方法加以修正[3-4]。

5.1 經(jīng)典方法確定擴(kuò)展不確定度區(qū)間

經(jīng)典方法直接將擴(kuò)展不確定度區(qū)間從零開始調(diào)整，這樣測量不確定度則為不對(duì)稱區(qū)間，如圖1中（d）[5]。測量值低于0時(shí)，將測量值與測量區(qū)間同時(shí)調(diào)整，如圖1中（b）（c）。圖1中（a）則調(diào)整為0[0，0]，k=2。

5.2 各分量測量不確定度分析

評(píng)定中各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量說明：A類評(píng)定為測量重復(fù)性、工作曲線變動(dòng)性;B類評(píng)定為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、定容體積和取樣量。本研究所建立的測量評(píng)定方法，工作曲線變動(dòng)性引入測量不確定度貢獻(xiàn)最大，貢獻(xiàn)率為88.88%。

參考文獻(xiàn)

[1]阮鑫，陸春波，屈健.畜禽產(chǎn)品中五氯酚酸鈉殘留危害與分析[J].中國畜禽種業(yè)，2022，18（1）：54-56.

[2]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物源性食品中五氯酚殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜法：GB 23200.92—2016[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[3]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.專用玻璃量器：JJG 10—2005[S].北京：中國計(jì)量出版社，2005.

[4]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.測量不確定度評(píng)定與表示：JJF 1059.1—2012[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[5]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南：CNAS：GL006—2019[EB/OL].（2019-04-09）[2022-03-09].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2019/04/896487.shtml.