高溫脅迫對馬鈴薯幼苗活性氧代謝及生理特性的影響

楊芳 喬巖 金中輝 李丹 李茜 任藝彬

摘要：高溫是限制馬鈴薯生長和穩(wěn)產(chǎn)的重要環(huán)境脅迫因子，研究高溫脅迫下馬鈴薯活性氧代謝及相關(guān)生理指標變化，對培育耐熱型馬鈴薯品種（系）具有重要意義。以馬鈴薯栽培種費烏瑞它為研究對象，進行高溫脅迫、正常溫度恢復(fù)處理，對O· 及HO活性進行組織化學定位，檢測幼苗抗氧化酶（APX、CAT、POD、SOD）活性、脯氨酸含量和可溶性蛋白含量。結(jié)果表明：高溫脅迫后，馬鈴薯幼苗O·、HO與MDA含量明顯提高，4種抗氧化酶活性均增強，可溶性蛋白含量降低，脯氨酸含量升高。解除高溫脅迫24 h后，O· 及HO含量明顯降低，POD活性降低，可溶性蛋白恢復(fù)正常;抗氧化酶APX、CAT和SOD的活性持續(xù)增強，脯氨酸含量保持較高水平。適度高溫脅迫能提高馬鈴薯費烏瑞它耐熱性的抗氧化機制，APX、CAT、SOD和脯氨酸可作為耐熱性鑒定生理指標，并維持馬鈴薯對高溫脅迫的“脅迫記憶”。

關(guān)鍵詞：馬鈴薯;高溫脅迫;活性氧;抗氧化酶系統(tǒng);滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)

中圖分類號：S532.01 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2022）11-0097-07

收稿日期：2021-11-29

基金項目：國家自然科學基金地區(qū)科學基金（編號：31960441）;甘肅省自然科學基金（編號：18JR3RM236）;隴東學院博士科研啟動基金（編號：XYBY1706）。

作者簡介：楊 芳（1982—），女，甘肅慶城人，碩士，助理研究員，主要從事馬鈴薯抗逆生理、遺傳育種等研究。E-mail：yangfangmail@foxmail.com。

通信作者：喬 巖，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事馬鈴薯抗逆生理、遺傳育種等研究，E-mail：yanqiao@ldxy.edu.cn;楊 芳，碩士，助理研究員，主要從事馬鈴薯抗逆生理、遺傳育種等研究，Email：yangfangmail@foxmail.com。

馬鈴薯（Solanum tuberosum L.）是全世界種植面積和總產(chǎn)量僅次于禾本科作物的第四大糧食作物，為我國糧食安全和脫貧攻堅作出了重大貢獻。馬鈴薯是糧菜兩用型作物，具備產(chǎn)量高、廣適性強、營養(yǎng)均衡和加工特性優(yōu)異等特點，馬鈴薯在解決糧食短缺和營養(yǎng)健康方面發(fā)揮了巨大作用，隨著馬鈴薯主糧化發(fā)展戰(zhàn)略的實施，其播種面積和總產(chǎn)量逐年增長。隨著全球氣候繼續(xù)變暖，直接影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，對糧食安全帶來嚴重挑戰(zhàn)，馬鈴薯適應(yīng)性廣、抗旱、抗寒、耐瘠薄，但不耐高溫。20世紀90年代以來，我國馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)西北地區(qū)氣溫上升速度加快，平均每10年增0.6℃。馬鈴薯是喜涼作物，氣溫增高致使我國北方馬鈴薯營養(yǎng)生長期縮短，生殖生長期延后;夏季氣溫升高致使馬鈴薯莖節(jié)間伸長，葉片變小，影響其光合作用，造成塊莖退化、畸形，生長停滯，這對馬鈴薯的生產(chǎn)安全和產(chǎn)量持續(xù)增長極為不利。在高溫脅迫下，植物會發(fā)生氧化損傷，進而產(chǎn)生多種活性氧分子（reactiveOxygen species，ROS），而ROS修復(fù)機制失活會造成核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子的直接損傷，進而導(dǎo)致亞細胞結(jié)構(gòu)受損。高溫脅迫下ROS分子會誘導(dǎo)植物細胞發(fā)生程序化死亡，然而植物進化出特殊機制以消除ROS毒性，招募超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化物酶（peroxidase，POD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）及抗壞血酸過氧化物酶（ascorbic acid peroxidase，APX），降低膜脂過氧化水平，保護細胞膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，維持ROS自由基穩(wěn)態(tài)，增強農(nóng)作物耐熱性。

