孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的價值分析

羅 娜

（南京市江寧區(qū)婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心孕產(chǎn)保健科 江蘇 南京 211000）

唐氏綜合征（down's syndrome，DS）是導(dǎo)致我國新生兒出生缺陷的常見染色體數(shù)目異常遺傳性疾病。唐氏綜合征可導(dǎo)致新生兒智力低下、生長發(fā)育遲緩、頭面部特征異常等一系列病變，給家庭和社會帶來沉重負(fù)擔(dān)。孕期進(jìn)行唐氏篩查是產(chǎn)檢必檢項(xiàng)目，可使DS胎兒在孕期的診斷率明顯提高，極大地降低了DS新生兒出生率。但唐氏篩查也存在一定不足之處，對DS的陽性預(yù)測值較低。利用高通量測序技術(shù)能提高對DS檢測的特異度和準(zhǔn)確率。近年來，外周血游離胎兒DNA檢測在DS篩查中得到廣泛應(yīng)用，。本文進(jìn)一步分析孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的診斷價值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年1月—2021年1月在南京市江寧區(qū)婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心孕產(chǎn)保健科進(jìn)行DS產(chǎn)前篩查的230例DS高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的臨床資料，均接受唐氏篩查和外周血游離胎兒DNA檢測，將單純唐氏篩查作為A組，單純外周血游離胎兒DNA檢測作為B組，唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測作為C組。患者年齡20～34歲，平均年齡（27.4±3.2）歲；孕周12～18周，平均（16.1±2.5）周；體重46～72 kg，平均（56.4±7.8）kg。所有孕婦均為單胎妊娠，處于孕中期，常規(guī)行唐氏篩查后顯示為唐氏綜合征篩查高風(fēng)險(xiǎn)，或超聲檢查提示胎兒異常，或孕婦服用過致畸藥物或有感染等致畸史、有染色體異常家族史、曾經(jīng)生育過染色體異?；純?、有不明原因的胎停及死胎等；所有孕婦均充分了解外周血DNA檢測技術(shù)，明確檢測適應(yīng)證及局限性；排除多胎妊娠、孕早期或孕晚期、內(nèi)分泌性疾病、遺傳性疾病、拒絕DS篩查等。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，所有孕婦均知情同意。

1.2 方法

（1）唐氏篩查。采集孕婦肘靜脈血10 mL，保存于EDTA抗凝管中，在4 h內(nèi)進(jìn)行檢測，于4 ℃下離心1 600 r/min，處理10 min，取上清液，分裝至多個1.5 mL離心管中，以時間分辨免疫熒光法測定血清游離β-人絨毛膜促性腺激素（β-Human chorionic gonadotropin,β-hCG）、甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）二聯(lián)篩查法，檢查結(jié)果以中倍數(shù)（multiples of the median, MOM）表示，結(jié)合孕婦年齡、體重、既往是否有21-三體不良孕史等指標(biāo)，應(yīng)用DS風(fēng)險(xiǎn)評估軟件，計(jì)算DS風(fēng)險(xiǎn)值，唐氏高危切割值為1:270。（2）外周血游離胎兒DNA檢測。抽取孕婦外周靜脈血10 mL，置入專用采血管混勻，在8 h內(nèi)進(jìn)行檢測，分離血漿，在4 ℃下1 600 g離心100 min，將獲得的上清液置入幾個2 mL離心管中，再次4 ℃下1 600 g離心100 min，將獲得的上清液置入2 mL離心管中，置于-80 ℃冰箱中待查；提取血漿中游離DNA的血漿超過2 mL，經(jīng)PCR擴(kuò)增后獲得樣本DNA文庫，使用高通量測序儀測定外周血胎兒游離DNA，計(jì)算待測染色體的比例與總體人群的比例之差，除以待測染色體的方差，得出每條染色體所占的比例，計(jì)算Z值，若Z值≥3，為三體高危，Z值＜3，為單體高危。（3）聯(lián)合篩查。先行唐氏篩查，再行外周血游離胎兒DNA檢測。（4）對唐氏篩查陽性孕婦行羊水穿刺，在超聲引導(dǎo)下穿刺針經(jīng)腹壁及子宮，進(jìn)入羊膜腔抽取羊水20 mL，離心后獲取沉淀物0.5 mL，混合均勻，轉(zhuǎn)入加有羊水培養(yǎng)基的瓶內(nèi)，開放式培養(yǎng)后觀察羊水細(xì)胞生長情況，加入一定量秋水仙素，停止細(xì)胞分裂至中期，制片后得到羊水細(xì)胞標(biāo)本片，進(jìn)行介入性產(chǎn)前診斷，以染色體核型分析結(jié)果作為DS診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄三組對DS的診斷陽性及陰性病例數(shù)；統(tǒng)計(jì)三組對DS診斷的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 三組診斷結(jié)果分析

A組陽性27例（真陽性9例、假陽性18例），陰性203例（真陰性201例、假陰性2例）；B組陽性21例（真陽性10例、假陽性11例），陰性209例（真陰性208例、假陰性1例）；C陽性13例（真陽性11例、假陽性2例），陰性217例（真陰性217例、假陰性0例），見表1。

