芍藥苷調(diào)控環(huán)磷酸腺苷/蛋白激酶A/環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白通路對(duì)腦卒中大鼠的影響

陳敬君，馬賢聰，楊泉，趙雯，王日升

腦卒中是一種急性腦血管疾病，病死率和致殘率較高，是由于血流不能流入大腦而引起的腦組織受損的一種疾病，常與腦部血管阻塞有關(guān)，腦部缺血后，腦組織中腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細(xì)胞介素（IL）-6等炎性因子大量釋放，引起神經(jīng)突起的縮短、損傷甚至斷裂，導(dǎo)致突觸聯(lián)系及神經(jīng)聯(lián)系減少，最終引發(fā)神經(jīng)功能損傷，因此病人常有口眼歪斜、半身不遂、神志迷茫等不良表現(xiàn)，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量及生命安全［1-2］。芍藥苷是提取于芍藥科植物芍藥干燥根中的活性成分，為單萜糖苷類(lèi)中藥單體，具有抗炎、神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能，Zhang等［3］研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷可改善血管性癡呆大鼠的局部腦血流量并抑制腦組織中TNFα、IL-6等炎性因子的釋放，Zhang等［4］研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷可顯著降低腦缺血大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，對(duì)大鼠神經(jīng)細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用，并認(rèn)為其可能是通過(guò)上調(diào)磷酸化環(huán)磷酸腺苷（cAMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（p-CREB）等蛋白發(fā)揮作用。cAMP是cAMP/蛋白激酶A（PKA）/CREB通路的重要組成部分，近年來(lái)的研究表明該通路與缺血性腦損傷聯(lián)系密切，激活該通路對(duì)于腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用［5-6］，因此，本研究自2019年12月至2020年12月，在前人研究的基礎(chǔ)上探究芍藥苷調(diào)控cAMP/PKA/CREB通路對(duì)腦卒中大鼠的影響，為臨床治療腦卒中提供新思路。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，平均體質(zhì)量約225 g，6～8周齡，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（粵）2018-0002。動(dòng)物房溫度25℃左右，相對(duì)濕度50%左右，實(shí)驗(yàn)期間自由進(jìn)食、飲水，保持動(dòng)物房環(huán)境及鼠籠清潔、透氣。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中按照動(dòng)物使用的“3R”原則給予人道主義關(guān)懷。本研究符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

1.2主要試劑及儀器芍藥苷、H89（PKA抑制劑）（編號(hào)T2230、T11524）購(gòu)于陶素生化；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒、高效RIPA組織裂解液、BCA蛋白測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：G1120、SEKR-0009、SEKR-0005、SEKR-0003、SEKR-0002、R0010、PC0020）購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司；兔源cAMP、PKA、CREB、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）一抗、羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（貨號(hào)ab76238、ab32390、ab32515、ab8245、ab6721）購(gòu) 于Abcam。酶標(biāo)儀（型號(hào)AMR-100）購(gòu)于杭州奧盛儀器有限公司；組織切片機(jī)（型號(hào)MA752）購(gòu)于英國(guó)Campden公司；自動(dòng)組織脫水機(jī)（型號(hào)HY-1050）購(gòu)于浙江金華惠友儀器；凝膠成像儀（型號(hào)SmartGel 6000）購(gòu)于北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司；光學(xué)顯微鏡（型號(hào)DMD108）購(gòu)于德國(guó)徠卡。

