不同血清乙肝病毒DNA水平對乙肝患者 肝功能指標(biāo)及乙肝標(biāo)志物的影響

王飛馬

作者單位：511500 廣東清遠(yuǎn)，清遠(yuǎn)市中醫(yī)院檢驗科

乙型病毒性肝炎（乙肝）是一種在全球范圍內(nèi)廣泛流行的傳染性疾病，主要由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染所致。據(jù)統(tǒng)計，在目前乙肝疫苗和各種抗病毒藥物廣泛應(yīng)用的背景下，HBV慢性感染者在全球范圍內(nèi)仍高達3.5億，而我國更是慢性乙肝的高發(fā)地區(qū)［1］。此外，隨著病情加重，慢性乙肝會逐漸演變?yōu)楦斡不⒏伟┑燃膊?，?yán)重威脅患者的生命安全，因此，加強慢性乙肝的防治已刻不容緩［2］。目前，臨床普遍采用乙肝病毒e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）監(jiān)測乙肝患者的抗病毒治療效果。然而臨床實踐證實，單純通過監(jiān)測HBeAg不足以真實反映乙肝患者體內(nèi)病毒的復(fù)制情況，因此無法準(zhǔn)確掌握患者的真實病情，繼而影響其預(yù)后［3］。此外，鑒于臨床尚未完全揭示乙肝發(fā)病的生理和病理機制，加之患者臨床癥狀的復(fù)雜性，諸多肝功能指標(biāo)和乙肝標(biāo)志物雖可以反映患者的大致病情嚴(yán)重程度，但在疾病確診方面仍存在較高的漏診率和誤診率［4］。隨著生物監(jiān)測技術(shù)的不斷發(fā)展和水平的不斷提升，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）可以快速、準(zhǔn)確地反映乙肝患者體內(nèi)病毒的復(fù)制水平，進而為臨床診斷提供更加可靠的依據(jù)［5-6］。本研究選擇2018年 10月—2021年5月清遠(yuǎn)市中醫(yī)院收治的60例乙肝患者和同期60名健康體檢者為研究對象，旨在探討不同HBV-DNA水平對肝功能指標(biāo)及乙肝標(biāo)志物的影響，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2018年10月—2021年5月本院收治的60例慢性乙肝患者作為觀察組，另外選擇同期在本院進行健康體檢的60名健康體檢者作為對照組。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 觀察組：① 患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；② 經(jīng)相關(guān)實驗室檢查確診為乙肝；③ 精神狀況正常，意識清楚；④ 臨床資料完整。對照組：① 經(jīng)血常規(guī)檢測肝功能指標(biāo)正常；② 未感染肝炎病毒；③ 近6個月內(nèi)未服用影響肝功能的藥物。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ① 因其他因素導(dǎo)致的肝功能損傷患者；② 合并其他類型病毒感染者；③ 酒精性肝炎和脂肪肝患者；④ 妊娠期和哺乳期女性。

1.1.3 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)本院倫理批準(zhǔn)（審批號：20211210），對受檢者進行的檢測均已獲得知情同意。

1.2 檢測方法 所有受檢者均于空腹?fàn)顟B(tài)下采集 5 mL靜脈血，以3500 r/min（離心半徑10 cm）離心 10 min，分離血清后置于2～8 ℃環(huán)境中保存待檢。于標(biāo)本采集后28 h內(nèi)，采用日立7600全自動生化分析儀檢測血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)，包括天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、α-L-巖藻糖苷酶（α-Lfucosidase，AFU）。采用德國STAGO R MAX全自動血凝分析儀檢測受檢者凝血酶原時間（prothrombin time，PT），所有檢測試劑均由德國STAGO公司提供。采用羅氏Cobas E601電化學(xué)發(fā)光儀檢測患者乙肝標(biāo)志物水平，包括乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙肝e抗體（hepatitis B e antibody，HBeAb）、HBeAg、乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）。采用宏石SLAN-96P擴增儀檢測觀察組患者的血清HBV-DNA水平，檢測時設(shè)置5種標(biāo)準(zhǔn)品，濃度依次為3.0×107kU/L、3.0× 106kU/L、3.0×105kU/L、3.0×104kU/L、3.0×103kU/L， 同時設(shè)置陰性對照和陽性對照，最低定量為1.0× 102kU/L，陽性標(biāo)準(zhǔn)為5.0×102kU/L。

