鮑內(nèi)臟多糖體內(nèi)抗氧化及增強小鼠免疫活性

魏好程，邵 杰，何傳波，李 漫，熊何健*

自由基是人體生命活動中各種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物，因其單電子的結(jié)構(gòu)而表現(xiàn)出極其活潑的不穩(wěn)定性[1]，人體內(nèi)自由基的過量積累會造成機體在分子水平、細胞水平及組織器官水平的各種不可逆的氧化損傷[2]，引起機體免疫功能下降，導(dǎo)致機體衰老。食品中含有多種抗氧化物質(zhì)，生命組織中也存在多種內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)協(xié)同維持機體內(nèi)生命過程中自由基的平衡。

近年來，科學(xué)家不斷地從海洋生物中發(fā)現(xiàn)一些具有抗氧化活性和增強機體免疫力的化合物，其中多糖類物質(zhì)因易被生物體吸收，通過清除體內(nèi)自由基，表現(xiàn)出較強的抗氧化作用和其他生物活性而受到人們的關(guān)注。鮑是我國極具經(jīng)濟價值的水產(chǎn)品之一，近年來因人工養(yǎng)殖技術(shù)鮑產(chǎn)量得以大幅提升，2015年我國鮑養(yǎng)殖量12.8萬 t，其中福建省鮑產(chǎn)量10.0萬 t，經(jīng)濟產(chǎn)值已經(jīng)超過100億 元，鮑產(chǎn)業(yè)已成為福建省海洋漁業(yè)的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一[3]。鮑在加工過程中會產(chǎn)生約自身體質(zhì)量35%的內(nèi)臟下腳料，常被直接丟棄，不僅污染環(huán)境，而且造成資源浪費[4]。鮑內(nèi)臟包含肝胰腺、腎臟、性腺等內(nèi)臟組織，還含有鮑消化后的產(chǎn)物。酶解后的鮑內(nèi)臟含有豐富的消化酶、蛋白肽、多糖和脂肪酸等生理活性物質(zhì)，是海洋活性功能物質(zhì)的良好來源[5-6]，鮑內(nèi)臟的精深加工已成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的迫切需求。

已有研究表明，鮑臟器中存在多種清除自由基、促進淋巴細胞增殖、抑制腫瘤細胞生長的活性成分，表現(xiàn)出抗氧化、增強機體免疫和抗癌等功能活性。王姣等[7]研究表明鮑內(nèi)臟多糖（abalone visceral polysaccharides，AVP）對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羥自由基具有良好的清除作用。陳秀琴[8]運用酶解法發(fā)現(xiàn)鮑內(nèi)臟蛋白肽也能很好地體外清除自由基活性，表現(xiàn)出良好抗氧化功效。蘇永昌等[9]采用不同種類蛋白酶酶解提取鮑內(nèi)臟多糖后發(fā)現(xiàn)，胃蛋白酶對鮑內(nèi)臟多糖提取效果最好，得到的各組多糖均表現(xiàn)出良好的抗氧化作用，而何傳波等[10]利用堿性蛋白酶制備的鮑內(nèi)臟蛋白肽，表現(xiàn)出較好的體內(nèi)抗氧化活性。程婷婷等[11]從鮑臟器中分離純化出一種多糖，表現(xiàn)出一定的體外抗腫瘤活性。朱莉莉[12]、王蒞莎[13]等分別從鮑內(nèi)臟中分離提取的鮑內(nèi)臟多糖，能顯著抑制H22肝癌細胞生長，以及對HeLa和K562細胞具有一定程度的抑制作用，表現(xiàn)出抗腫瘤活性和增強免疫活性。相關(guān)研究報道多聚焦于鮑內(nèi)臟多糖和多肽的功能活性研究，但功能活性實驗多停留在體外實驗和細胞實驗階段，關(guān)于鮑內(nèi)臟多糖對動物體內(nèi)實驗的相關(guān)報道還很有限。