1.3方法

1.3.1動(dòng)物模型制備及分組給藥 腦卒中大鼠模型的制備參考文獻(xiàn)［7］并稍作改動(dòng)，40只SD大鼠，分為假手術(shù)組（8只）和造模組（32只），將大鼠麻醉后持仰臥位固定，頸部備皮并做常規(guī)消毒，于頸部正中行切口，鈍性分離大鼠頸部肌肉，暴露左側(cè)頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈主干及分支，結(jié)扎頸外動(dòng)脈及近心端頸總動(dòng)脈，將頸總動(dòng)脈結(jié)扎處遠(yuǎn)端3 mm處剪開(kāi)并插入直徑為0.28 mm的線(xiàn)栓，由頸內(nèi)動(dòng)脈插入約20mm，到達(dá)左側(cè)大腦中動(dòng)脈分支處，造成局灶性腦缺血后結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈，隨后逐層縫合切口，假手術(shù)組大鼠僅分離動(dòng)脈，不做結(jié)扎處理。待大鼠蘇醒后進(jìn)行Zea Longa神經(jīng)功能缺損評(píng)分［8］，無(wú)神經(jīng)功能損傷癥狀記為0分，對(duì)側(cè)前爪無(wú)法充分伸展記為1分，行走時(shí)向兩側(cè)旋轉(zhuǎn)記為2分，行走時(shí)向兩側(cè)傾倒記為3分，意識(shí)喪失、無(wú)法行走記為4分；0分認(rèn)為動(dòng)脈未阻塞，4分認(rèn)為模型構(gòu)建失敗，1～3分認(rèn)為腦卒中模型構(gòu)建成功。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若出現(xiàn)不符合標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象，及時(shí)選取備用大鼠進(jìn)行造模。

將模型構(gòu)建成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、芍藥苷組、H89組（PKA抑制劑）、芍藥苷+H89組，每組8只。芍藥苷組灌胃30 mg/kg芍藥苷［9］，H89組腹腔注射1 mg/kg H89［10］，芍藥苷+H89組灌胃芍藥苷后腹腔注射H89，持續(xù)給藥2周，模型組、假手術(shù)組以生理鹽水代替。

1.3.2大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分及記憶行為學(xué)評(píng)估分別在給藥第1、7、14天根據(jù)Zea Longa評(píng)分法對(duì)各組大鼠進(jìn)行［8］神經(jīng)功能缺損評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同“1.3.1”。

大鼠記憶行為學(xué)評(píng)估采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)定，將水池分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限，將直徑為6 cm的圓形平臺(tái)置于第Ⅰ象限中央（低于水面2 cm），前4天進(jìn)行定向巡航實(shí)驗(yàn)：將大鼠從第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限區(qū)域投入水中，記錄其爬上平臺(tái)所需要的時(shí)間，記為潛伏期，潛伏期越小表明大鼠學(xué)習(xí)能力越好，若120 s內(nèi)大鼠仍未找到平臺(tái)，指引其爬上平臺(tái)并停留20 s，此時(shí)潛伏期記為120 s。第5天進(jìn)行空間探索試驗(yàn)：將平臺(tái)撤去，記錄大鼠在120 s內(nèi)穿越平臺(tái)位置的次數(shù)，次數(shù)越多表明大鼠記憶能力越強(qiáng)。

1.3.3大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平檢測(cè) 將大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈取血，室溫靜置20 min后，4℃、1 000g離心10 min，分離血清，采用TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1βELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定，具體步驟參考相關(guān)試劑盒要求。

1.3.4大鼠腦組織獲取及HE染色 將大鼠麻醉后處死，剪開(kāi)大鼠頭部皮膚，切開(kāi)肌肉、骨膜后鈍性分離顱骨，取大鼠腦組織，一部分用于HE染色觀察，一部分用于測(cè)定cAMP/PKA/CREB通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。

取適量大鼠腦組織，在4%的多聚甲醛中固定48 h，將固定好的大鼠腦組織用生物組織脫水機(jī)進(jìn)行脫水及透明處理，將腦組織浸入石蠟中制成包埋有腦組織的蠟塊，冷卻凝固后將其切成約4μm厚的切片，將切片貼附在載玻片上，用二甲苯溶液脫蠟、梯度乙醇水化、蒸餾水洗、蘇木素染色、分化液分化、返藍(lán)液返藍(lán)、二甲苯透明、中型樹(shù)膠封片，在顯微鏡下觀察并分析。具體操作方法參考HE染色試劑盒的要求。