植物抗氧化系統(tǒng)能降解細胞內(nèi)活性氧與膜脂過氧化產(chǎn)生的冗余物質(zhì)，在增加植物耐熱性等方面發(fā)揮重要作用。SOD、POD、CAT與APX等抗氧化酶在高溫脅迫植物細胞中發(fā)揮著重要功能。SOD能催化O· 發(fā)生歧化反應(yīng)生成HO和O，防止其對細胞內(nèi)膜系統(tǒng)和亞細胞器的損害，其活性高低能有效反映植物應(yīng)對高溫、干旱和鹽脅迫的能力。POD 和 CAT 能降解植物細胞內(nèi)光呼吸途徑產(chǎn)生的冗余過氧化氫，進而保護生物膜系統(tǒng)。APX是抗壞血酸-谷胱甘肽途徑清除葉綠體多余HO 和O· 的核心酶，APX 蛋白定位于植物細胞質(zhì)體，其抗逆性作用弱于SOD、POD和CAT等抗氧化酶。研究表明，適度高溫脅迫能顯著提高作物的耐熱性，增強作物耐熱性的光合和抗氧化機制，相關(guān)抗氧化酶及基因表達會明顯增強，進而啟動當代脅迫記憶效應(yīng)，以增強植物耐逆性。作物光合作用途徑與其高溫耐受性密切相關(guān)，高溫能加劇光系統(tǒng)Ⅱ（PSⅡ） 損傷速率，在線粒體和葉綠體等細胞器中積累更多ROS，使膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化并損傷DNA，抗氧化系統(tǒng)能增加植物的熱適應(yīng)性。植物對高溫脅迫抗性與ROS穩(wěn)態(tài)調(diào)控機制高度相關(guān)，在細胞水平上，高溫能損壞生物膜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)，造成葉綠體、線粒體、高爾基體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等生物膜系統(tǒng)損傷，進而增加細胞膜透性、減少胞內(nèi)電解質(zhì)并改變細胞膜熱穩(wěn)定性。高溫脅迫會改變植物可溶性蛋白濃度，提高可溶性蛋白合成產(chǎn)率，進而有效保護植物免受逆境傷害;但脅迫加劇會減少可溶性蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)的積累。

高溫脅迫下，植物在生化、細胞、分子及表觀修飾層面上響應(yīng)逆境脅迫，建立非生物脅迫生理響應(yīng)機制。目前，前人研究了部分馬鈴薯種質(zhì)資源在高溫脅迫下生理特性的變化，尚未見馬鈴薯生產(chǎn)主栽品種費烏瑞它（favorite）的耐熱性研究。本研究選擇產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)良的菜用型馬鈴薯品種費烏瑞它幼苗為研究對象，對其進行高溫脅迫處理，測定其活性氧代謝水平、抗氧化酶活性及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的表達水平，分析其在高溫脅迫及解除脅迫恢復(fù)后生理指標的變化，研究該品種耐熱性及熱適應(yīng)性機理，以期為馬鈴薯的耐熱性評價及培育耐高溫的馬鈴薯新品種（系）提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

