GC-MS分析成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油化學(xué)成分

王雅琴，吳偉銘，丘志龍，朱文雅，張毅彬，張偉云*

(1.廈門(mén)醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系/廈門(mén)市中藥生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門(mén) 361023；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122)

澤瀉為澤瀉科植物東方澤瀉Alismaorientale(Sam.) Juzep.或澤瀉Alismaplantago-aquaticaLinn.的干燥塊莖。澤瀉因其特殊的利水滲濕、泄熱、化濁降脂等療效[1]，常被醫(yī)者廣泛使用。澤瀉主要有促進(jìn)尿液排泄[2]、降血糖血脂[3，4]、抑制腎結(jié)石的形成[5]等功效。澤瀉中所含的化學(xué)成分，除了三萜、二萜以及倍半萜以外，還有含氮化合物、苯丙素、糖類(lèi)、甾體、黃酮、酚酸、脂肪烴及其衍生物等[1]。

澤瀉揮發(fā)油中，倍半萜類(lèi)化合物占據(jù)了很大部分，這類(lèi)化合物不僅僅出現(xiàn)于揮發(fā)油中的高沸點(diǎn)部分，還多具有芳香氣味。研究發(fā)現(xiàn)，目前已從澤瀉中分離出了52個(gè)倍半萜[6]，主要分為三類(lèi)：桉葉烷型、吉瑪烷型和愈創(chuàng)木烷型(占據(jù)多數(shù))[7-8]。另外還包括少量刺參烷型、蒼耳烷型和其他類(lèi)型的倍半萜[9]。因此，本實(shí)驗(yàn)利用水蒸氣蒸餾法提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行成分分析，并與不同產(chǎn)地澤瀉的揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行比較，研究不同產(chǎn)地澤瀉的開(kāi)發(fā)利用可能性，為不同產(chǎn)地澤瀉的臨床治療及相關(guān)物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考。

1 材料及方法1.1 材料與儀器

氣質(zhì)聯(lián)用儀(型號(hào)：7890B/7000，美國(guó)安捷倫科技有限公司生產(chǎn))。澤瀉產(chǎn)于四川成都[購(gòu)自北京本草方源(亳州)藥業(yè)科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為皖20160125，藥材批號(hào)為190801，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為2015版《中華人民共和國(guó)藥典》]，經(jīng)廈門(mén)大學(xué)藥學(xué)院陳全成副教授鑒定為澤瀉Alismaplantago-aquaticaLinn.的干燥塊莖。蒸餾水、正己烷與甲醇均為色譜級(jí)。

1.2 水蒸氣蒸餾法

采用粉碎機(jī)將成都產(chǎn)澤瀉粉碎，過(guò)10目篩，分別兩次稱(chēng)取100.00 g成都產(chǎn)澤瀉(已粉碎過(guò)篩)放置于兩個(gè)2 000 mL圓底燒瓶中，分別加入800 mL蒸餾水，將圓底燒瓶放于電熱套上，連接揮發(fā)油提取器，從測(cè)定管上端加水至“0”的刻度線，連續(xù)提取6 h。用吸管將揮發(fā)油移至1.5 mL試管中，因?yàn)樵撛嚬苤泻猩倭空麴s水，故需要加入少量無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行脫水。吸取少量深綠色的揮發(fā)油置于未使用且干凈的EP管中，加入適量正己烷與甲醇溶解深綠色的澤瀉揮發(fā)油，用微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾至2 mL的樣品瓶，作為成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油GC-MS分析用的樣品。

1.3 氣相色譜-質(zhì)譜法

實(shí)驗(yàn)條件詳見(jiàn)表1。

表1 氣相色譜-質(zhì)譜法解析化合物條件

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 水蒸氣蒸餾法提取所得的化合物

采用水蒸氣蒸餾法且參照實(shí)驗(yàn)設(shè)定的條件提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS解析，水蒸氣蒸餾法提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油的GC-MS總離子流見(jiàn)圖1。

圖1 水蒸氣蒸餾法提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油的GC-MS總離子流

在NIST MS譜庫(kù)進(jìn)行檢索，采用Agilent MassHunter Qualitative Analysis B.06.00 分析軟件對(duì)譜圖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)共有85個(gè)色譜峰，有66個(gè)化合物，具體化合物見(jiàn)表2。