本研究在課題組已有的二次酶解技術(shù)工藝制備鮑內(nèi)臟多糖的基礎(chǔ)上，結(jié)合前期已取得的體外抗氧化研究結(jié)果[7,14]，開展鮑內(nèi)臟多糖體內(nèi)抗氧化及增強小鼠免疫活性的研究，以期為鮑的綜合利用及產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級雄性KM小鼠、SPF級雄性BALB/C小鼠，體質(zhì)量（18±2）g，均購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，許可證號SCXK（滬）2012-0002。分籠飼養(yǎng)，每天光照12 h，動物房環(huán)境溫度20～25 ℃，相對濕度50%～60%，自由進食進水，每天更換飼料、飲水和墊料，進行7 d適應(yīng)性喂養(yǎng)。

鮑內(nèi)臟多糖由集美大學(xué)食品與生物工程學(xué)院功能性食品研究實驗室自制。經(jīng)高效液相色譜檢測，實驗用鮑內(nèi)臟多糖樣品含有甘露糖、葡萄糖胺、半乳糖胺、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖7 種單糖，總糖含量49.6%。

總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）測試盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）測試盒、還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）測試盒、蛋白質(zhì)羰基測試盒、考馬斯亮藍測試盒 南京建成試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

JDC-0.2真空冷凍干燥機 廈門柏嘉生物科技有限公司；RNF0460-011多功能卷式膜小試設(shè)備 廈門福美科技有限公司；UV-8000A紫外-可見分光光度計 上海尤尼柯儀器有限公司；Ultimate 3000高效液相色譜儀美國DIONEX公司。

1.3 方法

1.3.1 體內(nèi)抗氧化活性動物實驗分組及給藥實驗設(shè)計

實驗參照[2012]107號《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9 個保健功能評價方法的通知》中抗氧化功能評價方法[15]，將70 只KM小鼠適應(yīng)環(huán)境后，隨機分為7 組，每組10 只，設(shè)定為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、鮑內(nèi)臟多糖低劑量組、中劑量組和高劑量組。各劑量組給藥劑量參照《抗氧化功能評價方法》[15]、Finkel[16]和羅曉航[17]等動物實驗劑量設(shè)定方法，略作調(diào)整。中劑量組給藥劑量設(shè)定為人體臨床用量的10 倍（小鼠），高劑量組給藥劑量設(shè)定為人體臨床用量20 倍，低劑量組給藥劑量設(shè)定為人體臨床用量的5 倍。其中，陽性對照組抗壞血酸為人體攝入量的5 倍，即10 mg/kg劑量VC溶液每天灌胃0.5 mL，鮑內(nèi)臟多糖低、中、高劑量組分別以200、400、800 mg/kg劑量每天灌胃0.5 mL，空白對照組和模型對照組每天灌胃等體積的0.5 mL生理鹽水。

1.3.2 乙醇氧化損傷模型動物實驗設(shè)計

參照《抗氧化功能評價方法》中乙醇氧化損傷模型造模方法[15]，實驗期間小鼠自由攝食和飲水，每天上午8：00進行灌胃。小鼠連續(xù)灌胃30 d后，除空白組外，其他各組小鼠禁食16 h后一次性給予體積分數(shù)50%乙醇溶液12 mL/kg劑量灌胃處理，6 h后將小鼠處死解剖，取出肝臟，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙吸干表面水分后用生理鹽水低溫勻漿，制備勻漿液，2 000 r/min離心10 min，留上清液，待測。

1.3.3 體內(nèi)抗氧化活性指標(biāo)測定

SOD活力采用黃嘌呤氧化酶法測定。MDA含量測定采用硫代巴比妥酸法測定。GSH含量采用硫代二硝基苯甲酸顯色分光光度法測定。其中樣本蛋白質(zhì)量濃度采用考馬斯亮藍顯色分光光度法測定，根據(jù)式（1）計算；蛋白質(zhì)羰基含量采用分光光度法測定，根據(jù)式（2）計算。以上4 項指標(biāo)檢測操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.4 增強免疫力動物實驗分組及給藥實驗設(shè)計

實驗選擇正常動物模型，將60 只BALB/C小鼠適應(yīng)環(huán)境后，隨機分為6 組，每組10 只，設(shè)定為空白對照組、陽性對照組、鮑內(nèi)臟多糖低劑量組、中劑量組和高劑量組。其中空白對照組每天灌胃0.5 mL生理鹽水，陽性對照組以25 mg/kg劑量鹽酸左旋咪唑每天灌胃0.5 mL，鮑內(nèi)臟多糖低、中、高劑量組分別每天以200、400、800 mg/kg劑量灌胃0.5 mL。實驗期間小鼠自由攝食和飲水，每天上午8：00進行灌胃，連續(xù)灌胃30 d后稱質(zhì)量，各組小鼠根據(jù)檢測指標(biāo)方法進行相應(yīng)處理取樣，各動物模型實驗設(shè)計參照1.3.1節(jié)所述。