馬鈴薯栽培種費烏瑞它（favorite）由隴東學院農(nóng)林科技學院提供。

1.2 試驗方法

試驗于2021年3月在甘肅省慶陽市隴東學院進行，試管苗的擴繁采用單莖節(jié)扦插法，培養(yǎng)基為 MS 培養(yǎng)基，光照度約4 000 lx，光—暗周期為16 h—8 h，溫度（25±2）℃進行培養(yǎng)。設(shè)2個處理（高溫脅迫處理、正常溫度恢復(fù)處理），3次重復(fù)，對照（CK）為常溫下普通 MS 培養(yǎng)基生長的組培苗。高溫脅迫處理（HT4）：將25℃生長的試管苗置入 40℃ 處理4 h。正常溫度恢復(fù)處理（RNT24）：將 40℃ 生長的試管苗置入25℃恢復(fù)24 h。取出不同處理的幼苗，放入液氮中速凍后-70℃冰箱保存。

1.3 相關(guān)生理指標的測定

1.3.1 生長指標的檢測 測定試管苗根長、根鮮質(zhì)量、莖鮮質(zhì)量、株高、葉片長度，將根與莖葉從根基部剪開，測量最大根長和株高，測定4株試管苗的根長、株高、葉片長度、根鮮質(zhì)量和莖鮮質(zhì)量，取平均值。

1.3.2 HO₂和O· 的檢測 HO和O· 的組織化學定位參考Kumar等的方法，對馬鈴薯組培苗整株O· 和HO進行NBT和DAB染色。HO含量使用過氧化氫試劑盒（蘇州科銘生物技術(shù)有限公司，HO-1-Y）進行測定，415 nm處測定吸光度。超氧陰離子含量與產(chǎn)生速率使用超氧陰離子測試盒（蘇州科銘生物技術(shù)有限公司，SA-1-G）進行測定，530 nm處測定吸光度。

1.3.3 生理指標測定與數(shù)據(jù)分析 取植物樣品約0.1 g，用2 mL pH 值7.8的 PBS冰浴研磨成勻漿，2 mL PBS清洗研缽轉(zhuǎn)移至預(yù)冷離心管，4℃靜置 5 min，4℃、8 000 r/min 離心15 min，上清液即為粗酶液，用于后續(xù)生理指標的測定。MDA含量測定參照硫代巴比妥酸法（TBA）;APX活性測定參考 Nakano等的方法，290 nm處測定;CAT含量測定參考Durner等的方法;POD含量測定參考劉齊元等的方法;SOD 含量測定參考Dhindsa等的方法;可溶性蛋白含量的測量采用BCA法;脯氨酸含量的測定采用陳巧巧的方法。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均為3次以上重復(fù)的平均值，使用Excel 2019進行數(shù)據(jù)分析和繪圖，使用Duncan's法對數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯試管苗生長指標變化的分析

由圖1可知，對照中馬鈴薯幼苗葉片生長正常，莖稈堅挺，根系具有韌性，不容易斷;當馬鈴薯幼苗經(jīng)過40℃的高溫處理，葉片有明顯的卷曲，莖稈有點萎蔫，根容易發(fā)生斷裂;經(jīng)過40℃高溫處理的馬鈴薯幼苗再經(jīng)過25℃的正常溫度恢復(fù)處理，葉片卷曲皺縮減輕，莖稈萎蔫有所恢復(fù)（圖1）。經(jīng)過高溫脅迫和正常溫度恢復(fù)后馬鈴薯幼苗株高、根長、葉片長度和根鮮質(zhì)量、莖鮮質(zhì)量差異不顯著，變化不大（表1）。

2.2 馬鈴薯試管苗O·及HO的組織化學定位

由圖2可知，高溫脅迫前，費烏瑞它莖和葉片只有少量藍色斑點;高溫脅迫后，費烏瑞它莖和葉片的藍色斑點大量增加，表明產(chǎn)生了大量的O· ;正常溫度恢復(fù)24 h后，費烏瑞它幼苗葉片和莖部位藍色斑點明顯減少，表明O· 明顯減少。高溫脅迫前，費烏瑞它莖和葉片只有較少的紅褐色斑點;高溫脅迫后，費烏瑞它莖和葉片開始產(chǎn)生大量顏色較深的褐色斑點，表明生成大量的HO;正常溫度恢復(fù) 24 h 后，費烏瑞它莖和葉片紅褐色斑點明顯減少，HO明顯減少。

