UPLC法測定醋酸阿托西班含量及有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)研究

林強(qiáng)

摘要：醋酸阿托西班是子宮內(nèi)及蛻膜、胎膜上受體的催產(chǎn)素競爭性的拮抗劑，能有效幫助早產(chǎn)的孕婦推遲即將來臨的早產(chǎn)，達(dá)到保胎的目的。目前通常采用HPLC法測定醋酸阿托西班含量及有關(guān)物質(zhì)，其檢測時間較長，化學(xué)試劑用量大，本文參照HPLC測定方法，進(jìn)行UPLC含量及有關(guān)物質(zhì)測定方法學(xué)研究。

關(guān)鍵詞： HPLC、UPLC、醋酸阿托西班、方法學(xué)

【中圖分類號】 R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）12--01

原料藥生產(chǎn)過程中，需嚴(yán)格控制每一道工序純化產(chǎn)物的有關(guān)物質(zhì)，故而每次純化收集的餾分都需經(jīng)過檢測，檢測符合要求后方可轉(zhuǎn)入下一道工序。目前生產(chǎn)過程中的檢測，主要以高效液相色譜儀（HPLC）進(jìn)行檢測。其單次檢測耗時較長，大批量生產(chǎn)時檢測次數(shù)多，需配備較多的高效液相色譜儀（HPLC）及較長的檢測周期以滿足生產(chǎn)的需求，設(shè)備、時間及人工成本較高。

目前，超高效液相色譜儀（UPLC）發(fā)展技術(shù)已十分成熟，其采用的色譜柱填料粒徑更小，更利于有關(guān)物質(zhì)的分離。相比較于高效液相色譜儀（HPLC），它的主要優(yōu)勢有分離度高，檢測時間短，靈敏度更高，溶劑用量小等優(yōu)點。如果能在原料藥生產(chǎn)過程中使用，能夠大大降低單次檢測時長，檢測周期都能較大的縮短，對于原料藥生產(chǎn)過程的成本控制是非常有效的。而且，超高效液相色譜儀（UPLC）具有靈敏度高的優(yōu)點，對于產(chǎn)品質(zhì)量的控制也能起到很大的作用。

本文根據(jù)醋酸阿托西班原料藥HPLC測定方法，進(jìn)行UPLC方法學(xué)研究，旨在探討UPLC條件下中間控制過程檢測的適用性。

1. 儀器及試劑

本次使用的是waters公司生產(chǎn)的超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)，C18色譜柱，規(guī)格為：2.1×50mm，1.8微米;試劑為：乙腈，純化水，溶劑：50mmol/L磷酸二氫鉀溶液。

2. 試驗

2.1專屬性試驗：

分別稱取經(jīng)過結(jié)構(gòu)確認(rèn)的，生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的相關(guān)雜質(zhì)（雜質(zhì)1、雜質(zhì)3、雜質(zhì)9、雜質(zhì)27），用溶劑進(jìn)行稀釋配制成試液。

將目標(biāo)產(chǎn)品阿托西班用溶劑配制成供試品溶液，與各雜質(zhì)試液按（濃度比約為100：1）比例混合配制成系統(tǒng)適用性溶液，并對該系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)行檢測，確定該洗脫條件下各組分分離及柱效情況。要求各組分USP分離度≥1.5，USP理論塔板數(shù)≥5000。檢測結(jié)果如下：

從上表可以看出，系統(tǒng)適用性溶液各組分USP分離度>1.5，理論塔板數(shù)>25000，各組分之間均能達(dá)到有效分離，系統(tǒng)適用性良好。

2.2耐用性試驗：

2.2.1、分別采用0.15ml/min、0.20ml/min、0.25ml/min，三個不同的流速，對系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)行檢測，確定不同流速情況下系統(tǒng)適用性溶液分離情況;

2.2.2、分別采用三根相同規(guī)格，不同品牌色譜柱，按0.2ml/min的流速，對系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)行檢測，確定不同品牌色譜柱情況下該系統(tǒng)適用性溶液分離情況。

通過檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同流速情況下，系統(tǒng)適用性溶液各組分USP分離度均>1.5，理論塔板數(shù)均>25000，流速的細(xì)微變化對樣品檢測分離無影響;不同品牌色譜柱之間檢測結(jié)果同樣滿足分離度及柱效要求，保留時間基本一致。

2.3定量限及檢測限試驗：

通過檢測，通常信噪比達(dá)到10～15，可作為定量限;信噪比達(dá)到3～5，可作為檢測限。定量限及檢測限均符合要求，滿足日常生產(chǎn)需求。

2.4線性范圍試驗：

取溶劑，定量限試液進(jìn)樣1ul作為最低點，取阿托西班配制樣品溶液，分別進(jìn)樣0.5ul、1.0ul、1.5ul、2.0ul、2.5ul， 檢測結(jié)果峰面積分別為142、2837301、5866774、8837434、11769891、14843102，通過計算得出R2=0.9999，即當(dāng)前樣品濃度下，在當(dāng)前的進(jìn)樣量范圍內(nèi)，結(jié)果滿足線性關(guān)系。

2.5準(zhǔn)確度（回收率）試驗：

配制成阿托西班含量分別為80%、100%、120%的三組樣品，每組檢測3次，共計9次，并計算其回收率。回收率（%）=實際測定值/理論值*100%，通過結(jié)果計算回收率為100.13%，符合要求。

穩(wěn)定性試驗：

配制樣品溶液進(jìn)行穩(wěn)定性考察，分別在：0小時、2小時、4小時、8小時、12小時、24小時、30小時進(jìn)樣測定，樣品峰面積RSD≤0.6%。樣品溶液穩(wěn)定性良好。

2.6進(jìn)樣精密性試驗：

2.7.1、配制阿托西班樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針進(jìn)行測試進(jìn)樣精密度，確定設(shè)備重復(fù)性，保留時間及峰面積RSD分別為0.8%;0.6%。

2.7.2、使用不同實驗室，同型號設(shè)備，相同參數(shù)條件，不同操作人員連續(xù)進(jìn)樣6針進(jìn)行檢測中間精密度。

檢測結(jié)果顯示，進(jìn)樣精密度保留時間及峰面積RSD值分別為0.0%及0.1%，設(shè)備重復(fù)性精密度良好。

不同實驗室檢測結(jié)果顯示，保留時間及峰面積RSD分別為0.3%和0.3%，重復(fù)性符合要求，中間精密度良好。

3. 結(jié)論

通過上述試驗結(jié)果表明，在當(dāng)前醋酸阿托西班原料藥UPLC檢測色譜條件下，主成分阿托西班與雜質(zhì)之間的分離度、柱效，系統(tǒng)適用性良好;設(shè)備定量、檢測靈敏度高，設(shè)備準(zhǔn)確度及精密度符合生產(chǎn)需求，可以作為醋酸阿托西班中間過程控制的檢測方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]HPLC法測定醋酸阿托西班有關(guān)物質(zhì)的研究[J]. 姚志勇，支欽，李新宇.? 中國處方藥. 2014（05）