1.3.5 增強免疫力功能指標(biāo)測定

免疫力活性功能評價采用免疫器官指數(shù)、細胞免疫、體液免疫和非特異性免疫中單核-巨噬細胞功能進行綜合評價。其中體質(zhì)量和免疫器官指數(shù)采用稱質(zhì)量法測定；遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（delayed type hypersensitivity，DTH）測定采用足跖增厚法；血清溶血素抗體水平測定采用血凝法；小鼠碳廓清實驗采用校正吞噬指數(shù)法，各項檢測方法參照《增強免疫力功能評價方法》[18]要求進行。

1.4 數(shù)據(jù)分析

實驗數(shù)據(jù)均以 ±s表示，使用SPSS 17.0軟件的單因素方差分析（One-way ANOVA）中的鄧肯氏多重比較分析差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 鮑內(nèi)臟多糖對小鼠體質(zhì)量的影響

按照1.3.1節(jié)方法，灌胃30 d前后，分別對各實驗組小鼠進行體質(zhì)量測量，實驗數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 鮑內(nèi)臟多糖對小鼠體質(zhì)量的影響（n＝10）Table 1 Effect of AVP on body weight of mice (n= 10)

由表1可知，各實驗組小鼠灌胃前體質(zhì)量無顯著差異（P＞0.05），表明實驗用小鼠體質(zhì)量個體差異不顯著，實驗具有統(tǒng)計學(xué)意義。連續(xù)灌胃30 d后，各組小鼠之間的體質(zhì)量均無顯著差異（P＞0.05），各組小鼠灌胃前后體質(zhì)量的增加量也無顯著差異（P＞0.05）。表明鮑內(nèi)臟多糖對小鼠體質(zhì)量無顯著影響，對小鼠毒副作用較小。

2.2 鮑內(nèi)臟多糖對乙醇氧化損傷模型小鼠肝臟中SOD活力和GSH、MDA、蛋白質(zhì)羰基含量的影響

基于不同原理的各種抗氧化活性檢測和評價方法，能從不同機理反映抗氧化活性物質(zhì)的多種功能特性[19]。但由于抗氧化反應(yīng)的多樣性和復(fù)雜性，加之各種方法自身局限性，尚未形成一種標(biāo)準(zhǔn)方法[20]。本實驗在課題組已有的鮑內(nèi)臟多糖體外抗氧化實驗的基礎(chǔ)上[7]，選擇SOD活力和GSH、MDA、蛋白質(zhì)羰基含量作為體內(nèi)抗氧化活性綜合評價指標(biāo)。乙醇氧化損傷模型動物實驗各組小鼠肝臟中SOD活力和GSH、MDA、蛋白質(zhì)羰基含量變化如表2所示。

表2 鮑內(nèi)臟多糖對小鼠肝臟中SOD活力和GSH、MDA、蛋白質(zhì)羰基含量的影響（n＝ 10）Table 2 Effect of AVP on SOD activity, GSH, MDA and protein carbonyl content in liver of mice (n= 10)

SOD是一種源于生命體的活性物質(zhì)，是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，可以保護細胞免受自由基攻擊[21-22]。而GSH在生物體內(nèi)作為一種還原劑能消除機體內(nèi)的過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物，可以防止細胞膜與其他生物組織免受過氧化損傷[23-24]。MDA是脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，能引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，具有細胞毒性，其含量與細胞氧化損傷的程度呈正相關(guān)[25]。機體內(nèi)蛋白質(zhì)羰基作為蛋白質(zhì)氧化的產(chǎn)物，是體內(nèi)蛋白質(zhì)遭到自由基攻擊的重要標(biāo)志，其含量間接反映了機體內(nèi)蛋白質(zhì)抵抗自由基攻擊的能力[26-27]。

