β-1,6 N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶2在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

譚曉龍，朱君，楊濤，吳峰階（濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 胃腸外科，山東 濱州 256603）

胃癌（gastric cancer，GC）是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率分別居全球惡性腫瘤的第六位和第二位[1-2]。GC 的發(fā)生和發(fā)展是由于多種因素導(dǎo)致的多階段、多基因參與的復(fù)雜過(guò)程，包括炎癥、飲食等多種外部因素和基因突變等內(nèi)部因素的綜合作用[3-5]。近年來(lái)，GC 的化療、放療和免疫治療等技術(shù)手段得到了很大的發(fā)展，但由于GC患者早期癥狀不明顯和缺少特異性生物標(biāo)志物，以及其發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制尚不明確等，使得GC的預(yù)后較差，5年生存率不足30%[5-7]。因此，尋找影響GC發(fā)生和發(fā)展的生物標(biāo)志物尤為重要。研究[8-10]結(jié)果表明，糖基化是調(diào)控細(xì)胞間和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、運(yùn)輸、免疫反應(yīng)以及腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵因素。β-1，6 N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶[glucosaminyl (N-acetyl) transferase 2，GCNT2]是GCNT 家族中的一員，是誘導(dǎo)Ⅰ型血型抗原合成的關(guān)鍵糖基轉(zhuǎn)移酶。GCNT2 在結(jié)直腸癌、黑色素瘤、前列腺癌、食管癌和乳腺癌等惡性腫瘤組織和細(xì)胞中異常表達(dá)，發(fā)揮著重要的作用[11-14]，GCNT2可以作為早期腫瘤的診斷標(biāo)志物[15]，但其在GC 中的研究報(bào)道鮮見(jiàn)。本研究基于基因表達(dá)綜合（Gene Expression Omnibus,GEO）數(shù)據(jù)庫(kù)、腫瘤基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)和Kaplan-Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫(kù)的GC 數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，探討GCNT2在GC組織中的表達(dá)及其預(yù)后意義，同時(shí)利用免疫浸潤(rùn)等生物信息學(xué)技術(shù)分析GCNT2在GC發(fā)生和發(fā)展中的作用；體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)表達(dá)GCNT2對(duì)GC細(xì)胞增殖和侵襲的影響，以期為闡明GC發(fā)生和發(fā)展機(jī)制提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源及分析方法

本研究的分析數(shù)據(jù)主要來(lái)源于TCGA、GEO、Oncomine（http://www.oncomine.org），GEPIA（http://gepia2.cancer-pku.cn/）和TIMER 等數(shù)據(jù)庫(kù)[16-17]。通過(guò)GEPIA2、Oncomine 等數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)[18-25]分析，獲得GCNT2 在GC 組織和癌旁組織中的表達(dá)差異。利用UALCAN（http://ualcan.path.uab.edu）數(shù)據(jù)庫(kù)[19]，獲得在不同組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征下GC 組織中GCNT2 的表達(dá)差異。pROC 軟件包[26]用于分析GCNT2 mRNA在ROC曲線下的面積，以探討其在GC 診斷中的價(jià)值。對(duì)GSE84437 數(shù)據(jù)集中433例GC 數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估后獲取GCNT2 的表達(dá)水平與GC患者的總生存（OS）之間的相關(guān)性[27]。

利用MEXPRESS（https://mexpress.be/）數(shù)據(jù)庫(kù)[28-29]與LinkedOmics（http://www.linkedomics.orglogin.php）數(shù)據(jù)庫(kù)分別分析GCNT2表達(dá)與其啟動(dòng)子甲基化的相關(guān)性和GCNT2 的功能富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）[30]。使用GSEA V3.0（http://software.broadinstitute.org/gsea/msigdb/index.jsp）從分子簽名數(shù)據(jù)庫(kù)（MSigDB）獲得基因集（h.all.v6.2.entrez.gmt）和ClusterprofilerR包進(jìn)行分析及結(jié)果的可視化[31-32]，以P＜0.05和錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate，F(xiàn)DR）＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單樣本基因集富集分析（singlesample dene set enrichment analysis，ssGSEA）可以將免疫細(xì)胞群表達(dá)的基因特征應(yīng)用于個(gè)體腫瘤標(biāo)本[33]，在R軟件中利用Gsva包[34]通過(guò)ssGSEA方法[35-36]對(duì)免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)水平進(jìn)行量化。研究中使用的反卷積方法用于分析24種免疫細(xì)胞中GCNT2的表達(dá)水平與各免疫細(xì)胞浸潤(rùn)程度之間的相關(guān)性，以及GCNT2的表達(dá)水平與411個(gè)免疫相關(guān)基因之間的相關(guān)性。