1.3.5大鼠腦組織cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)檢測(cè) 取大鼠腦組織適量，用眼科剪剪碎，加入高效RIPA組織裂解液（1 mg∶10μL），用組織勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿處理，將勻漿后的樣品離心取上清液，根據(jù)BCA蛋白測(cè)定試劑盒的要求測(cè)定其中蛋白含量，將各組蛋白濃度調(diào)至相同并加熱變性，冷卻后取20μL進(jìn)行電泳分離蛋白，用濕轉(zhuǎn)法將所有蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，將纖維膜用5%的脫脂奶粉溶液進(jìn)行封閉約2 h，根據(jù)分子量將目的蛋白截取下來(lái)置于孵育盒中，加入cAMP、PKA、CREB、p-CREB、GAP‐DH一抗（1∶1 000），4℃冰箱中孵育過(guò)夜后用洗膜緩沖液漂洗3次，加入辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗，室溫孵育1 h后用洗膜緩沖液漂洗3次，經(jīng)過(guò)顯色、定影后于凝膠成像儀中觀察并分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS22.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析。定量數(shù)據(jù)采用±s的方式進(jìn)行描述，采用單因素方差分析對(duì)多組間進(jìn)行比較，采用重復(fù)測(cè)量方差分析進(jìn)行多時(shí)間點(diǎn)觀測(cè)資料的比較，采用LSD法進(jìn)一步進(jìn)行多組間的兩兩比較。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分與假手術(shù)組相比，模型組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分顯著升高（給藥第1天、第7天、第14天）（P<0.05）；與模型組相比，芍藥苷組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分顯著降低（給藥第7天、第14天）（P<0.05）；與芍藥苷組相比，芍藥苷+H89組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分顯著升高（給藥第7天、第14天）（P<0.05）；與H89組相比，芍藥苷+H89組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分顯著降低（給藥第7天、第14天）（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較/（分，±s）

表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較/（分，±s）

注：①與同時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組比較，P<0.05。②與同時(shí)間點(diǎn)模型組比較，P<0.05。③與同時(shí)間點(diǎn)芍藥苷組比較，P<0.05。④與同時(shí)間點(diǎn)H89組比較，P<0.05。⑤與同組給藥第1天比較，P<0.05。⑥與同組給藥第7天比較，P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組芍藥苷組H89組芍藥苷+H89組組間F，P值時(shí)間F，P值交互F，P值鼠數(shù)8 8 8 8 8給藥第1天0.05±0.01 2.69±0.56①2.58±0.53①2.65±0.62①2.60±0.52①27.56，<0.001 141.74，<0.001 10.02，<0.001給藥第7天0.10±0.02 2.26±0.43①1.24±0.25①②⑤2.90±0.58①②③1.86±0.43①②③④⑤給藥第14天0.03±0.01 2.25±0.46①0.72±0.14①②⑤⑥2.93±0.68①②③1.05±0.38①②③④⑤⑥

2.2各組大鼠記憶行為學(xué)評(píng)估與假手術(shù)組相比，模型組大鼠潛伏期顯著升高（P<0.05），穿臺(tái)次數(shù)［（15.20±2.08）次比（8.70±1.79）次］顯著減少（P<0.05）；與模型組相比，芍藥苷組大鼠潛伏期顯著降低（P<0.05），穿臺(tái)次數(shù)［（8.70±1.79）次比（13.06±1.86）次］顯著升高（P<0.05）；與芍藥苷組相比，芍藥苷+H89組大鼠潛伏期顯著升高（P<0.05），穿臺(tái)次數(shù)［（13.06±1.86）次比（11.08±1.64）次］顯著減少（P<0.05）；與H89組相比，芍藥苷+H89組大鼠潛伏期顯著 降 低（P<0.05），穿 臺(tái) 次 數(shù)［（6.30±1.33）次 比（11.08±1.64）次］顯著升高（P<0.05）。其中潛伏期數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠記憶行為學(xué)評(píng)估中的潛伏期比較/（s，±s）

表2 各組大鼠記憶行為學(xué)評(píng)估中的潛伏期比較/（s，±s）

注：①與假手術(shù)組比較，P<0.05。②與模型組比較，P<0.05。③與芍藥苷組比較，P<0.05。④與H89組比較，P<0.05。⑤與第1天相比，P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組芍藥苷組H89組芍藥苷+H89組組間F，P值時(shí)間F，P值交互F，P值鼠數(shù)8 8 8 8 8第1天35.28±5.35 81.73±11.09①48.61±6.66①②96.53±15.25①②③66.08±9.65①②③④180.73，<0.001 2.77，0.044 0.08，1.000第2天36.71±6.73 80.26±11.75①45.22±6.36①②94.72±14.25①②③64.30±9.35①②③④第3天34.50±6.33 77.59±10.78①44.30±6.20①②92.01±15.07①②③62.18±9.12①②③④第4天32.54±6.07 74.44±11.06①40.16±6.13①②⑤90.06±14.71①②③60.60±8.94①②③④