由表2可知，模型對照組小鼠肝臟內(nèi)SOD活力、GSH含量極顯著低于空白對照組（P＜0.01），而MDA和蛋白質(zhì)羰基含量極顯著均高于空白對照組（P＜0.01），表明乙醇氧化損傷動物造模實驗設(shè)計成功。

乙醇氧化損傷模型小鼠經(jīng)鮑內(nèi)臟多糖中、高劑量灌胃處理后，小鼠肝臟中SOD活力均極顯著高于模型對照組（P＜0.01）、GSH含量均顯著高于模型對照組（P＜0.05）。同時，數(shù)據(jù)表明鮑內(nèi)臟多糖各處理組中小鼠肝臟SOD活力、GSH含量與灌胃劑量呈現(xiàn)正相關(guān)性。鮑內(nèi)臟多糖中劑量組小鼠肝臟SOD活力比乙醇氧化損傷模型對照組小鼠肝臟中SOD活力提高了20.6%，而GSH含量提高了1.02 倍。表明鮑內(nèi)臟多糖能增強小鼠體內(nèi)SOD活力和提高GSH含量，減輕超氧陰離子自由基損傷，幫助氧化損傷機體GSH含量恢復(fù)正常水平，提高機體的抗氧化能力。

經(jīng)鮑內(nèi)臟多糖、中、高劑量灌胃處理后，小鼠肝臟中MDA含量均極顯著低于模型對照組（P＜0.01），蛋白質(zhì)羰基含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05）。同時，數(shù)據(jù)表明鮑內(nèi)臟多糖處理組小鼠肝臟中MDA含量、蛋白質(zhì)羰基含量與灌胃劑量呈現(xiàn)負相關(guān)性。鮑內(nèi)臟多糖中劑量組小鼠肝臟中MDA含量比乙醇氧化損傷模型對照組小鼠肝臟中MDA含量降低了56.2%，而蛋白質(zhì)羰基含量降低45.4%。表明鮑內(nèi)臟多糖都具有清除體內(nèi)氧自由基、拮抗氧自由基對蛋白質(zhì)的攻擊、降低體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度和蛋白質(zhì)的氧化損傷程度的作用。

另外，鮑內(nèi)臟多糖中劑量組小鼠肝臟中GSH含量、MDA含量和蛋白質(zhì)羰基含量3 項檢測指標(biāo)與相對應(yīng)的陽性對照組無顯著差異（P＞0.05），鮑內(nèi)臟多糖高劑量組中SOD活力與相對應(yīng)的陽性對照組無顯著差異（P＞0.05），這表明鮑內(nèi)臟多糖具有良好的體內(nèi)抗氧化活性。

2.3 鮑內(nèi)臟多糖對小鼠免疫力的影響

免疫功能與健康密切相關(guān)，增強機體的免疫功能是疾病治療和機體康復(fù)的重要途徑。在增強免疫力功能評價中有多種指標(biāo)和方法從不同角度反映供試樣品體內(nèi)增強小鼠免疫力的能力。本實驗中鮑內(nèi)臟多糖對增強小鼠免疫力的影響如表3所示。

免疫器官指數(shù)包括胸腺或脾臟的相對質(zhì)量，可反映機體免疫細胞的生長發(fā)育、增殖及功能狀態(tài)。DTH是由致敏性T細胞介導(dǎo)的一種細胞免疫反應(yīng)，是細胞免疫的體內(nèi)檢測法，其通過測定小鼠的局部腫脹程度（足跖增厚）可以反映DTH的反應(yīng)強度。血清溶血素水平反映機體形成抗體的能力，揭示小鼠體內(nèi)B細胞增殖分化產(chǎn)生抗綿羊紅細胞（sheep red blood cell，SRBC）抗體（溶血素）的水平，以此來評價機體的體液免疫功能[28]。碳廓清法常被用來檢測機體的非特異性免疫功能，反映機體單核-巨噬細胞的吞噬能力。增強機體免疫力功能評價中常采用免疫器官指數(shù)、細胞免疫、體液免疫和非特異性免疫作為功能活性物質(zhì)增強免疫力的一項綜合指標(biāo)[29]。

表3 鮑內(nèi)臟多糖對小鼠免疫器官指數(shù)、DTH、血清溶血素抗體水平和碳廓清能力的影響（n＝10）Table 3 Effect of AVP on immune organ indices, DTH, serum hemolysin and carbon clearance in mice (n= 10)