1.3 觀察指標(biāo) ① 根據(jù)乙肝標(biāo)志物檢測結(jié)果，比較不同血清學(xué)模式乙肝患者HBV-DNA的陽性檢出率和平均DNA含量。② 比較觀察組HBV-DNA和HBeAg 的陽性檢出率。③ 根據(jù)血清HBV-DNA水平，將觀察組患者分為觀察1組（38例，＜5.0×102kU/L）、觀察2組（11例，5.0×102～＜1.0×104kU/L）、觀察3組 （7例，1.0×104～＜1.0×106kU/L）和觀察4組（4例， 1.0×106～1.0×108kU/L），比較各組ALT、AST、AFU、PT水平的差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗，多組間比較行方差分析；計數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 觀察組與對照組受檢者性別、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），有可比性。見表1。

表1 觀察組和對照組的一般資料比較

2.2 觀察組不同血清學(xué)模式乙肝患者HBV-DNA陽性檢出率和平均DNA含量比較 不同血清學(xué)模式乙肝患者HBV-DNA陽性檢出率和平均DNA含量比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 觀察組不同血清學(xué)模式乙肝患者HBV-DNA陽性檢出率和平均DNA含量比較

2.3 觀察組HBV-DNA與HBeAg陽性檢出率比較

觀察組中HBV-DNA的陽性檢出率明顯高于HBeAg（P＜0.05）。見表3。

表3 觀察組HBV-DNA與HBeAg陽性檢出率比較

2.4 觀察組與對照組肝功能指標(biāo)比較 觀察組AST、ALT、AFU和PT水平均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表4。

表4 觀察組和對照組肝功能指標(biāo)比較（±s）

表4 觀察組和對照組肝功能指標(biāo)比較（±s）

注：AST為天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALT為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，AFU為α-L-巖 藻糖苷酶，PT為凝血酶原時間

PT（s）觀察組 60 61.39±4.7345.48±5.0435.95±3.9915.62±2.54對照組 60 19.05±3.6821.19±4.6919.46±4.3011.56±0.92 t值 54.725 27.329 21.775 11.641 P值 0.001 0.001 0.001 0.001組別 例數(shù)（例）AST（U/L）ALT（U/L）AFU（U/L）

2.5 不同HBV-DNA水平各組乙肝患者的肝功能指標(biāo)比較 隨著HBV-DNA水平升高，乙肝患者的AST、ALT、AFU、PT水平也逐漸升高，組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表5。

表5 不同HBV-DNA濃度各組乙肝患者的 肝功能指標(biāo)比較（±s）

表5 不同HBV-DNA濃度各組乙肝患者的 肝功能指標(biāo)比較（±s）

注：HBV-DNA為乙肝病毒DNA，AST為天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ALT為 丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，AFU為α-L-巖藻糖苷酶，PT為凝血酶原時間

PT（s）觀察1組 38 35.45±4.82 34.61±5.1527.96±3.8512.67±1.25觀察2組 11 50.48±5.57 42.58±5.2035.64±4.2813.48±1.21觀察3組 7 74.63±5.93 65.89±4.7736.52±4.2516.66±2.03觀察4組 4 90.36±4.46 92.63±3.7936.99±3.8921.05±2.41 F值 520.558 328.963 71.548 82.710 P值 0.001 0.001 0.001 0.001組別 例數(shù)（例）AST（U/L）ALT（U/L）AFU（U/L）

