豬冷凍精液的解凍及人工授精技術(shù)

虎軍紅，李軍琪，關(guān)進(jìn)科，任碧清，陳 斌，張?jiān)?/p>

(1.武山縣城關(guān)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，甘肅 天水 741300；2.武山縣榆盤鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，甘肅 天水 741300；3.武山縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 天水 741300；4.武山縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，甘肅 天水 741300；5.武山縣畜牧獸醫(yī)事務(wù)服務(wù)中心，甘肅 天水 741300)

隨著豬人工授精技術(shù)在養(yǎng)豬業(yè)中的廣泛應(yīng)用，豬冷凍精液也不斷走向市場(chǎng)。然而，在給發(fā)情母豬配種前，冷凍精液的準(zhǔn)備遠(yuǎn)比常溫精液的準(zhǔn)備復(fù)雜得多，關(guān)鍵在于冷凍精液的解凍和稀釋環(huán)節(jié)。因此，盡管兩種精液的授精方法或所用輸精技術(shù)基本相同，然而冷凍精液的解凍和稀釋的科學(xué)與否會(huì)直接決定母豬配種的成敗。根據(jù)筆者在實(shí)踐工作中積累的經(jīng)驗(yàn)，本文將著重介紹豬冷凍精液的解凍、稀釋等詳細(xì)操作技術(shù)和步驟，以供同行參考。

1 所需物品及解凍前的準(zhǔn)備

(1)溫度計(jì)。準(zhǔn)備2支測(cè)量稀釋液和解凍水浴鍋中水的溫度的精準(zhǔn)溫度計(jì)，并做好標(biāo)記，以避免交叉使用和污染精液，用后應(yīng)及時(shí)沖洗干凈。如不能確定溫度計(jì)的精準(zhǔn)度，可用體溫計(jì)提前反復(fù)確定溫差。

(2)恒溫水浴鍋。恒溫水浴鍋用于稀釋液的預(yù)溫，孵浴少量分裝稀釋好的冷凍精液。如果條件允許，建議準(zhǔn)備2個(gè)水浴鍋，將一個(gè)水浴鍋中的水溫設(shè)置為30.5 ℃，將另一個(gè)水浴鍋中的水溫設(shè)置成37 ℃，水溫以精準(zhǔn)溫度計(jì)實(shí)測(cè)值為準(zhǔn)。

(3)電子秤。電子秤用于稱量冷凍精液的專用稀釋粉，可使用一次性稱量紙，或用量杯準(zhǔn)確稱取所需的稀釋粉。

(4)量杯。建議選用容積為1 000 mL以下的量杯。如果量杯的刻度不夠精準(zhǔn)，可以用電子秤稱取所需的純凈水或雙蒸水。在使用結(jié)束后，要及時(shí)用純凈水或雙蒸水沖洗，使量杯保持衛(wèi)生，隨后烘干備用。

(5)純凈水或雙蒸水。在配制稀釋液以及沖洗量杯和稀釋液專用的溫度計(jì)時(shí)，必須使用純凈水或雙蒸水，不可用含金屬礦物質(zhì)等雜質(zhì)的水，如礦泉水等。在使用前，可選用便攜式水質(zhì)測(cè)定儀測(cè)定水質(zhì)。

(6)稀釋液。冷凍精液的專用稀釋粉應(yīng)利用冰箱進(jìn)行冷藏保存，在使用前提前1 h取出備用。進(jìn)口的豬冷凍精液為3 mL/支，即每支精液管含3 mL的冷凍精液，因而應(yīng)按160 mL純凈水或雙蒸水加入8 g稀釋粉的比例配制稀釋液。當(dāng)稀釋粉在水中完全溶解后，將盛有稀釋液的量杯放入水溫為30.5 ℃的水浴鍋中，經(jīng)過(guò)30 min的平衡后方可使用。稀釋液要現(xiàn)用現(xiàn)配，冷凍精液專用稀釋粉打開(kāi)包裝后要盡快用完；如不能一次性用完，剩余的要繼續(xù)冷藏，但不宜長(zhǎng)時(shí)間存放。