2.3各組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平比較與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平顯著升高（P<0.05）；與模型組相比，芍藥苷組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平顯著降低（P<0.05）；與芍藥苷組相比，芍藥苷+H89組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平顯著升高（P<0.05）；與H89組相比，芍藥苷+H89組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平顯著降低（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平比較/（ng/L，±s）

表3 各組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β水平比較/（ng/L，±s）

注：TNF-α為腫瘤壞死因子-α，IL-6為白細(xì)胞介素-6，IL-2為白細(xì)胞介素-2，IL-1β為白細(xì)胞介素-1β。①與假手術(shù)組比較，P<0.05。②與模型組比較，P<0.05。③與芍藥苷組比較，P<0.05。④與H89組比較，P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組芍藥苷組H89組芍藥苷+H89組F值P值鼠數(shù)8 8 8 8 8 TNF-α 75.32±5.69 120.13±10.07①86.25±7.85①②132.68±11.14①②③106.19±9.45①②③④54.43<0.001 IL-6 40.41±5.41 64.86±9.56①47.12±6.75①②77.33±13.22①②③55.13±8.07①②③④20.96<0.001 IL-2 33.13±5.90 58.86±10.12①40.20±7.11①②71.66±12.58①②③48.68±8.12①②③④22.54<0.001 IL-1β 5.01±1.04 12.19±1.54①6.46±1.44①②15.28±2.58①②③8.12±1.24①②③④52.41<0.001

2.4各組大鼠腦組織病理學(xué)觀察假手術(shù)組大鼠腦組織形態(tài)正常、結(jié)構(gòu)緊密，神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整；與假手術(shù)組相比，模型組大鼠腦組織損傷嚴(yán)重，神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞體積增大，出現(xiàn)細(xì)胞核偏移、空泡化等現(xiàn)象；與模型組相比，芍藥苷組大鼠腦組織受損得到緩解；與芍藥苷組相比，芍藥苷+H89組大鼠腦組織受損較重；與H89組相比，芍藥苷+H89組大鼠腦組織受損得到緩解。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠腦組織病理學(xué)觀察（HE染色×200）：A為假手術(shù)組；B為模型組；C為芍藥苷組；D為H89組；E為芍藥苷+H89組

2.5各組大鼠腦組織cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)比較與假手術(shù)組相比，模型組大鼠cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05）；與模型組相比，芍藥苷組大鼠cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.05）；與芍藥苷組相比，芍藥苷+H89組大鼠cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05）；與H89組相比，芍藥苷+H89組大鼠cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.05）。見(jiàn)表4，圖2。

表4 各組大鼠腦組織cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)比較/±s

表4 各組大鼠腦組織cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)比較/±s

注：cAMP為環(huán)磷酸腺苷，PKA為蛋白激酶A，CREB為環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，GAPDH為甘油醛-3-磷酸脫氫酶，p-CREB為磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白。①與假手術(shù)組比較，P<0.05。②與模型組比較，P<0.05。③與芍藥苷組比較，P<0.05。④與H89組比較，P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組芍藥苷組H89組芍藥苷+H89組F值P值鼠數(shù)8 8 8 8 8 cAMP/GAPDH 1.03±0.23 0.31±0.05①0.79±0.20①②0.26±0.03①②③0.60±0.13①②③④37.16<0.001 PKA/GAPDH 1.05±0.24 0.30±0.06①0.75±0.19①②0.20±0.05①②③0.53±0.12①②③④41.52<0.001 p-CREB/CREB 1.02±0.23 0.29±0.08①0.77±0.23①②0.18±0.06①②③0.55±0.14①②③④34.94<0.001