表1 三組診斷結(jié)果分析

2.2 三組對DS診斷的陽性預(yù)測值、特異度和準(zhǔn)確率比較

A組對DS診斷的陽性預(yù)測值為33.33%（9/27）、特異度為91.78%（201/219）、準(zhǔn)確率為91.30%（210/230）；B組對DS診斷的陽性預(yù)測值為47.62%（10/21）、特異度為94.98%（208/219）、準(zhǔn)確率為94.78%（218/230）；C組對DS診斷的陽性預(yù)測值為84.62%（11/13）、特異度為99.09%（217/219）、準(zhǔn)確率為99.13%（228/230），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），見表2。

表2 三組對DS診斷的陽性預(yù)測值、特異度和準(zhǔn)確率比較

2.3 唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測結(jié)果與染色體核型結(jié)果分析

21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征的診斷符合率均為100%，見表3。

表3 唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測結(jié)果與染色體核型結(jié)果分析

3.討論

我國每年新增出生缺陷新生兒約120萬，占每年所有出生人口的6%。新生兒出生缺陷的發(fā)生主要與遺傳、環(huán)境等因素有關(guān)，其中，染色體異常是最常見的遺傳因素，主要表現(xiàn)為染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)的異常。我國每年因染色體異常而發(fā)生出生缺陷的患兒達(dá)10萬左右，而染色體非整倍體異常約占所有染色體異常出生缺陷患兒的95%。臨床統(tǒng)計(jì)顯示，最常見的染色體異常類型包括21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征及性染色體綜合征，尤其以21-三體綜合征的發(fā)病率最高，危害也最為嚴(yán)重。依靠目前的臨床治療技術(shù)，尚無法治療染色體疾病，因此，加強(qiáng)產(chǎn)前染色體疾病的篩查及診斷，及時終止妊娠，是降低出生缺陷患兒出生率的關(guān)鍵。

DS是產(chǎn)科重點(diǎn)排查畸形的疾病之一，也是孕期必檢項(xiàng)目，早期發(fā)現(xiàn)并干預(yù)，對保障新生兒出生質(zhì)量有重要意義。目前，唐氏篩查是孕期主要的DS篩查方法，具有篩查成本低、創(chuàng)傷小、孕婦接受度高、臨床開展便利等優(yōu)點(diǎn)，通過血清測定F-βhCG、AFP，計(jì)算DS風(fēng)險(xiǎn)值來評估DS發(fā)病情況。但唐氏篩查對胎兒DS的診斷率較低，仍需要結(jié)合其他檢測方法進(jìn)一步明確診斷。

既往臨床產(chǎn)前診斷通過羊膜腔穿刺、臍靜脈穿刺、絨毛活檢等侵入性方法來獲取胎兒細(xì)胞進(jìn)行染色體核型檢驗(yàn)，這些方法均屬于有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷，可引起流產(chǎn)、感染、胎兒損傷、孕婦出血等并發(fā)癥或不良結(jié)局，臨床開展明顯受限。近年來，無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測在臨床得到推廣，通過抽取母體外周血，提取游離胎兒DNA，采用高通量測序法檢測游離胎兒DNA的染色體非整倍體，具有無創(chuàng)、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，明顯提高了DS的診斷率，減少了羊水穿刺給孕婦帶來的痛苦，甚至可造成流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。相關(guān)研究表明，宮內(nèi)胎兒DNA可呈游離狀態(tài)進(jìn)入母體外周血循環(huán)，母體血漿總游離DNA中游離胎兒DNA高達(dá)10%以上，且在孕5周即可檢出。且胎兒游離DNA分子長度多不足200 bp，明顯短于母體DNA，容易在孕婦外周血中檢測出游離胎兒的DNA。這給臨床早期診斷DS提供了有利證據(jù)。但該技術(shù)的檢測成本較高，在基層醫(yī)院及經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)難以普及。唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測能夠優(yōu)勢互補(bǔ)，兩者結(jié)合能提高診斷準(zhǔn)確性，減少檢查費(fèi)用，提高DS的早期診斷及干預(yù)率。

本文結(jié)果顯示，A組對DS診斷的陽性預(yù)測值為33.33%（9/27）、特異度為91.78%（201/219）、準(zhǔn)確率為91.30%（210/230），B組對DS診斷的陽性預(yù)測值為47.62%（10/21）、特異度為94.98%（208/219）、準(zhǔn)確率為94.78%（218/230），C組對DS診斷的陽性預(yù)測值為84.62%（11/13）、特異度為99.09%（217/219）、準(zhǔn)確率為99.13%（228/230），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）；C組對21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征的診斷符合率均為100%。充分證明唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測能有效檢測出21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征，整體對DS的診斷敏感度、特異度及準(zhǔn)確率高，為臨床診斷胎兒是否存在染色體非整倍體提供了可靠依據(jù)。

綜上所述，孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的診斷價值確切，診斷準(zhǔn)確率高，且安全無創(chuàng)，可為臨床早期診斷DS及終止妊娠提供可靠依據(jù)，值得臨床應(yīng)用。