2.3 馬鈴薯幼苗氧化應(yīng)激相關(guān)指標變化分析

由圖3可知，費烏瑞它幼苗對照HO含量為2.43 μmol/g，經(jīng)高溫脅迫后，其HO含量增加到3.01 μmol/g，與對照相比差異達顯著水平（P<0.05）;正常溫度恢復(fù)24 h后，其HO含量降低到2.35 μmol/g，與對照差異不顯著，解除高溫后HO含量恢復(fù)到正常水平。費烏瑞它幼苗對照MDA含量為1.88 nmol/g，經(jīng)高溫脅迫4 h后MDA含量達到15.03 nmol/g，與對照相比差異極顯著（P<0.01）;正常溫度恢復(fù)24 h后，其MDA含量降低到4.75 nmol/g。這表明高溫脅迫使細胞膜產(chǎn)生大量MDA，而解除脅迫后幼苗MDA含量會明顯下降。由圖4可知，費烏瑞它幼苗對照O· 含量為 147.68 nmol/g，經(jīng)高溫脅迫4 h后O· 含量達到最高值，為207.28 nmol/g，與對照相比提高了40.36%，差異極顯著（P<0.01）;與對照相比，高溫脅迫后O· 產(chǎn)生速率差異極顯著（P<0.01），這表明高溫脅迫后馬鈴薯迅速產(chǎn)生大量的O·。

2.4 抗壞血酸過氧化物酶活性變化分析

由圖5可知，費烏瑞它幼苗對照APX活性為146.61 U/mg，經(jīng)高溫脅迫處理4 h后，其幼苗APX活性增加到227.87 U/mg，比對照提高了55.43%，與對照相比差異極顯著（P<0.01）;高溫脅迫后的幼苗經(jīng)24 h的正常溫度恢復(fù)后，APX活性明顯升高，升高到334.25 U/mg，比對照提高了127.99%，比高溫脅迫處理提高了46.68%，差異均達到極顯著水平（P<0.01），這表明脅迫解除后費烏瑞它幼苗APX活性保持較高表達水平。

2.5 抗氧化酶 SOD、CAT、POD活性變化分析

由圖6可知，費烏瑞它幼苗對照的SOD活性為50.57 U/mg，經(jīng)高溫脅迫處理4 h后，其活性提高到95.27 U/mg，比對照提高了88.39%，差異極顯著（P<0.01）;經(jīng)過正常溫度恢復(fù)24 h后，其酶活性持續(xù)升高到100.71 U/mg，比對照提高了99.15%，差異極顯著（P<0.01）;這表明脅迫解除后費烏瑞它幼苗的SOD活性也能持續(xù)增長。

由圖6可知，與對照相比，高溫脅迫處理4 h后費烏瑞它幼苗POD活性升高，為85.34 U/mg，與對照相比提高了139.72%，差異極顯著（P<0.01）;經(jīng)正常溫度恢復(fù)處理24 h后，POD活性降低到 33.23 U/mg，均低于對照與高溫脅迫處理。

由圖6可知，經(jīng)高溫脅迫處理4 h后，CAT活性升高到6.04 U/mg，與對照相比差異極顯著（P<0.01），提高了233.52%。后經(jīng)解除高溫脅迫24 h后，CAT活性持續(xù)提高，為6.81 U/mg，比對照提高了275.74%，差異極顯著（P<0.01）;比高溫脅迫處理提高了12.66%，差異顯著（P<0.05），這表明脅迫解除后費烏瑞它幼苗CAT活性也保持較高表達水平。