1.2 組織標(biāo)本、細(xì)胞系及主要試劑

收集2018 年1 月至2019 年12 月濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)治療的25 例GC 患者的癌及配對(duì)癌旁組織標(biāo)本，所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)放療或化療。其中，男性18例、女性7例；年齡＜60歲11例，65歲及以上14例；高分化程度19例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者16例。人GC細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823細(xì)胞由濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院保留并傳代培養(yǎng)。

GCNT2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000、Trasnwell 小室均購(gòu)自美國(guó)Promega 公司，TRIzol 試劑、電化學(xué)發(fā)光試劑購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，胎牛血清（FBS）購(gòu)自美國(guó)BI 公司，RPMI 1640 培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司，兔抗人GCNT2、STAT3和PD-L1及鼠抗人GAPDH單克隆抗體均購(gòu)自Proteintech 公司，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗購(gòu)自美國(guó)KPL公司。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

研究所用細(xì)胞系均在添加10%FBS 的RPMI 1640培養(yǎng)基中，于37°C、5%CO2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SGC-7901 和BGC-823 細(xì)胞接種于6 孔板中，接種密度以過(guò)夜培養(yǎng)后細(xì)胞匯合度為60%～70%為標(biāo)準(zhǔn)。按照Lipofectamine 2000 說(shuō)明書(shū)的方法，分別將過(guò)表達(dá)GCNT2（pc-GCNT2）及其陰性對(duì)照（pc-NC）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至SGC-7901 和BGC-823細(xì)胞。

1.4 qPCR法檢測(cè)GC組織和細(xì)胞中GCNT2的表達(dá)

按照TRIzol試劑說(shuō)明書(shū)方法，分別提取GC組織和細(xì)胞中總RNA。將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA 為模板進(jìn)行qPCR 檢測(cè)。GCNT2 引物序列上游 為5'-TGTTCCTGGCTCTATGCCAAA-3'，下游為5'-TTAGCAAACAGGCTTGGTGAAT-3'；GAPDH 引物序列上游為5'-GATCGAATTAAACCTTATCGT CGT-3，下游為 5'-AGCAGCAGAACTTCCACTC GGT-3'。qPCR 反應(yīng)條件：95 ℃30 s 預(yù)變性；95 ℃12 s，62 ℃30 s，72 ℃延伸40 s，共40 個(gè)循環(huán)。以每個(gè)熒光信號(hào)達(dá)到閾值時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)作為Ct 值，以GAPDH 作為GCNT2 的內(nèi)參，ΔCt=Ct(GCNT2)-Ct(GAPDH)，GCNT2的相對(duì)表達(dá)量以2-ΔΔCt表示。

1.5 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GC細(xì)胞的克隆形成能力

將轉(zhuǎn)染后細(xì)胞常規(guī)消化并重懸于培養(yǎng)液中，調(diào)整細(xì)胞密度后分別接種于6 孔板（5×103個(gè)/孔）中，常規(guī)培養(yǎng)7 d。用4%多聚甲醛溶液固定30 min，0.1%結(jié)晶紫染色30 min，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)克隆形成數(shù)（大于50 個(gè)細(xì)胞計(jì)為1 個(gè)克?。⒂?jì)算克隆形成率（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100%）。

1.6 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GC細(xì)胞的侵襲能力

轉(zhuǎn)染后的SGC-7901 和BGC-823 細(xì)胞培養(yǎng)24 h后常規(guī)消化并重懸于培養(yǎng)液中，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液以100 μL/孔接種預(yù)鋪matrigel 膠的Transwell 小室的上室中，下室中加入750μL/孔完全培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)24 h 后用4%多聚甲醛溶液固定，0.1%結(jié)晶紫染色30 min。用棉簽擦去上室面殘余細(xì)胞，在倒置相差顯微鏡下計(jì)數(shù)侵襲細(xì)胞數(shù)，以此反映細(xì)胞的侵襲能力。