由表3可知，鮑內(nèi)臟多糖低、中、高各劑量組與空白對照組相比均能夠顯著提高小鼠脾臟指數(shù)和小鼠胸腺指數(shù)（P＜0.05）。鮑內(nèi)臟多糖各劑量組小鼠的足跖腫脹程度、溶血素抗體水平均極顯著地高于空白對照組（P＜0.01），吞噬指數(shù)顯著高于空白對照組（P＜0.05）。其中，鮑內(nèi)臟多糖中劑量組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)比空白對照組分別提高21.9%和152%；小鼠足跖增厚度比空白對照組提高了40.3%；小鼠血清溶血素抗體水平比空白對照組提高了49.3%；小鼠單核-巨噬細胞碳廓清吞噬指數(shù)提高了10%。比較鮑內(nèi)臟多糖不同劑量組的各項指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，除了免疫器官指數(shù)和吞噬指數(shù)外，其余指標(biāo)均呈現(xiàn)量效關(guān)系，且效果優(yōu)于陽性對照。研究表明鮑內(nèi)臟多糖能夠提高小鼠免疫器官指數(shù)、提高小鼠足跖腫脹程度、提高小鼠血清的抗體水平和提高小鼠的吞噬指數(shù)，從免疫器官指數(shù)、細胞免疫、體液免疫以及非特異性免疫方面均表現(xiàn)出有良好的增強免疫力活性功能。

3 討 論

通過乙醇氧化損傷模型實驗，鮑內(nèi)臟多糖可顯著提高模型小鼠肝臟SOD活性、顯著提高小鼠體內(nèi)GSH含量、顯著降低小鼠體內(nèi)MDA和蛋白質(zhì)羰基含量。對輔助清除氧化模型小鼠體內(nèi)超氧陰離子、保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性、減少細胞損傷和降低體內(nèi)脂質(zhì)過氧化和蛋白質(zhì)氧化損傷方面均有良好作用。

鮑內(nèi)臟多糖低、中、高劑量組與提高乙醇氧化損傷模型小鼠SOD活性和提高GSH含量呈顯著正相關(guān)性；與降低小鼠體內(nèi)MDA和蛋白質(zhì)羰基含量呈顯著負相關(guān)性。中劑量鮑內(nèi)臟多糖處理組小鼠體內(nèi)抗氧化指標(biāo)除SOD活力外其他與陽性對照組無顯著差異，高劑量組小鼠SOD活力與陽性對照組無顯著差異，這與課題組先前開展的鮑內(nèi)臟多糖體外抗氧化活性研究中鮑內(nèi)臟多糖對H2O2損傷的LO2細胞中GSH-Px、SOD活力和MDA含量的影響與多糖劑量呈顯著正相關(guān)性和高劑量處理組兩項指標(biāo)均優(yōu)于陽性對照組的結(jié)果基本一致[7]，表明鮑內(nèi)臟多糖通過促進機體和細胞內(nèi)抗氧化酶活性，減少有毒過氧化產(chǎn)物實現(xiàn)抗氧化作用，與Zhai Li等[30]在川芎嗪衍生物的作用機理是一致的。根據(jù)《抗氧化功能評價方法》中結(jié)果判定依據(jù)，動物實驗中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物、抗氧化酶、抗氧化物質(zhì)4 項指標(biāo)中3 項陽性，可判定該受試樣品抗氧化功能動物實驗結(jié)果陽性，表明鮑內(nèi)臟多糖具有一定的抗氧化活性。

在增強小鼠免疫力功能評價中，鮑內(nèi)臟多糖能夠極顯著提高小鼠脾臟指數(shù)和小鼠胸腺指數(shù)、足跖增厚，極顯著提高小鼠溶血素抗體水平，顯著提高小鼠吞噬指數(shù)；在免疫器官指數(shù)、細胞免疫、體液免疫以及非特異性免疫方面均表現(xiàn)出有良好的增強免疫力活性功能，并且與多糖灌胃劑量呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；參照《增強免疫力功能評價方法（征求意見稿）》中結(jié)果判定方法，正常小鼠動物模型中4 項指標(biāo)為陽性，可判定該受試樣品增強小鼠免疫力結(jié)果陽性，表明鮑內(nèi)臟多糖具有增強小鼠免疫力功能。

