多囊卵巢綜合征患者血清PPARr、SFRP5的表達(dá)及對(duì)胰島素抵抗的診斷價(jià)值

王麗先，吳暖暖，林芳，金潔瓊，王燕

(青島市膠州中心醫(yī)院婦科，山東 青島 266300)

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是常見(jiàn)婦科內(nèi)分泌疾病，主要表現(xiàn)為雄激素分泌過(guò)多、卵巢多囊性改變、排卵功能障礙、代謝功能異常等，在育齡期女性中發(fā)病率約為6%，是女性不孕不育的常見(jiàn)原因之一[1]。部分PCOS患者伴有胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和高胰島素血癥，增加子宮內(nèi)膜癌、血脂異常、心血管疾病和2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)，誘發(fā)多種慢性消耗性疾病，嚴(yán)重影響女性健康[2]。過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ，PPARγ)能調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞的增殖分化及炎性因子的釋放，對(duì)糖脂代謝的調(diào)控具有重要作用[3]。分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(Secreted Frizzled Related Protein 5，SFRP5)作為抗炎脂肪因子，可抑制脂肪組織中炎癥細(xì)胞的激活，減少炎性因子分泌[4]。有研究[5]表明，POCS的發(fā)病過(guò)程與IR密切相關(guān)，而PPARγ及SFRP5能夠調(diào)節(jié)糖、脂代謝過(guò)程，可能直接或間接參與了IR的發(fā)生過(guò)程。因此，本研究擬通過(guò)分析PCOS患者PPARγ、血清SFRP5、IR及糖、脂代謝情況，明確PPARγ、SFRP5與胰島素抵抗及其它指標(biāo)的相關(guān)性，為PCOS的評(píng)估及臨床干預(yù)提供進(jìn)一步的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年6月至2021年12月青島市膠州中心醫(yī)院收治的102例PCOS患者為研究對(duì)象，根據(jù)胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)將患者分為IR組(HOMA-IR≥2.69，n=58)和非IR組(HOMA-IR<2.69，n=44)。本研究經(jīng)院倫理委員審核批準(zhǔn)，患者及其家屬知情同意。兩組患者年齡、BMI、家族史、月經(jīng)情況、平均卵巢體積、血壓及腰臀比等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《多囊卵巢綜合征中國(guó)診療指南》中關(guān)于PCOS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：患者表現(xiàn)為無(wú)排卵或稀發(fā)排卵；月經(jīng)紊亂或出現(xiàn)高雄激素血癥；經(jīng)超聲檢查至少一側(cè)卵巢體積>10 cm或直徑2～9 cm小卵泡>12個(gè)，以上3種情況滿足其中兩種并排除柯興氏綜合征、先天性腎上腺皮質(zhì)增生等其他造成雄激素過(guò)高的病因；(2)均為育齡期女性。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在排卵性月經(jīng)失調(diào)；(2)子宮內(nèi)膜異位癥；(3)合并嚴(yán)重肝腎功能不全、循環(huán)系統(tǒng)疾病或惡性腫瘤；(4)伴其他內(nèi)分泌系統(tǒng)疾??；(5)納入研究前3個(gè)月內(nèi)有激素類藥物史或手術(shù)史。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 方法

抽取所有受試者晨起空腹外周靜脈血標(biāo)本5 mL，3 000 rpm離心10 min取血清于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?1)采用酶聯(lián)免疫吸附法(晶抗生物工程有限公司)檢測(cè)血清PPARγ、SFRP5、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、促黃體生成素(LH)、睪酮(T)表達(dá)水平，選取聚苯乙烯板條，將待測(cè)樣本10 μL置于板條的反應(yīng)孔內(nèi)，加入樣本稀釋液40 μL，將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL加入標(biāo)準(zhǔn)品孔內(nèi)。反應(yīng)孔及標(biāo)準(zhǔn)品孔均加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.1 mL，于37 ℃下孵育45 min，經(jīng)洗滌后加入TMB底物0.1 mL，于37 ℃下孵育30 min。各孔均加入硫酸終止液50 μL，于15 min內(nèi)在450 nm處檢測(cè)各孔OD值并求出患者上述指標(biāo)表達(dá)水平。(2)采用全自動(dòng)蛋白分析儀(Beckman，IMMAGE 800)行免疫比濁法檢測(cè)血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)表達(dá)水平。(3)收集受試者空腹血糖(FPG)，檢測(cè)患者空腹血漿胰島素(Fins)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平，利用穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估穩(wěn)胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，即HOMA-IR=FPG× FIns/22.5。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清PPARγ、SFRP5、炎癥因子及性激素水平比較

IR組患者PPARγ、血清SFRP5水平低于非IR組；hs-CRP、IL-6、LH及T水平高于非IR組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者血清PPARγ、SFRP5、炎癥因子及性激素水平比較

2.2 兩組患者糖脂代謝指標(biāo)比較

IR組患者FPG、FIns、TC、TG水平高于非IR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者糖脂代謝指標(biāo)比較

2.3 血清PPARγ、SFRP5診斷PCOS患者合并IR的價(jià)值

ROC曲線分析顯示，血清PPARγ、SFRP5及二者聯(lián)合診斷PCOS患者合并IR的效能均較高(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 PPARγ、SFRP5診斷PCOS患者合并IR的價(jià)值

2.4 PPARγ、SFRP5與IR及其他指標(biāo)的相關(guān)性

PCOS患者PPARγ表達(dá)與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、LH、T、FPG、FIns、TG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，SFRP5與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、FPG、FIns、TC、TG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 PPARγ、SFRP5與IR及其他指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