1.7 WB 法檢測(cè)GCNT2 過(guò)表達(dá)對(duì)GC 細(xì)胞中STAT3和PD-L1蛋白表達(dá)水平的影響

按照蛋白提取試劑盒操作流程抽提細(xì)胞總蛋白。取適量蛋白樣品進(jìn)行10%SDS-PAGE，并將蛋白轉(zhuǎn)PVDF 膜后，在2.5%脫脂奶粉中室溫封閉1.5 h，加入GCNT2（1∶1 000）、STAT3（1∶2 000）和PD-L1（1∶1 000）及GAPDH（1∶20 000）單克隆抗體，4 ℃過(guò)夜。TBST 洗膜3 次（5 min/次），加入HRP 標(biāo)記的羊抗兔IgG（1∶10 000），室溫下處理1.5 h，洗膜后滴加電化學(xué)發(fā)光劑曝光、顯影，用ImageJ軟件分析蛋白條帶的灰度值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

qPCR法、克隆形成、Transwell和WB等實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3 次。采用SPSS 21.0 和R 4.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，GCNT2在GC組織及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)差異采用兩獨(dú)立樣本比較t檢驗(yàn)，且為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05或P＜0.01表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GCNT2 mRNA在GC組織中低表達(dá)

對(duì)TIMER 和GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)中的GC 數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示GCNT2 mRNA在GC組織中表達(dá)水平顯著低于癌旁組織（P＜0.05或P＜0.01，圖1A、圖2A），且其表達(dá)水平與GC 患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（圖2B）和組織學(xué)分級(jí)（圖2C）顯著相關(guān)（均P＜0.01）。進(jìn)一步利用Oncomine 數(shù)據(jù)庫(kù)中的多數(shù)據(jù)集進(jìn)行GCNT2 mRNA表達(dá)水平分析，結(jié)果均表明，GCNT2 mRNA在GC組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁組織（圖3A～E）。同時(shí)，在本院收集的25 例GC 組織標(biāo)本中驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，GCNT2 mRNA在GC組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁組織（P＜0.01，圖1B）。

2.2 GCNT2 mRNA表達(dá)水平與GC患者診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)中的價(jià)值

利用pROC 軟件包分析5 個(gè)數(shù)據(jù)集中GCNT2 mRNA 區(qū)分GC 患者和健康人的能力，結(jié)果（圖4A～E）顯示在5 個(gè)數(shù)據(jù)集中其ROC 曲線下面積（AUC）和95% 可信 區(qū)間（95%CI）分 別 為0.782（0.642～0.889）、0.931（0.858～0.972）、0.788（0.716～0.855）、0.857（0.686～0.939）和0.688（0.555～0.804），表明GCNT2 mRNA對(duì)GC患者有較好的診斷價(jià)值。進(jìn)一步分析GCNT2 mRNA的表達(dá)水平與GC患者預(yù)后之間的相關(guān)性，利用GSE84437 數(shù)據(jù)集中433 例GC數(shù)據(jù)進(jìn)行生存分析結(jié)果（圖4F）表明，GCNT2 mRNA高表達(dá)與GC患者的OS呈顯著正相關(guān)（P＜0.01）。

2.3 GC中GCNT2甲基化水平升高

利用MEXPRESS 數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果顯示，在探針I(yè)D cg14112601位點(diǎn)上，GCNT2基因在腫瘤組織中的甲基化水平顯著高于癌旁組織（P＜0.05，圖5），表明GCNT2 mRNA在GC組織中表達(dá)水平降低可能是由其高甲基化所致。

2.4 GCNT2 涉及的生物學(xué)功能及參與的主要信號(hào)通路

利用LinkedOmics 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GCNT2 的功能富集分析。Spearman檢驗(yàn)以分析GCNT2和GC組織中差異表達(dá)的基因之間的相關(guān)性（圖6A；紅色代表正相關(guān)基因，綠色代表負(fù)相關(guān)基因）。熱圖顯示了與GCNT2 正相關(guān)和負(fù)相關(guān)的前50 個(gè)基因（圖6B、C）。功能富集分析表明，這些與GCNT2 的基因參與的生物過(guò)程主要是參與細(xì)胞形態(tài)發(fā)生的成分、細(xì)胞間黏附、多細(xì)胞生物信號(hào)、突觸傳遞以及tRNA 代謝過(guò)程等（圖6D）。所參與的分子功能及細(xì)胞成分主要是環(huán)狀核苷酸結(jié)合、細(xì)胞因子受體活性、類異戊二烯結(jié)合、核糖體的結(jié)構(gòu)成分、轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體以及線粒體內(nèi)膜等（圖6E、F）。其參與的KEGG信號(hào)通路主要是藥物代謝、化學(xué)致癌作用、cAMP信號(hào)通路、DNA復(fù)制、細(xì)胞周期以及氨?；?tRNA 的生物合成等信號(hào)通路（圖6G）。

