醋制白屈菜的鎮(zhèn)痛作用研究

劉南彤，李瑞海，賈天柱

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

醋制是一種傳統(tǒng)的中藥炮制方法，其炮制用醋多為米醋，藥材經(jīng)醋制后通常會(huì)達(dá)到減毒增效的作用[1]。本研究前期試驗(yàn)醋制白屈菜的最佳工藝已證明，醋制后白屈菜中活性成分的含量均有增加[1]，因此本研究將炮制品與生品分別對(duì)小鼠灌胃給藥，比較醋制前后白屈菜藥效作用的變化。目前制作動(dòng)物疼痛模型主要有三種方法，分別是熱刺激法、化學(xué)刺激法、機(jī)械刺激法[2-3]，本研究采用熱刺激法制造熱板致痛模型，并采用化學(xué)刺激法制造醋酸扭體模型[4-5]。這兩種模型具有既簡(jiǎn)單，效果又明顯的優(yōu)點(diǎn)；其中，熱板法測(cè)定的藥物鎮(zhèn)痛效果屬于中樞性的鎮(zhèn)痛作用；醋酸扭體法測(cè)定的鎮(zhèn)痛效果屬于外周性的鎮(zhèn)痛作用[5-6]。本研究將兩種模型聯(lián)用，能夠更加全面地探究醋制后白屈菜的鎮(zhèn)痛效果。

1 儀器與材料

1.1 藥物及試劑

本研究所用白屈菜，產(chǎn)于河北安國(guó)，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院許亮教授鑒定為罌粟科植物白屈菜的干燥全草；阿司匹林腸溶片(濟(jì)南永寧制藥股份有限公司)；乙醇、鹽酸、氫氧化鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；三氯甲烷(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；廚邦9度米醋(廣東美味調(diào)味食品有限公司)。

1.2 儀器

RE3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海越眾儀器設(shè)備有限公司)；HH-M8八孔恒溫水浴箱(上海赫田科學(xué)儀器)；超聲提取器(AS3120，天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；十萬(wàn)分之一分析天平(CP225D，SARTORIUS)；YLS-6B智能熱板儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司)。

1.3 動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明小鼠，全部為母鼠，體質(zhì)量在24～30 g之間，由本校藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房提供。

2 方法

2.1 白屈菜生品及醋制品的制備

2.1.1 白屈菜生品的制備 取白屈菜100 g，加入乙醇500 mL，超聲提取(功率200 W，頻率40 kHz)60 min，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液，蒸干，殘?jiān)尤?.5%鹽酸500 mL，超聲(功率200 W，頻率40 kHz)提取60 min，放冷過(guò)濾，濾液用10%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH=11，靜置30 min，置分液漏斗中，用三氯甲烷萃取，回收三氯甲烷，殘?jiān)?.5%羧甲基纖維素鈉溶液適量混合均勻。

2.1.2 白屈菜醋制品的制備 取白屈菜100 g，按照課題前期實(shí)驗(yàn)最佳醋制工藝[7]，加入米醋30 g，燜潤(rùn)2 h，60℃下烘20 h，再按照“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行。

2.2 熱板鎮(zhèn)痛試驗(yàn)

2.2.1 分組及給藥 將健康小鼠隨機(jī)分成8組，每組8只，分別為空白對(duì)照組(0.5%羧甲基纖維素鈉溶液10 mL/kg)、陽(yáng)性藥組(阿司匹林200 mg/kg)、醋制白屈菜低劑量組(5 mg/kg)、醋制白屈菜中劑量組(10 mg/kg)、醋制白屈菜高劑量組(20 mg/kg)、白屈菜生品低劑量組(5 mg/kg)、白屈菜生品中劑量組(10 mg/kg)、白屈菜生品高劑量組(20 mg/kg)，連續(xù)灌胃5d，之后對(duì)小鼠進(jìn)行熱板法試驗(yàn)，在為期5 d的灌胃操作中不限制小鼠的飲食與飲水，但在進(jìn)行試驗(yàn)前12 h禁食不禁水。

表1 白屈菜活性成分對(duì)熱板鎮(zhèn)痛小鼠的作用

2.3 醋酸扭體致痛試驗(yàn)

2.3.1 分組及給藥 同“2.2.1”項(xiàng)下方法，于第6天進(jìn)行醋酸扭體致痛試驗(yàn)。

2.3.2 醋酸扭體試驗(yàn)步驟 首先在小鼠腹腔注射0.6%的冰乙酸溶液，造成腹膜炎疼痛模型，每只小鼠的給藥劑量為0.1 mL/10 g。記錄15 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行)，并計(jì)算抑制扭體百分率[5]。

扭體百分率=(模型組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/模型組扭體次數(shù)×100%[6]

表2 醋制前后白屈菜活性成分對(duì)醋酸扭體小鼠模型的影響 (n=10)

阿司匹林組、炮制品白屈菜低劑量組、炮制品白屈菜中劑量組、炮制品白屈菜高劑量組、生品白屈菜低劑量組、生品白屈菜中劑量組、生品白屈菜高劑量組的抑制率分別為：38.13%、4.67%、40.68%、67.99%、1.08%、0.61%、1.33%。

3 討論

由上面表1結(jié)果可知，給藥前這8組小鼠的痛域值沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在小鼠灌胃后的30 min、60 min、120 min后，給藥量為5 mg/kg的白屈菜醋制品以及生品，這兩組小鼠在熱板上的停留時(shí)間與空白組小鼠相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。與空白組小鼠的痛閾值相比，陽(yáng)性藥物阿司匹林組的小鼠在給藥后3個(gè)時(shí)間段的痛閾值均呈現(xiàn)出顯著差異，說(shuō)明此次陽(yáng)性藥物的選擇比較成功。

