妊娠期糖尿病患者血清let-7、Irisin、Kisspeptin、SF水平變化及其相關(guān)性研究

褚 璐,任建華,于曉忠,李秋云

(開(kāi)灤總醫(yī)院 1.趙各莊醫(yī)院 內(nèi)分泌科;2.內(nèi)分泌科,河北 唐山 063000)

妊娠期糖尿病(GDM)是指在懷孕期間首次發(fā)生或首次發(fā)現(xiàn)的任何程度的血糖異常，包括懷孕早期未確診為2型糖尿病的案例以及后期真正發(fā)展成GDM的案例[1-2]。GDM是全世界母親和嬰兒死亡和患有其他疾病的主要原因之一[3-5]，研究發(fā)現(xiàn)患有GDM的母親有發(fā)生妊娠期高血壓、子癇前期和剖腹產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)[6]，GDM婦女所生的嬰兒可能會(huì)有巨嬰兒的危險(xiǎn)，且會(huì)出現(xiàn)新生兒低血糖和發(fā)展成2型糖尿病的情況[7-9]。因此，盡早發(fā)現(xiàn)GDM并及時(shí)對(duì)孕婦進(jìn)行診斷、治療，對(duì)妊娠母親和嬰兒具有重要的意義。近年來(lái)，隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子免疫學(xué)的發(fā)展，有關(guān)因子在GDM發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[10-11]。Irisin是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種肌肉因子，能夠改善葡萄糖耐量；Kisspeptin在妊娠過(guò)程中具有調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞浸潤(rùn)作用；血清鐵蛋白(SF)是一種炎性反應(yīng)蛋白，可能參與了胰島素抵抗的過(guò)程，與GDM發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明let-7在正常組小鼠中表達(dá)水平低于高脂小鼠，對(duì)GDM早期預(yù)測(cè)有臨床意義[12]。本研究通過(guò)檢測(cè)GDM患者血清let-7、Irisin、Kisspeptin、SF水平，并分析其相關(guān)性，以期為GDM患者的干預(yù)提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)在妊娠12-18周期間就診于產(chǎn)科門(mén)診初診，并于妊娠 12-18周于內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)室行50 g葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)；(2)妊娠 12-18周。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠前糖耐量異常、嚴(yán)重脂代謝紊亂、妊娠期高血壓、多囊卵巢綜合征、甲狀腺疾病等內(nèi)分泌疾病及妊娠期急慢性心臟、肝腎等臟器疾病。根據(jù)美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)制定的GDM標(biāo)準(zhǔn)[13]：各受試者進(jìn)行50 g OGTT實(shí)驗(yàn)，診斷標(biāo)準(zhǔn)為：空腹血糖(FPG)≥5.3 mmol/L、1 h餐后血糖(1 h PG)≥10.0 mmol/L、2 h餐后血糖(2 hPG)≥8.6 mmol/L，其中任意一項(xiàng)達(dá)標(biāo)即可診斷為 GDM。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)選取2016年12月至2017年10月初次確診為妊娠糖尿病的100例孕婦為研究對(duì)象(GDM組)，孕婦年齡29.9±4.3歲，平均孕周15.2±1.2周。對(duì)照組(CG組)為同期入院體檢的OGTT實(shí)驗(yàn)血糖正常的60例孕婦，孕婦平均年齡28.9±3.7歲，平均孕周16.1±0.9周。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1測(cè)量方法 采用醫(yī)院標(biāo)準(zhǔn)身高、體重測(cè)量?jī)x對(duì)研究對(duì)象身高、體重進(jìn)行測(cè)量，計(jì)算 BMI[BMI=體重(kg)/身高2(m)]。

1.2.2觀察指標(biāo) 比較兩組孕婦一般情況，包括年齡、孕周、BMI、FPG、1hPG、2hPG、HbA1c、空腹胰島素；比較兩組孕婦血清let-7、Irisin、Kisspeptin、SF水平，分析各因子與GDM的相關(guān)性。