(7)空調(diào)或電暖設(shè)備。在對(duì)豬冷凍精液進(jìn)行解凍前，開(kāi)啟空調(diào)或電暖設(shè)備，使室溫上升至28 ℃～30 ℃，這將有利于維持冷凍精液解凍后精子的活力。

(8)泡沫箱。泡沫箱具有良好的保溫性，可用于豬冷凍精液的解凍，準(zhǔn)備2個(gè)，其中一個(gè)備用。在給豬冷凍精液解凍前，在泡沫箱中至少裝入10 L以上的溫度為50.5 ℃的熱水，水越多水溫的降低速度越慢，越有利于對(duì)多管冷凍精液的解凍。在給冷凍精液解凍時(shí)，應(yīng)隨時(shí)監(jiān)測(cè)水溫，并根據(jù)所測(cè)結(jié)果適時(shí)補(bǔ)充熱水。不宜采用水浴鍋解凍，因?yàn)樗″佒胁煌瑢哟蔚乃哂胁煌臏囟取?/p>

(9)干紙巾。干紙巾用于接取冷凍精液管，擦干解凍后管壁的水分，防止污染和影響精液品質(zhì)。

(10)輸精瓶。每支冷凍精液需配備2支干凈的一次性輸精瓶，可多準(zhǔn)備一支用于留樣孵浴觀察。

(11)一次性注射器。以20 mL～50 mL規(guī)格的一次性注射器為宜，用于抽取稀釋液以沖洗冷凍精液管，不宜反復(fù)使用，或交叉用于不同品種公豬的精液。

(12)剪刀。用于剪斷冷凍精液管兩端，讓解凍后的冷凍精液順利流入裝有稀釋液的輸精瓶。在同時(shí)對(duì)不同品種或品系公豬的冷凍精液進(jìn)行解凍時(shí)，應(yīng)注意及時(shí)清潔剪刀，防止精液品種交叉。

(13)長(zhǎng)柄彎頭鉗。用于從液氮罐中夾取冷凍精液并在水浴中解凍，建議使用25 cm～30 cm長(zhǎng)的彎頭鉗。

(14)計(jì)時(shí)器。用于解凍中計(jì)時(shí)使用，如無(wú)計(jì)時(shí)器，可用手機(jī)代替。

2 冷凍精液的解凍步驟

(1)向準(zhǔn)備好的一個(gè)輸精瓶中倒入60 mL提前配制并已經(jīng)預(yù)溫到30.5 ℃的冷凍精液稀釋液。

(2)用長(zhǎng)柄彎頭鉗從液氮罐中快速找到并取出需要解凍的冷凍精液管，然后用紙巾小心接住冷凍精液管，同時(shí)核對(duì)標(biāo)記于管壁上的種豬信息。

(3)用長(zhǎng)柄彎頭鉗迅速夾住冷凍精液管的中部，快速將其以45°的方向放入溫度為50.5 ℃的溫水中，并在溫水中勻速移動(dòng)以進(jìn)行解凍，滿50 s后立即取出，并用紙巾快速擦干管壁水分。

(4)豎立擦干后的冷凍精液管，并用剪刀剪掉上端靠近氣泡的封裝球，然后倒置于裝有稀釋液的輸精瓶口處，并緊貼瓶口側(cè)壁。待氣泡上移到管頂后剪掉另一端的封裝球，讓管內(nèi)精液貼著瓶壁流入輸精瓶?jī)?nèi)，再用一次性注射器吸取稀釋液，將管內(nèi)殘留的精液沖入輸精瓶?jī)?nèi)。

(5)蓋好輸精瓶的瓶蓋，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)搖勻，然后將稀釋后的精液平均分成2瓶，并分別貼壁加注稀釋液至80 mL，排除氣體后蓋好瓶蓋，隨后進(jìn)行編號(hào)標(biāo)記。

(6)稀釋的精液在被送去配種前可預(yù)留少量，并裝入另一個(gè)輸精瓶中。將預(yù)留的稀釋精液連同輸精瓶一同放在溫度為37 ℃的水浴中，停留5 min～10 min后觀察精子活力。