2.6 滲透調(diào)節(jié)類物質(zhì)可溶性蛋白、脯氨酸含量變化分析

由圖7可知，經(jīng)過高溫脅迫處理4 h后，費烏瑞它幼苗可溶性蛋白含量從25.39 mg/g降低到 16.83 mg/g，與對照相比差異極顯著（P<0.01），降低了33.71%;經(jīng)過正常溫度恢復(fù)處理24 h后，其含量增加到26.22 mg/g，與對照基本相同，比高溫脅迫處理提高了55.79%，差異極顯著（P<0.01）。經(jīng)高溫脅迫處理4 h后，費烏瑞它幼苗產(chǎn)生0.428 μg/g脯氨酸，與對照相比差異極顯著（P<0.01），提高了84.51%;經(jīng)過正常溫度恢復(fù)處理24 h后，其含量降低到0.304 μg/g，但仍高于對照，達到差異極顯著水平（P<0.01），表明脯氨酸可能參與高溫“脅迫記憶”過程。

3 討論與結(jié)論

在高溫、干旱等環(huán)境脅迫下，植物細胞能合成冗余活性氧，通過多重機制清除有害ROS分子;此外可溶性蛋白和脯氨酸積累是逆境脅迫下的一種重要代謝適應(yīng)機制，與作物耐熱性強弱相關(guān)。本研究主要探討了馬鈴薯栽培種費烏瑞它在高溫脅迫及脅迫后正常條件恢復(fù)后的活性氧代謝水平、抗氧化酶活力及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的變化與差異。

馬鈴薯生長過程中，高溫氣候會阻礙其形態(tài)建成，極端條件下致使馬鈴薯整株死亡。本研究中將馬鈴薯置于高溫脅迫一段時間后，植株葉片會明顯卷曲，莖稈萎蔫，根容易發(fā)生斷裂;經(jīng)過40℃高溫處理的馬鈴薯幼苗再經(jīng)過25℃的正常溫度恢復(fù)處理后，葉片卷曲恢復(fù)，莖稈萎蔫減輕，這與陳巧巧等的研究結(jié)果一致，高溫脅迫下會導(dǎo)致馬鈴薯幼苗表型變化，延緩植株生長，但如果高溫脅迫時間較短，馬鈴薯幼苗能夠重新恢復(fù)其正常表型。

正常環(huán)境下植物能維持細胞內(nèi)活性氧的穩(wěn)態(tài)，但高溫脅迫會打破細胞穩(wěn)態(tài)，產(chǎn)生過量活性氧分子，植物細胞內(nèi)積累O·、·OH、HO、MDA，從而造成質(zhì)膜過氧化。植物主要依賴于抗氧化酶系統(tǒng)維持細胞內(nèi)的活性氧動態(tài)平衡。本研究發(fā)現(xiàn)，在高溫脅迫初期，O· 和HO的含量明顯增多，但高溫脅迫恢復(fù)后，O· 和HO的含量則又降低。經(jīng)高溫脅迫正常溫度恢復(fù)24 h后APX、CAT、SOD活性明顯增加，POD活性下降;短期高溫脅迫4 h后，費烏瑞它植株中抗氧化酶SOD、POD、CAT、APX活性顯著增高，這與任彩虹等的研究結(jié)果類似。推測在高溫脅迫下，費烏瑞它幼苗通過基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)產(chǎn)生過量超氧自由基，從而引發(fā)相關(guān)抗氧化酶的大量合成，以清除細胞內(nèi)HO、O· 等活性氧分子，消除亞細胞區(qū)室的活性氧傷害，維持細胞穩(wěn)態(tài)，激發(fā)其保護性應(yīng)激反應(yīng)機制。此外，本研究發(fā)現(xiàn)POD活性在解除脅迫正常溫度恢復(fù)后反而降低，這與李英麗等的研究結(jié)果一致，熱激初期O· 迅速產(chǎn)生，使POD活性增高，隨后下降;這可能是費烏瑞它幼苗對高溫脅迫比較敏感，高溫脅迫強度過高，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成受阻，酶失活加劇。