圖2 各組大鼠腦組織cAMP/PKA/CREB通路蛋白表達(dá)情況

3 討論

腦卒中又稱(chēng)中風(fēng)，是位于癌癥、心臟病之后的第三大死因，是許多國(guó)家成人殘疾的主要原因，主要有缺血性腦卒中和出血性腦卒中。其中缺血性腦卒中發(fā)病率占80%以上，腦中動(dòng)脈閉塞是缺血性腦卒中常見(jiàn)的病因，具有較高的病死率和致殘率，偏癱是腦卒中病人幸存者常見(jiàn)的不良癥狀，嚴(yán)重影響病人的心理健康及生活質(zhì)量［11-12］。多項(xiàng)研究表明腦部缺血后，機(jī)體會(huì)釋放大量炎性因子并激活小膠質(zhì)細(xì)胞，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞可與浸潤(rùn)的白細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生更多的炎性介質(zhì)，從而引起腦組織水腫、神經(jīng)元凋亡、血腦屏障破壞等，最終導(dǎo)致腦神經(jīng)功能受損［12-13］。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分及血清炎性因子顯著升高，大鼠記憶行為學(xué)能力顯著下降，腦神經(jīng)細(xì)胞受損嚴(yán)重，提示急性腦缺血可導(dǎo)致大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)加劇，引發(fā)神經(jīng)突起的斷裂、損傷，進(jìn)而影響神經(jīng)、突觸之間的聯(lián)系，導(dǎo)致腦部神經(jīng)功能受損，最終出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙、神經(jīng)功能缺損等表現(xiàn)，表明腦卒中大鼠模型構(gòu)建成功。

芍藥苷是芍藥根中的主要活性成分，是一種水溶性糖苷，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、神經(jīng)保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等多種生物學(xué)功能，廣泛用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病、神經(jīng)退行性疾病等的臨床治療及基礎(chǔ)研究［14-15］。Wu等［16］研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷可減輕急性腦梗死大鼠的腦損傷并提高大鼠的神經(jīng)狀況，對(duì)腦缺血表現(xiàn)出一定的保護(hù)作用。Gu等［17］研究結(jié)果顯示芍藥苷可顯著改善阿爾茨海默病小鼠的認(rèn)知功能，降低小鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)，對(duì)腦神經(jīng)具有一定的保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)芍藥苷治療的腦卒中大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分及血清炎性因子顯著降低，記憶行為學(xué)能力顯著提高，腦組織受損得到緩解，提示芍藥苷可顯著抑制腦卒中大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)，有效發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)功能。

近年來(lái)的研究表明，cAMP/PKA/CREB通路與腦缺血疾病聯(lián)系密切，當(dāng)細(xì)胞受到缺血、缺氧等刺激時(shí)，可催化ATP脫去一個(gè)焦磷酸形成cAMP，cAMP可進(jìn)一步激活PKA，促使亞基PKAc進(jìn)入細(xì)胞核，從而促進(jìn)CREB磷酸化形成p-CREB，從而激活cAMP/PKA/CREB通路，該通路的激活對(duì)于腦缺血造成的神經(jīng)損傷、軸突再生、神經(jīng)元保護(hù)具有積極作 用［18-19］。Jiang等［20］研 究 發(fā) 現(xiàn) 激 活cAMP/PKA/CREB通路可促進(jìn)腦卒中大鼠行為恢復(fù)并發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)芍藥苷治療的腦卒中大鼠腦組織中cAMP、PKA、p-CREB蛋白表達(dá)顯著高于模型組，提示芍藥苷可能激活cAMP/PKA/CREB通路緩解大鼠腦組織受損情況。H89為PKA抑制劑，可顯著抑制PKA表達(dá)，從而阻斷該通路的激活，本研究結(jié)果顯示，芍藥苷+H89組大鼠腦組織中cAMP、PKA、p-CREB蛋白表達(dá)顯著顯著低于芍藥苷組，進(jìn)一步提示芍藥苷緩解腦卒中的作用可能與激活cAMP/PKA/CREB通路有關(guān)。

綜上所述，芍藥苷可顯著改善腦卒中大鼠的神經(jīng)功能及機(jī)體炎癥反應(yīng)，對(duì)大鼠腦組織具有一定的保護(hù)作用，可能是通過(guò)激活cAMP/PKA/CREB通路發(fā)揮作用，但本研究未設(shè)置相應(yīng)的通路激活劑進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，因此仍須深入研究。