當(dāng)醋制白屈菜給藥量為5 mg/kg時(shí)，在給藥后的3個(gè)時(shí)間點(diǎn)均沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的止痛效果，但給藥量達(dá)到10 mg/kg以及20 mg/kg時(shí)，都表現(xiàn)出了比較顯著的鎮(zhèn)痛效果，而且高劑量組的醋制白屈菜延長(zhǎng)小鼠痛閾值的效果更明顯；根據(jù)白屈菜生品的3組數(shù)據(jù)可知，僅有灌胃高劑量白屈菜提取物的小鼠出現(xiàn)了顯著延長(zhǎng)痛閾時(shí)間的現(xiàn)象，效果與陽(yáng)性藥物組以及白屈菜炮制品中劑量組相近。

將上述幾組的鎮(zhèn)痛效果由弱到強(qiáng)排序依次為：白屈菜生品低劑量組=白屈菜生品中劑量組=白屈菜炮制品低劑量組<白屈菜生品高劑量組=陽(yáng)性藥物組<白屈菜炮制品中劑量組<白屈菜炮制品高劑量組。綜上所述，可認(rèn)為醋制后的白屈菜對(duì)熱板法所致的疼痛其鎮(zhèn)痛效果強(qiáng)于白屈菜生品，當(dāng)給藥量在5～20 mg之間，止痛作用隨劑量增大而增大。

白屈菜提取物的鎮(zhèn)痛作用主要是外周鎮(zhèn)痛作用[8]，由表2可知，醋制后的白屈菜對(duì)于中樞性疼痛具有一定的治療作用，當(dāng)給藥劑量在10～20 mg時(shí)，鎮(zhèn)痛效果強(qiáng)于阿司匹林。按照本研究的提取方法，提取的是白屈菜的生物堿類(lèi)成分，其中原阿片堿與白屈菜堿具有較強(qiáng)的止痛作用，由此推斷白屈菜經(jīng)醋制后所含有的這兩個(gè)成分的含量可能有所提升，因此取醋制后的白屈菜提取物與白屈菜生品提取物各10 mg分別置于25 mL容量瓶中，甲醇溶解后經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)后進(jìn)行含量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)醋制品中原阿片堿和白屈菜堿的含量分別為0.036 8 mg/mL、0.036 1 mg/mL，高于生品中的相應(yīng)值0.033 5 mg/mL、0.027 7 mg/mL；因此可以認(rèn)為醋制后的白屈菜具有增強(qiáng)止痛效果的作用。

陽(yáng)性藥物阿司匹林組與白屈菜低劑量組和白屈菜中劑量組在給藥后的3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)，其小鼠的痛域時(shí)間并沒(méi)有顯著差異，高劑量組的白屈菜在給藥后的30 min時(shí)出現(xiàn)了最長(zhǎng)的痛域時(shí)間，將30 min小鼠的痛域時(shí)間與另外兩組時(shí)間段小鼠的痛域時(shí)間進(jìn)行t檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)3組之間的痛閾值并沒(méi)有顯著性差異，故不能認(rèn)為給藥后30 min該劑量得到了最佳鎮(zhèn)痛效果。

醋酸扭體試驗(yàn)是利用化學(xué)刺激制造的疼痛模型，其主要用于評(píng)價(jià)藥物外周性鎮(zhèn)痛效果[9]，該試驗(yàn)是利用醋酸刺激而引起小鼠腹腔產(chǎn)生炎癥繼而疼痛，因此小鼠會(huì)出現(xiàn)扭體反應(yīng)。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能是腹腔pH值降低而直接刺激傳入神經(jīng)纖維，是傳入神經(jīng)和炎癥遞質(zhì)共同作用的結(jié)果[10]。

從本實(shí)驗(yàn)可以看出陽(yáng)性藥物阿司匹林對(duì)抑制小鼠的扭體反應(yīng)具有顯著的作用，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性藥物的選擇比較合理；醋制后白屈菜低劑量組、白屈菜生品的3個(gè)劑量組與灌胃羧甲基纖維素鈉溶液的模型組小鼠相比，扭體次數(shù)無(wú)顯著差異，也沒(méi)有降低扭體反應(yīng)的趨勢(shì)；而醋制之后的白屈菜給藥量為10 mg/kg與20 mg/kg時(shí)，小鼠的扭體次數(shù)減少十分明顯，兩者的鎮(zhèn)痛效果與阿司匹林相比較，前者與之相近，后者則強(qiáng)于阿司匹林，由此可知，對(duì)于醋酸致痛模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用由弱到強(qiáng)依次為：白屈菜生品低、中、高劑量組=醋制白屈菜低劑量組<阿司匹林組=醋制白屈菜中劑量組<醋制白屈菜高劑量組。

4 結(jié)語(yǔ)

白屈菜經(jīng)醋制后，對(duì)于外周性疼痛——醋酸致痛模型小鼠的鎮(zhèn)痛效果強(qiáng)于白屈菜生品；醋制白屈菜的外周鎮(zhèn)痛效果與給藥劑量呈正相關(guān)，即給藥劑量越大，小鼠扭體次數(shù)越少，鎮(zhèn)痛作用越強(qiáng)。對(duì)于中樞性熱板鎮(zhèn)痛模型鼠具有明確的鎮(zhèn)痛效果，且強(qiáng)于生品。醋制后的白屈菜鎮(zhèn)痛效果與用藥的劑量呈正相關(guān)，用藥的劑量增加，其鎮(zhèn)痛效果越強(qiáng)。