為深入分析GCNT2在GC發(fā)生和發(fā)展中所發(fā)揮的作用，利用GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)中GSE62254 數(shù)據(jù)集的300 例GC 患者的數(shù)據(jù)進(jìn)行GSEA 分析，結(jié)果顯示，GCNT2在GC中主要通過(guò)抑制IL-6/JAK/STAT3信號(hào)通路、IL-2/STAT5 信號(hào)通路、炎癥反應(yīng)信號(hào)通路、α/γ干擾素響應(yīng)信號(hào)通路，以及NF-κB信號(hào)通路而在GC的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

2.5 GCNT2 mRNA表達(dá)與GC組織免疫浸潤(rùn)之間的相關(guān)性

GSEA 分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GCNT2 mRNA 主要通過(guò)抑制免疫炎癥相關(guān)信號(hào)通路而在GC 的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。因此，利用ssGSEA免疫量化了GSE62254 數(shù)據(jù)集中300 例GC 患者基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，GCNT2 mRNA 的表達(dá)水平與B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞等多數(shù)免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)程度呈顯著正相關(guān)（均P＜0.01），而與Th2 細(xì)胞和Treg 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)程度呈顯著負(fù)相關(guān)（均P＜0.05，圖7A）。進(jìn)一步分析GCNT2 mRNA的表達(dá)水平與免疫相關(guān)基因之間的相關(guān)性，結(jié)果顯示GCNT2 mRNA的表達(dá)水平與112 個(gè)免疫相關(guān)基因的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），與25個(gè)免疫相關(guān)基因呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05，圖7B）。

2.6 過(guò)表達(dá)GCNT2可顯著抑制GC細(xì)胞的增殖和侵襲能力

qPCR 法檢測(cè)結(jié)果顯示，與pc-NC 組相比，pc-GCNT2 組SGC-7901 和BGC-823細(xì)胞中GCNT2的mRNA 表達(dá)水平顯著升高（SGC-7901：5.021±0.442vs0.974±0.021，P＜0.05；BGC-823：4.141±0.661vs1.441±0.136，P＜0.01），證明細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功。

克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖8A）顯示，過(guò)表達(dá)GCNT2的SGC-7901 和BGC-823 細(xì)胞的克隆形成數(shù)目均明顯減少（均P＜0.01）。Transwell 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖8B）顯示，過(guò)表達(dá)GCNT2 后，SGC-7901 和BGC-823 細(xì)胞的侵襲能力均顯著減弱（均P＜0.01）。WB 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖8C）顯示，過(guò)表達(dá)GCNT2 的細(xì)胞中STAT3 和PD-L1 的表達(dá)水平均顯著降低（均P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)GCNT2主要通過(guò)IL-6/JAK/STAT3信號(hào)通路抑制GC細(xì)胞的增殖和侵襲能力。

3 討論

NAKAMURA 等[11]研究發(fā)現(xiàn)，GCNT2 在結(jié)直腸癌組織中顯著低表達(dá)，且與結(jié)直腸癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)GCNT2 的低表達(dá)可能是由于其啟動(dòng)子的高甲基化所致。CHAO 等[37]研究表明，表皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelialmesenchymal transition，EMT）可以誘導(dǎo)GCNT2 的表達(dá)水平上調(diào)，同時(shí)顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞miR-199a/b-5p的表達(dá)水平，進(jìn)而增強(qiáng)結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性相關(guān)特征。也有研究結(jié)果[12]發(fā)現(xiàn)，GCNT2 在黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著低于正常黑色素細(xì)胞，且其表達(dá)水平與臨床進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)，GCNT2 的缺失促進(jìn)黑色素瘤異種移植瘤的生長(zhǎng)，促進(jìn)克隆形成并提高細(xì)胞的增殖率，相反，GCNT2過(guò)表達(dá)顯著降低黑色素瘤異種移植瘤的生長(zhǎng)，抑制克隆形成并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