高溫環(huán)境會影響脯氨酸和可溶性蛋白在植物亞細胞中的代謝和分布。本研究發(fā)現(xiàn)，高溫脅迫后費烏瑞它植株可溶性蛋白含量明顯降低，脯氨酸含量明顯增高;這與前人研究結(jié)果一致，高溫脅迫后可溶性蛋白含量明顯下降，C植物核酮糖二磷酸羧化酶（RuBisCo）占植物可溶性蛋白質(zhì)的60%以上，在植物衰老進程中RuBisCo含量可達可溶性蛋白質(zhì)總量的90%。馬鈴薯屬于C植物，高溫脅迫導(dǎo)致費烏瑞它RuBisCo蛋白大量降解，從而導(dǎo)致高溫脅迫初期可溶性蛋白含量降低。高溫脅迫后，馬鈴薯脯氨酸含量明顯升高，脅迫解除后，脯氨酸含量仍保持較高水平，表明脯氨酸積累與熱應(yīng)激記憶相關(guān);Feng等發(fā)現(xiàn)，脯氨酸合成代謝基因P5CS1（1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因，1-pyrroline-5-carboxylate synthetase）“轉(zhuǎn)錄記憶”導(dǎo)致脅迫標記物脯氨酸積累，使擬南芥產(chǎn)生鹽脅迫記憶;干旱等非生物脅迫能誘導(dǎo)小麥、水稻中脯氨酸合成基因P5CS與-OAT（鳥氨酸——氨基轉(zhuǎn)移酶基因，ornithine δ-aminotransferase）等基因的啟動子去甲基化，進而積累脯氨酸，通過記憶效應(yīng)增加作物耐逆性。

綜上所述，馬鈴薯栽培種費烏瑞它對高溫脅迫具有適度耐受性，其APX、SOD、CAT和脯氨酸與耐熱性相關(guān)性較好，可作為該品種耐熱性鑒定的生理指標。而短期高溫處理可誘導(dǎo)馬鈴薯發(fā)生脅迫反應(yīng)，高溫解除后，APX、SOD與CAT活性保持增長，脯氨酸積累保持較高水平，進而維持馬鈴薯對高溫脅迫的記憶，而這些物質(zhì)參與“脅迫記憶”的分子調(diào)控機制仍需進行深入研究。

參考文獻：

[1]李文娟，秦軍紅，谷建苗，等. 從世界馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展談中國馬鈴薯的主糧化[J]. 中國食物與營養(yǎng)，2015，21（7）：5-9.

[2]岳曉甜. 馬鈴薯主糧化視角下農(nóng)戶種植意愿影響因素實證研究[D]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學院，2018：11-13.

[3]劉維成，張 強，傅 朝. 近55年來中國西北地區(qū)降水變化特征及影響因素分析[J]. 高原氣象，2017，36（6）：1533-1545.

[4]姚玉璧，楊金虎，肖國舉，等. 氣候變暖對馬鈴薯生長發(fā)育及產(chǎn)量影響研究進展與展望[J]. 生態(tài)環(huán)境學報，2017，26（3）：538-546.

[5]Fahad S，Bajwa A A，Nazir U，et al. Crop production under drought and heat stress：plant responses and managementOptions[J]. Frontiers in Plant Science，2017，8：1147.

[6]Zhao J G，Lu Z G，Wang L，et al. Plant responses to heat stress：physiology，transcription，noncoding RNAs，and epigenetics[J]. International JournalOf Molecular Sciences，2021，22（1）：117.

[7]Arnao M B，Hernández-Ruiz J.Melatonin：a new plant hormone and/or a plant master regulator？[J]. Trends in Plant Science，2019，24（1）：38-48.

[8]任彩虹，張麗萍，閆桂琴，等. 高溫脅迫對馬鈴薯幼苗抗氧化酶系統(tǒng)和葉綠素含量的影響[J]. 科技情報開發(fā)與經(jīng)濟，2007，17（14）：181-183.

[9]吳 昊，李燕敏，謝傳曉. 作物耐熱生理基礎(chǔ)與基因發(fā)掘研究進展[J]. 作物雜志，2018（5）：1-9.