食品加工技術(shù)對生物活性多糖結(jié)構(gòu)和功能特性的影響是十分顯著的[31]，目前多采用較為溫和的生物酶解技術(shù)進行活性物質(zhì)提取。本研究利用酶解技術(shù)提取的鮑內(nèi)臟多糖和劉娜等[5]利用酶解技術(shù)提取的鮑性腺多糖分別在乙醇氧化損傷模型小鼠和高脂血癥大鼠中表現(xiàn)出良好的體內(nèi)抗氧化能力結(jié)果一致。另外，本研究所用的鮑內(nèi)臟多糖采用工業(yè)化生產(chǎn)工藝流程制備，鮑內(nèi)臟多糖的成分還相對復(fù)雜，與先前分離純化的單一活性多糖在體外抗氧化活性功能上還具有差異性[7]，保健功能因子的分離、純化及各組分活性驗證還需大量數(shù)據(jù)支持。實驗結(jié)果為鮑內(nèi)臟的有效利用提供了理論依據(jù)，可以極大地減少優(yōu)質(zhì)海洋生物資源的浪費和環(huán)境污染，對提高鮑產(chǎn)品提升經(jīng)濟價值、完善產(chǎn)業(yè)鏈起到積極的推動作用。

參考文獻：

[1] 王爽, 張高帆, 陳欣悅, 等. 小球藻蛋白的制備及其水解肽的抗氧化研究[J]. 中國食品學(xué)報, 2017, 17(2): 92-100. DOI:10.16429/j.1009-7848.2017.02.013

[2] KO S C, KIM D Y, JEON Y J. Protective effect of a novel antioxidative peptide purified from a marine Chlorella ellipsoidea protein against free radical-induced oxidative stress[J]. Food and Chemical Toxicology, 2012, 50: 2294-2302. DOI:10.1016/j.fct.2012.04.022.

[3] 中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2016: 33.

[4] 王大海. 海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展規(guī)模經(jīng)濟及規(guī)模效率研究[D]. 青島: 中國海洋大學(xué), 2014: 6-7.

[5] 劉娜, 朱蓓薇, 孫黎明, 等. 鮑魚性腺多糖的體內(nèi)抗氧化活性[J].大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2011, 30(3): 177-179. DOI:10.3969/j.issn.1674-1404.2011.03.006.

[6] 項發(fā)暉, 葉丹榕, 白偉娟, 等. 鮑魚性腺中甾醇類化合物的皂化分離工藝優(yōu)化[J]. 食品工業(yè)科技, 2017, 38(1): 193-199.

[7] 王姣, 魏好程, 何傳波, 等. 鮑內(nèi)臟多糖的抗氧化活性[J]. 食品科學(xué),2017, 38(15): 115-121. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201715019.

[8] 陳秀琴. 鮑魚內(nèi)臟酶解蛋白質(zhì)制備抗氧化肽的研究[D]. 福州: 福建農(nóng)林大學(xué), 2013: 35-36.

[9] 蘇永昌, 劉淑集, 王茵, 等. 鮑魚內(nèi)臟多糖的提取及其抗氧化活性研究[J]. 吉林農(nóng)業(yè), 2010(10): 170-171.

[10] 何傳波, 邵杰, 魏好程, 等. 鮑內(nèi)臟蛋白肽抗氧化和免疫調(diào)節(jié)活性[J].食品科學(xué), 2018, 39(5): 206-212. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201805031.

[11] 程婷婷, 李冬梅, 劉娜, 等. 一種鮑魚臟器多糖的鑒定及活性研究[J]. 中國海洋藥物, 2008, 27(2): 9-13. DOI:10.3969/j.issn.1002-3461.2008.02.003.

[12] 朱莉莉, 孫黎明, 李冬梅, 等. 鮑魚內(nèi)臟蛋白多糖體內(nèi)對H22肝癌的抑制作用[J]. 營養(yǎng)學(xué)報, 2009, 31(5): 478-481; 485. DOI:10.3321/j.issn:0512-7955.2009.05.015.

[13] 王蒞莎, 朱蓓薇, 孫黎明, 等. 鮑魚內(nèi)臟多糖的體外抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性研究[J]. 大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2008, 27(4): 289-293.DOI:10.3969/j.issn.1674-1404.2008.04.001.