3 討論

有研究表明，采用實時熒光PCR測定乙肝患者血清HBV-DNA含量較傳統(tǒng)的檢測方式能更直接地反映出患者體內(nèi)的病毒水平［8］。而本研究中60例乙肝患者測定乙肝標(biāo)志物結(jié)果顯示，大三陽患者血清中HBV-DNA的陽性率和平均病毒DNA含量均明顯高于小三陽患者和HBsAg、HBcAb均為陽性的患者。表明大三陽患者體內(nèi)HBV能夠快速復(fù)制且具有較強的傳染性。此外，小三陽患者HBV-DNA的陽性率和平均病毒DNA含量雖低于大三陽患者，但其體內(nèi)仍存在HBeAb，足以證明HBV的復(fù)制并未完全停止，可能出現(xiàn)緩解或發(fā)生基因變異，但該類型患者仍有較強的傳染性［9］。

此外，本研究結(jié)果顯示，觀察組HBV-DNA的陽性檢出率為48.33%，明顯高于HBeAg陽性檢出率（30.00%），該研究結(jié)果與張雪丹和翁躍頌［10］的研究結(jié)果一致，由此表明，檢測HBV-DNA水平對判斷乙肝患者病毒復(fù)制情況具有較高的應(yīng)用價值。分析原因可能為乙肝患者機體內(nèi)HBeAg水平的高低與病毒的復(fù)制程度有密切關(guān)系，且HBeAg為陰性而HBV-DNA為陽性的患者發(fā)展為肝硬化的風(fēng)險更高，因此將HBV-DNA作為判斷乙肝患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況的指標(biāo)也具有更高的敏感度，而在此基礎(chǔ)上結(jié)合乙肝標(biāo)志物檢測可以更好地反映患者體內(nèi)的HBV復(fù)制情況［11］。另外本研究還表明，隨著病毒DNA含量的增加，乙肝患者的肝功能指標(biāo)（AST、ALT、AFU和PT）水平也會隨之上升；而王斌和黃漢菊［12］研究結(jié)果顯示，HBV-DNA載量的對數(shù)值與ALT和AST呈正相關(guān)，分析原因可能是AST和ALT均可用于反映乙肝患者肝臟內(nèi)炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度，是臨床用于判斷肝細(xì)胞損傷情況的重要指標(biāo)。二者與HBV-DNA載量之間的關(guān)系主要有以下幾個觀點：① 當(dāng)肝細(xì)胞表面HBV抗原載量增加時，會引起人體的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)，而這兩項機制是造成肝細(xì)胞損傷的主要原因；② 大量病毒復(fù)制使中間產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)累積，進而引發(fā)肝細(xì)胞損傷；③ 部分乙肝患者在服藥治療期間，受藥物影響導(dǎo)致HBV的復(fù)制活性降低，但鑒于患者病情和個體差異的影響，可能引發(fā)藥物性肝損傷。

AFU是一種催化含巖藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子水解酶的溶酶體酸性水解酶，被臨床視為一種新的原發(fā)性肝癌腫瘤標(biāo)志物，其水平高低與HBV感染有密切關(guān)系［13］。有研究表明，HBV在復(fù)制活躍的情況下會激發(fā)肝臟組織發(fā)生炎癥反應(yīng)，從而引發(fā)肝細(xì)胞變性、炎癥細(xì)胞浸潤，促使肝臟纖維組織增生，最終增加乙肝患者各項肝細(xì)胞和乙肝標(biāo)志物的活性［14-15］。PT屬于外源性凝血系統(tǒng)功能反應(yīng)因子，PT的延長與纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)ib）缺失、獲得性凝血因子缺乏有密切關(guān)系，推測其原因可能與肝臟功能損傷嚴(yán)重，從而導(dǎo)致由肝臟合成的各種凝血因子不足有關(guān)。因此對乙肝患者肝功能指標(biāo)和相關(guān)血清標(biāo)志物的檢測，能夠為判斷患者的病情嚴(yán)重程度提供可靠的依據(jù)。

綜上所述，隨著HBV復(fù)制量的增加，患者各項肝功能指標(biāo)水平也在不斷升高，通過對HBV-DNA的定量檢測可以及時有效地評估患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況，同時聯(lián)合各項肝功能指標(biāo)的檢測，能及早發(fā)現(xiàn)患者肝功能損傷情況，從而為疾病治療方案的確定提供可靠的依據(jù)。

利益沖突作者聲明不存在利益沖突