表2 水蒸氣蒸餾法提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油的化學(xué)成分

續(xù)表2

其中水蒸氣蒸餾法提取成都產(chǎn)澤瀉的揮發(fā)油，經(jīng)過(guò)AgtQual分析軟件中的面積歸一化法計(jì)算得出，有10個(gè)化合物相對(duì)含量較大，將這些化合物相對(duì)含量從大到小進(jìn)行排列，詳見(jiàn)表3。

表3 成都產(chǎn)澤瀉采用水蒸氣蒸餾法所得揮發(fā)油中相對(duì)含量大的化合物

2.2 成都產(chǎn)澤瀉與其他產(chǎn)地澤瀉揮發(fā)油相同的化合物

實(shí)驗(yàn)提取成都產(chǎn)澤瀉所得的化合物與其他產(chǎn)地澤瀉的化合物有少部分相同，具體詳見(jiàn)表4、表5。

3 討論

經(jīng)過(guò)對(duì)參考文獻(xiàn)[10-13]的解讀與分析，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地澤瀉揮發(fā)油有部分化合物相同，主要選取福建省、四川省以及江西省所產(chǎn)澤瀉的揮發(fā)油進(jìn)行成分研究解析，將這幾個(gè)產(chǎn)地澤瀉揮發(fā)油進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)共有21個(gè)化合物重復(fù)出現(xiàn)(出現(xiàn)在以上四個(gè)產(chǎn)地≥2次)，具體為δ-欖香烯、β-欖香烯、α-欖香烯、1，7，7 三甲基-2-乙烯基雙環(huán)[2.2.1]庚-2-烯、異長(zhǎng)葉烯、斯巴醇、γ-古蕓烯、2-戊基呋喃、3，5 辛二烯-2-酮、蛇麻烯、γ-木羅烯、2-蒈烯、氧化石竹烯、香樹(shù)烯、雅檻藍(lán)烯、紫羅烯、十六烷酸乙酯、棕櫚酸、3，5-辛二烯-2-酮、巴倫西亞烯、(+)-喇叭烯。

實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象為成都產(chǎn)澤瀉，經(jīng)過(guò)水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油與上文提及的4個(gè)產(chǎn)地澤瀉揮發(fā)油相同的化合物占據(jù)提取分析出總化合物中的很小部分，詳見(jiàn)表5，可以初步說(shuō)明，成都產(chǎn)澤瀉與其他產(chǎn)地澤瀉中揮發(fā)油成分有明顯不同。

表4 成都產(chǎn)澤瀉與其他產(chǎn)地(不同提取方法)澤瀉揮發(fā)油相同的化合物數(shù)量

表5 成都產(chǎn)澤瀉與其他產(chǎn)地(不同提取方法)澤瀉揮發(fā)油具體相同化合物

雖然未對(duì)澤瀉的揮發(fā)油進(jìn)行定量測(cè)定，但在水蒸氣蒸餾法提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，澤瀉藥材本身含油量較少，最先提取出的揮發(fā)油呈淡黃色的透明油狀，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的提取，揮發(fā)油逐漸變?yōu)樯罹G色。經(jīng)過(guò)后期的討論，猜測(cè)澤瀉揮發(fā)油可能是氧化的緣故，才轉(zhuǎn)變了顏色。這也為今后研究澤瀉揮發(fā)油的藥理作用提供了參考。

通過(guò)提取成都產(chǎn)澤瀉揮發(fā)油成分來(lái)進(jìn)一步完善不同產(chǎn)地澤瀉揮發(fā)油的化合物研究。同時(shí)，經(jīng)過(guò)將不同產(chǎn)地澤瀉進(jìn)行比較，說(shuō)明澤瀉具有一定的地域特點(diǎn)，選取質(zhì)量?jī)?yōu)良的澤瀉，發(fā)現(xiàn)新的化合物和新的療效，為后續(xù)研究澤瀉揮發(fā)油活性以及開(kāi)發(fā)利用澤瀉提供思路。