[14] 王姣, 魏好程, 何傳波, 等. 鮑內(nèi)臟酶解工藝條件的優(yōu)化[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報, 2015, 6(8): 3177-3185.

[15] 國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 國食藥監(jiān)?；痆2012]107號《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9 個保健功能評價方法的通知》[EB/OL]. (2012-04-23) [2017-07-18]. http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0847/71257.html.

[16] FINKEL T, HOLBROOK N J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing[J]. Nature, 2000, 408: 239-247.DOI:10.1038/35041687.

[17] 羅曉航. PEF結(jié)合酶法提取鮑魚臟器粗多糖及其抗氧化活性研究[D]. 福州: 福建農(nóng)林大學(xué), 2012: 60-61.

[18] 國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 食藥監(jiān)保化函[2012]470號關(guān)于征求修訂《增強免疫力功能評價方法(征求意見稿)》等意見的函[EB/OL]. (2012-11-02) [2017-07-18]. http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0782/75859.html.

[19] 劉志東, 郭本恒, 王蔭榆. 抗氧化活性檢測方法的研究進展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2008(3): 563-567. DOI:10.3969/j.issn.1001-6880.2008.03.045.

[20] 張文彬, 龔海英, 張麗, 等. 天然產(chǎn)物抗氧化活性體內(nèi)外評價方法[J].武警后勤學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2013, 22(11): 1035-1038.

[21] MURRY C E, JENNINGS R B, REIMER K A. Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium[J].Circulation, 1986, 74(5): 1124-1136.

[22] ZHANG Y C, ZHANG Q, LI H, et al. Prognostic factors for late mortality after liver transplantation for benign end-stage liver disease[J]. Chinese Medical Journal, 2011, 124(24): 4229-4235.

[23] 張靜麗, 王宏勛, 張雯, 等. 靈芝、枸杞多糖復(fù)合抗氧化作用[J]. 食品與機械, 2004, 20(6): 11-12; 46. DOI:10.3969/j.issn.1003-5788.2004.06.005.

[24] VOLPI N, TARUGI P. Influence of chondroitin sulfate charge density,sulfate group position, and molecular mass on Cu2+-mediated oxidation of human low-density lipoproteins: effect of normal human plasmaderived chondroitin sulfate[J]. Journal of Biochemistry, 1999, 125(2):297-304. DOI:10.1093/oxfordjournals.jbchem.a022286.

[25] ABE K, KIMURA H. The possible role of hydrogen sulfide as an endogenous neuromodulator[J]. The Journal of Neuroscience, 1996,16(3): 1066-1071.

[26] SAITO K, JIN D H, OGAWA T, et al. Antioxidative properties of tripeptide libraries prepared by the combinatorial chemistry[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2003, 51(12): 3668-3674.DOI:10.1021/jf021191n.

[27] DáVALOS A, MIGUEL M, BARTOLOMé B, et al. Antioxidant activity of peptides derived from egg white proteins by enzymatic hydrolysis[J]. Journal of Food Protection, 2004, 67(9): 1939-1944.DOI:10.4315/0362-028X-67.9.1939.

[28] 李曉梅, 鞠玉琳. 中藥“FH”對小鼠血清溶血素和淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響[J]. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報, 2005, 27(3): 197-200. DOI:10.3969/j.issn.1004-7999.2005.03.009.

[29] FIDLER I J, KLEINERMAN E S. Therapy of cancer metastasis by systemic activation of macrophages: from bench to the clinic[J]. Research in Immunology, 1993, 144: 284-287. DOI:10.1016/0923-2494(93)80109-C.

[30] ZHAI Li, ZHANG Peng, SUN Renyuan, et al. Cytoprotective effects of CSTMP, a novel stilbene derivative, against H2O2-induced oxidative stress inhuman endothelial cell[J]. Pharmacological Reports, 2011,63(6): 1469-1480. DOI:10.1016/S1734-1140(11)70711-3.

[31] 聶少平, 施曉丹. 食品加工技術(shù)對生物活性多糖結(jié)構(gòu)和功能特性的影響[J]. 中國食品學(xué)報, 2016, 16(11): 9-16. DOI:10.16429/j.1009-7848.2016.11.002.