PENG等[14]研究發(fā)現(xiàn)，GCNT2在食管癌組織中高表達(dá)，過(guò)表達(dá)GCNT2 顯著促進(jìn)食管癌細(xì)胞的遷移和侵襲，GCNT2 高表達(dá)患者的OS 率明顯低于GCNT2低表達(dá)患者，GCNT2可能通過(guò)EMT進(jìn)程影響食管癌的發(fā)生和發(fā)展。ZHANG等[38]研究發(fā)現(xiàn)，GCNT2在人和小鼠來(lái)源的高度轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞系以及基底樣乳腺腫瘤組織中顯著高表達(dá)，GCNT2 的表達(dá)水平也與乳腺癌患者中的轉(zhuǎn)移表型顯著相關(guān)。功能研究結(jié)果表明，GCNT2的異常表達(dá)可通過(guò)EMT進(jìn)程促進(jìn)體外細(xì)胞遷移和侵襲及體內(nèi)乳腺癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移。MIKAMI 等[39]研究表明，高表達(dá)GCNT2 組前列腺癌患者的OS 率顯著低于低表達(dá)GCNT2 組前列腺癌患者，且沉默GCNT2 的表達(dá)則顯著抑制前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。同樣，NONAKA等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧條件下，前列腺癌細(xì)胞中GCNT2 的表達(dá)水平顯著上調(diào)，影響前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展。PEREZ 等[40]發(fā)現(xiàn)，GCNT2 可能是黑色素瘤潛在的診斷和治療標(biāo)志物。

本研究利用多數(shù)據(jù)集綜合分析以及臨床樣本驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，GCNT2在GC組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁組織，且其表達(dá)水平與GC患者的診斷和預(yù)后顯著相關(guān)。甲基化分析發(fā)現(xiàn)，GC組織中的甲基化狀態(tài)顯著高于正常組織，說(shuō)明GCNT2 在GC 組織中的低表達(dá)可能是由于其啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化所致。功能富集分析發(fā)現(xiàn)，GCNT2 基因參與的生物過(guò)程主要是參與細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、細(xì)胞間黏附、多個(gè)細(xì)胞生物信號(hào)、突觸傳遞以及tRNA 代謝過(guò)程等，所參與的分子功能及細(xì)胞成分主要是環(huán)狀核苷酸結(jié)構(gòu)、細(xì)胞因子受體活性、核糖體的結(jié)構(gòu)成分以及轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體以及線粒體內(nèi)膜；單基因GSEA 分析發(fā)現(xiàn)，GCNT2 在GC中主要通過(guò)抑制IL6/JAK/STAT3、IL-2/STAT5、炎癥反應(yīng)、α/γ 干擾素響應(yīng)以及NF-κB 等信號(hào)通路。免疫分析發(fā)現(xiàn)，GCNT2 的表達(dá)水平與B 細(xì)胞和CD8+T 細(xì)胞等多數(shù)免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)程度顯著正相關(guān)，而與Th2細(xì)胞和Treg 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)程度顯著負(fù)相關(guān)，且其表達(dá)水平與多數(shù)免疫相關(guān)基因的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，而與少量免疫相關(guān)基因呈負(fù)相關(guān)，且過(guò)表達(dá)GCNT2 后STAT3 和PD-L1 的表達(dá)水平顯著下降。本研究結(jié)果說(shuō)明，GCNT2的在GC組織中的低表達(dá)可能是由于啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化所致，而高表達(dá)GCNT2主要通過(guò)抑制IL6/JAK/STAT3信號(hào)通路和免疫相關(guān)致癌信號(hào)通路以及促進(jìn)B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性而在GC 的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，提示GCNT2 可能是GC 細(xì)胞進(jìn)行免疫治療的新靶點(diǎn)。

綜上所述，GCNT2在GC中可以作為GC診斷和預(yù)后的標(biāo)志物。GCNT2在GC中主要發(fā)揮抑癌作用，可能是由于激活免疫細(xì)胞而發(fā)揮抑癌作用。基于本研究主要基因數(shù)據(jù)庫(kù)挖掘以及生物信息學(xué)分析結(jié)果，課題組將進(jìn)行體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)，分析驗(yàn)證GCNT2在GC 免疫微環(huán)境中的作用，以期為GC 的診療提供新的思路。