PCOS患者可出現(xiàn)不同程度的IR，國(guó)外研究[7]顯示，PCOS患者IR發(fā)生率為50%～70%，糖、脂代謝與其發(fā)病密切相關(guān)。由于PCOS患者存在線粒體突變或功能異常，影響細(xì)胞能量代謝，引起胰島細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致胰島素代謝紊亂，故IR也是目前研究和治療針對(duì)的重要臨床靶點(diǎn)之一[8]。PPARγ參與卵巢的正常生理功能調(diào)節(jié)，是調(diào)節(jié)卵巢功能的關(guān)鍵因子；SFRP5由脂肪組織分泌，是調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)及糖、脂代謝的重要脂肪因子。有研究[9]發(fā)現(xiàn)，血清PPARγ、SFRP5的表達(dá)水平與PCOS患者的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。若能明確血清PPARγ及SFRP5與IR的關(guān)系，對(duì)PCOS患者臨床治療效果的提升有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，IR組患者血清PPARγ、SFRP5水平低于非IR組(P<0.05)，F(xiàn)PG、FIns、TC、TG、血清hs-CRP、IL-6、LH及T水平均高于非IR組(P<0.05)，說(shuō)明PCOS合并IR患者的PPARγ及SFRP5表達(dá)更低，雄激素分泌更多，糖、脂代謝紊亂情況更加嚴(yán)重，提示PPARγ、SFRP5可能與IR有關(guān)，且IR在促進(jìn)性激素及糖、脂分泌，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，加重卵巢功能障礙方面具有重要作用?；贗R的病理基礎(chǔ)，PCOS患者出現(xiàn)不同代謝指標(biāo)水平差異的原因包括：(1)IR患者出現(xiàn)高胰島素血癥，過(guò)多的胰島素作用于卵巢顆粒細(xì)胞，激活細(xì)胞內(nèi)17α羥化酶，促進(jìn)雄烯二酮的合成，造成高雄激素血癥，再通過(guò)下調(diào)肝臟性激素結(jié)合球蛋白水平，致使血清T水平升高，加重患者性激素的紊亂，卵巢功能障礙進(jìn)一步加重[10]；(2)IR患者血液中的葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞的通路受阻，影響脂肪的合成代謝，使糖、脂肪代謝紊亂[11]；(3)PCOS患者長(zhǎng)期處于慢性炎癥狀態(tài)，有研究[12]表明，IR與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，患者發(fā)生性激素紊亂、胰島素抵抗，可促進(jìn)脂多糖介導(dǎo)卵巢組織炎癥因子大量釋放，同時(shí)通過(guò)反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)加重高胰島素血癥，最終引起IR的升高。

本研究進(jìn)一步分析了PPARγ、SFRP5與IR及其他指標(biāo)的關(guān)系，結(jié)果顯示，血清PPARγ及SFRP5診斷PCOS患者合并IR的效能均較高，而二者聯(lián)合診斷PCOS患者合并IR的效能最高，AUC達(dá)0.809，且PPARγ表達(dá)與SFRP5成正相關(guān)(P<0.05)，與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、LH、T、FPG、FIns、TG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，SFRP5與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、FPG、FIns、TC、TG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，提示PPARγ與SFRP5可作為診斷PCOS患者是否伴發(fā)IR的輔助檢查手段，也說(shuō)明PPARγ與SFRP5通過(guò)調(diào)控機(jī)體細(xì)胞因子及代謝物水平，參與IR的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，原因可能為PPARγ作為激素、內(nèi)源性代謝物及外源性化合物的傳感器，能夠調(diào)節(jié)與細(xì)胞分化，發(fā)育和代謝相關(guān)基因的表達(dá)，參與調(diào)控淋巴細(xì)胞分泌IL-6等炎癥因子，是脂肪細(xì)胞增殖、分化及胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要調(diào)節(jié)因子，而SFRP5是PPARγ在脂肪細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄調(diào)控的靶基因[13]。另外，PPARγ的正常表達(dá)可維持卵巢生理功能的穩(wěn)定，其與顆粒細(xì)胞中雌激素應(yīng)答元件相結(jié)合，可抑制芳香化酶表達(dá)，限制雄激素到雌激素的轉(zhuǎn)換，并調(diào)節(jié)LH的分泌，刺激T釋放[14]。王超等[15]對(duì)IR小鼠模型采用氧化苦參堿后發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿通過(guò)上調(diào)PPARγ水平來(lái)改善肝臟脂質(zhì)代謝及胰島素紊亂。SFRP5內(nèi)富含半胱氨酸，該氨基酸也大量存在于配體蛋白質(zhì)Wnt受體中SFRP5可充當(dāng)Wnt受體與配體結(jié)合，負(fù)向調(diào)控分泌蛋白的Wnt信號(hào)通路，阻斷炎癥因子釋放信號(hào)的傳導(dǎo)，從而降低炎癥因子水平，減輕炎癥反應(yīng)[16]。國(guó)外研究[17]表明，血清SFRP5參與肝臟的糖異生過(guò)程，其高表達(dá)狀態(tài)可抑制糖異生，通過(guò)激活胰島素AKT、相關(guān)信號(hào)通路，提高細(xì)胞組織對(duì)胰島素的敏感性，從而改善患者IR情況。

綜上所述，PCOS患者合并IR患者血清PPARγ及SFRP5呈低表達(dá)，PPARγ與SFRP5通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、卵巢功能及糖脂代謝，改善患者IR，二者均可作為診斷PCOS患者是否伴發(fā)IR的輔助檢查手段。