1.2.3血清生化指標(biāo)檢測(cè) 受試者均在禁食12 h后，于OGTT試驗(yàn)當(dāng)日抽取孕婦靜脈血5 mL，于4℃條件下，3 000 rpm/min離心15 min后取上層血清保存于-80℃用于后續(xù)檢測(cè)。采用全自動(dòng)生化分析儀對(duì)孕婦FPG、1hPG、2hPG、HbA1c、空腹胰島素(FINS)等進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4血清各因子檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒(上海通蔚生物科技有限公司) 檢測(cè)血清中Kisspeptin，具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。ELISA試劑盒檢測(cè)血清Irisin，試劑盒為人鳶尾素(Irisin)ELISA試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)，實(shí)驗(yàn)步驟按說(shuō)明書(shū)操作。采用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)技術(shù)分析GDM組和CG組受試者let-7的mRNA表達(dá)水平，RT-qPCR試劑盒購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司，提取總RNA后在260 nm與280 nm處測(cè)定其光密度值，具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。血清SF采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較GDM組和CG組的年齡、孕周比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；孕前、孕期BMI比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；GDM組孕期體質(zhì)量增加值明顯高于CG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 GDM組和CG組一般資料比較

2.2 生化指標(biāo)比較GDM組FPG、1hPG、2hPG、HbA1c、FINS均高于CG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 GDM組和CG組生化指標(biāo)比較

2.3 血清中Irisin、Kisspeptin、SF和let-7因子水平比較Kisspeptin、SF和let-7在GDM組孕婦血清表達(dá)水平均高于CG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而Irisin在GDM組孕婦血清表達(dá)水平低于CG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組孕婦4種因子表達(dá)水平比較

2.4 GDM影響因素的Logistic回歸分析

采用Logistic回歸分析以判斷Kisspeptin、Irisin、SF和let-7是否為GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素，以是否發(fā)生GDM為因變量(以患病為1，未患病為0)，將影響GDM 發(fā)生的相關(guān)因素進(jìn)行Logistic 回歸分析，納入變量標(biāo)準(zhǔn)α=0.05，剔除變量標(biāo)準(zhǔn)β=0.05，結(jié)果顯示Irisin為GDM發(fā)生的保護(hù)因素，let-7、SF、Kisspeptin為GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素，具體見(jiàn)表4。

表4 Kisspeptin、Irisin、SF和let-7與GDM Logistic回歸分析

3 討論

妊娠期糖尿病是最常見(jiàn)的妊娠代謝并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為妊娠前各項(xiàng)糖代謝指標(biāo)正常，而妊娠后才出現(xiàn)的一種糖尿病，發(fā)病率占妊娠總數(shù)的10%-15%[14]，具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，一般認(rèn)為主要與年齡、肥胖、不良產(chǎn)科病史以及糖尿病家族史等因素有關(guān)[15]。妊娠糖尿病對(duì)母親和胎兒都有風(fēng)險(xiǎn)，GDM可增加流產(chǎn)、早產(chǎn)、感染等發(fā)生率，順利出生的嬰兒后期發(fā)展成肥胖、糖尿病和心血管疾病的概率也大大增加。故早期發(fā)現(xiàn)妊娠糖尿病，有效控制妊娠患者血糖對(duì)母親和保證胎兒正常生長(zhǎng)發(fā)育非常重要。近年來(lái)，有關(guān)妊娠糖尿病的發(fā)病機(jī)制研究逐漸成為科學(xué)家關(guān)注的焦點(diǎn)，也為妊娠糖尿病的治療提供新思路。

鐵是細(xì)胞發(fā)揮功能的必需金屬元素之一，可以確保胎兒的正常生長(zhǎng)發(fā)育。一般認(rèn)為，鐵與氧化應(yīng)激相關(guān)，而氧化應(yīng)激反應(yīng)是GDM的危險(xiǎn)因素。因此，評(píng)價(jià)妊娠糖尿病患者血清SF水平與GDM的相關(guān)性，并探索高血清鐵蛋白對(duì)孕婦的負(fù)面影響對(duì)妊娠高血糖婦女和嬰兒都非常重要。有研究發(fā)現(xiàn)，與非GDM孕婦相比，GDM女性患者血漿鐵蛋白、孕前BMI、Hb和血糖水平都較高[16]。當(dāng)SF>200 ng/mL時(shí)，孕婦不需要再補(bǔ)充鐵制劑[17]。本研究通過(guò)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中SF水平，結(jié)果表明GDM患者血清SF水平明顯高于CG組，與以往研究結(jié)果一致[17]。多因素回歸分析顯示，受試者血清SF與妊娠糖尿病呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。因此，檢測(cè)妊娠期婦女血清SF水平可以實(shí)現(xiàn)對(duì)GDM的提前預(yù)防。