[10]王 笑，蔡 劍，周 琴，等. 非生物逆境鍛煉提高作物耐逆性的生理機制研究進展[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學，2021，54（11）：2287-2301.

[11]戴鳴凱，張志忠，劉 爽，等. 高溫脅迫對馬鈴薯幼苗生長和部分生理指標的影響 [J]. 農(nóng)學學報，2018，8（9）：9-14.

[12]劉長遠，李光達，萬麗嬙，等. 高溫脅迫對不同熟期馬鈴薯品種幼苗部分生理指標的影響[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學），2020，35（4）：596-600.

[13]Sattar A，Sher A，Ijaz M，et al. Terminal drought and heat stress alter physiological and biochemical attributes in flag leafOf bread wheat[J]. PLoSOne，2020，15（5）：e0232974.

[14]張景云，趙曉東，萬新建，等. 小白菜耐熱性鑒定及其耐熱性分析[J]. 核農(nóng)學報，2014，28（1）：146-153.

[15]Kumar D，Yusuf M A，Singh P，et al. Histochemical detectionOf superoxide and HO accumulation in Brassica juncea seedlings[J]. Bio-protocol，2014，4（8）：e1108.

[16]Nakano Y，Asada K. Hydrogen peroxide is scavenged by ascorbate-specific peroxidase in spinach chloroplasts[J]. Plant and Cell Physiology，1981，22（5）：867-880.

[17]Durner J，Klessig D F. Salicylic acid is a modulatorOf tobacco and mammalian catalases[J]. JournalOf Biological Chemistry，1996，271（45）：28492-28501.

[18]劉齊元，程元強，朱肖文，等. 雄性不育煙草花蕾中SOD、POD和CAT活性研究[J]. 中國煙草學報，2011，17（5）：34-39.

[19]Dhindsa R S，Plumb-Dhindsa P，Thorpe T A.Leaf senescence：correlated with increased levelsOf membrane permeability and lipid peroxidation，and decreased levelsOf superoxide dismutase and catalase[J]. JournalOf Experimental Botany，1981，32（1）：93-101.

[20]He F L. BCA（bicinchoninic acid） protein assay[J]. Bio-protocol，2011，1（5）：e44.

[21]陳巧巧. 外源蔗糖對馬鈴薯高溫與低溫脅迫耐受性的影響[D]. 蘭州：蘭州理工大學，2017：1-16.

[22]張宗申，利容千，王建波. 外源Ca預(yù)處理對高溫脅迫下辣椒葉片細胞膜透性和GSH、AsA含量及Ca分布的影響[J]. 植物生態(tài)學報，2001，25（2）：230-234，262.

[23]王 濤，黃語燕，陳永快，等. 高溫脅迫下外源殼聚糖對黃瓜幼苗生長的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2019，47（23）：142-146.

[24]李英麗，果秀敏，張建光，等. 高溫脅迫對蘋果果皮組織抗氧化特性的影響[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學學報，2005，28（1）：18-20.

[25]Hussain H A，Men S N，Hussain S，et al. Interactive effectsOf drought and heat stressesOn morpho-physiological attributes，yield，nutrient uptake andOxidative status in maize hybrids[J]. Scientific Reports，2019，9（1）：3890.

[26]Ergo V V，Lascano R，Vega C R C，et al. Heat and water stressed field-grown soybean：a multivariate studyOn the relationship between physiological-biochemical traits and yield[J]. Environmental and Experimental Botany，2018，148：1-11.

[27]Friedrich J W，Huffaker R C.Photosynthesis，leaf resistances，and ribulose-1，5-bisphosphate carboxylase degradation in senescing barley leaves[J]. Plant Physiology，1980，65（6）：1103-1107.

[28]Feng X J，Li J R，Qi S L，et al. Light affects salt stress-induced transcriptional memoryOf P5CS1 in Arabidopsis[J]. ProceedingsOf the National AcademyOf SciencesOf the United StatesOf America，2016，113（51）：E8335-E8343.