(7)冷凍精液經(jīng)解凍并稀釋后應(yīng)立即給母豬配種。在運(yùn)送至配種舍的過(guò)程中，應(yīng)將稀釋精液放入便攜式恒溫箱內(nèi)，或者用37 ℃的水袋和干毛巾做好保溫，且應(yīng)在稀釋后30 min內(nèi)完成輸精。在對(duì)冷凍精液進(jìn)行大批量解凍時(shí)，要求多人配合流水作業(yè)，一次運(yùn)送不宜超過(guò)4瓶。

3 冷凍精液的儲(chǔ)存和液氮罐的維護(hù)

冷凍精液必須儲(chǔ)存在裝有液氮的液氮罐中。轉(zhuǎn)移或挑選時(shí)，在液氮外的停留時(shí)間不宜超過(guò)5 s，應(yīng)盡量在罐口內(nèi)進(jìn)行，或者在裝有液氮的泡沫箱中進(jìn)行。

平時(shí)應(yīng)將裝有液氮的液氮罐置于陰涼處，選取冷凍精液后應(yīng)及時(shí)蓋上罐蓋，防止液氮受熱揮發(fā)。液氮罐需定期稱重以判斷剩余的液氮量，接近預(yù)警重量時(shí)要及時(shí)補(bǔ)充液氮，使冷凍精液管完全沉浸于液氮中。按液氮密度0.88 kg/L計(jì)算60%液氮余量的重量，再加上空罐重量，計(jì)算出預(yù)警重量。建議另配一個(gè)液氮罐，并單獨(dú)儲(chǔ)備一定數(shù)量的液氮，以方便為存放冷凍精液的液氮罐及時(shí)添加液氮?？蓞⒄毡?中的參數(shù)判斷液氮罐中液氮的余量。

4 人工授精

4.1 授精前的準(zhǔn)備

應(yīng)選擇合適的輸精槍，輸精槍的大小由后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、老母豬的體型大小決定，選大、中或小相應(yīng)規(guī)格的一次性輸精槍2把，其中1把留作備用。準(zhǔn)備1塊干凈抹布，5 000 mL溫水，5 000 mL 0.02%～0.10%高錳酸鉀溫水，1瓶專用潤(rùn)滑劑，1把專用清洗器。

4.2 清洗消毒

配種員首先消毒雙手，并立即佩戴一次性手套。用溫水清洗母豬外陰和臀部周圍，再用高錳酸鉀溫水進(jìn)行消毒，隨后用抹布擦干外陰口。

4.3 輸精槍的使用

用潤(rùn)滑劑涂抹輸精槍的海綿，以斜向上方45°的方向緩慢插入母豬生殖道直至無(wú)法插進(jìn)，此時(shí)逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3圈，以輸精槍插入約三分之二為宜。當(dāng)無(wú)法將輸精槍插進(jìn)時(shí)，將往回拉1 cm左右，隨后連接輸精瓶開(kāi)始輸精。輸精時(shí)應(yīng)抬高輸精瓶，輕輕擠壓以排出母豬生殖道中的空氣。輸精前要先搖勻精液，插入輸精槍時(shí)配種員的手不宜直接觸碰輸精槍前三分之二的部分。

4.4 輸精

輸精時(shí)精液的輸入要緩慢，不能用手?jǐn)D壓輸精瓶。精液輸送到一半時(shí)，可以在輸精瓶的底部扎一個(gè)小口，讓精液慢慢流入，整個(gè)輸精過(guò)程應(yīng)控制在5 min左右。

在輸精的同時(shí)，配種員可以用手按壓母豬背部，按摩外陰、臀部?jī)?nèi)側(cè)、乳房等敏感區(qū)域，以刺激子宮收縮倒吸精液。

輸精完畢時(shí)不宜立即拔出輸精槍，可以在輸精槍末端5 cm左右處對(duì)折，并拔下精液瓶套在輸精槍對(duì)折末端，以防止精液倒流。同時(shí)繼續(xù)按壓母豬背部2 min～3 min，再等3 min～5 min后拔出輸精槍，完成輸精過(guò)程。