胰島素抵抗是指機(jī)體攝取利用葡萄糖率下降，機(jī)體為維持血糖穩(wěn)態(tài)會(huì)分泌更多的胰島素，易導(dǎo)致代謝綜合征和糖尿病。Irisin是研究者新發(fā)現(xiàn)的一類棕色脂肪以及轉(zhuǎn)化脂肪類型的新激素。有研究發(fā)現(xiàn)Irisin在妊娠糖尿病患者血清中水平明顯低于正常孕婦，Irisin與胰島素抵抗具有相關(guān)性，其水平的降低是胰島抵抗的原因之一[18]。有研究發(fā)現(xiàn)懷孕初期血清Irisin降低，其水平降低與GDM風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[17]。也有研究發(fā)現(xiàn)，Irisin水平在糖尿病和非糖尿病母親之間或在超重/肥胖和正常體重的母親之間沒(méi)有顯著性差異[19]。本研究利用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中Irisin，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GDM組Irisin水平低于正常組孕婦Irisin水平，相關(guān)性分析顯示受試者Irisin水平與妊娠糖尿病呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，為GDM發(fā)生的保護(hù)因素。因此，Irisin在妊娠糖尿病發(fā)展中起到的具體作用以及作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

Kisspeptin最先被鑒定為各類腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制因子，屬于神經(jīng)肽家族，能夠調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物生殖的關(guān)鍵因子。而目前越來(lái)越多研究表明，Kisspeptin表達(dá)位置主要集中于大腦和胎盤(pán)組織，表達(dá)在胎盤(pán)組織的Kisspeptin能在人類早期妊娠過(guò)程中作為潛在的生物標(biāo)志物檢測(cè)受試者生理病理情況[20]。本研究結(jié)果顯示，血清Kisspeptin與GDM呈正相關(guān)關(guān)系，為GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素[21-22]。綜合以前結(jié)果可知，Kisspeptin可作為妊娠早期新發(fā)現(xiàn)標(biāo)志物的潛在作用和作為妊娠相關(guān)疾病的診斷或治療目標(biāo)，但Kisspeptin在妊娠早期或胎盤(pán)相關(guān)疾病中的診斷效用和治療靶點(diǎn)尚未完全證實(shí)。因此，還存在許多未解決的問(wèn)題需要闡明。

let-7屬于microRNAs家族成員，在多種腫瘤組織中表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)，因此也被認(rèn)為是腫瘤抑制基因。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，let-7是糖代謝和胰島素敏感性調(diào)控的關(guān)鍵因素，且能生物放大。馬敬等[12]通過(guò)對(duì)比正常組小鼠和高脂組小鼠H19、let-7、LPL以及INSR-β、IRS-2和INSR相對(duì)表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，let-7參與妊娠糖尿病的發(fā)展，臨床上檢測(cè)let-7可以實(shí)現(xiàn)對(duì)GDM的早期預(yù)防。本研究利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)妊娠糖尿病患者血清let-7表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GDM組孕婦let-7水平明顯高于CG組孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析也顯示let-7與GDM具有正相關(guān)關(guān)系，為GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素。臨床上可以增加對(duì)let-7因子的檢測(cè)，對(duì)妊娠糖尿病進(jìn)行早期預(yù)防并干預(yù)治療。

綜上所述，let-7、Irisin、Kisspeptin、SF 4個(gè)因子從不同的途徑對(duì)妊娠糖尿病的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮著不同的作用，可作為GDM檢測(cè)的輔助指標(biāo)，早期監(jiān)測(cè)其水平對(duì)妊娠糖尿病預(yù)測(cè)、預(yù)防至關(guān)重要。這些因子也可能成為GDM治療的新靶標(biāo)，有待進(jìn)一步收集數(shù)據(jù)補(bǔ)充研究。