尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療對(duì)急性缺血性腦卒中患者Chemerin、miR-128b表達(dá)的影響*

陳璐菡, 陳偉良

中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)海警總隊(duì)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(浙江嘉興 314000)

急性缺血性腦卒中在所有卒中患者中占比高達(dá)3/5以上，是最常見的致殘疾病[1-2]，其主要病因?yàn)槟X血管粥樣硬化、血栓致使腦組織血供不足[3]。急性缺血性腦卒中患者通常發(fā)病急、治療難度大、患者預(yù)后差，因此尋找一種安全有效的治療急性缺血性腦卒中的手段成為許多專家學(xué)者的主要研究方向[4-5]。尼麥角林具有擴(kuò)張血管、加強(qiáng)腦細(xì)胞代謝、改善腦功能的藥理作用[6]。阿替普酶具有溶解血栓的藥理作用，常用于腦血管疾病的治療[7]。本研究旨在探究?jī)烧呗?lián)合對(duì)急性缺血性腦卒中患者趨化素(Chemerin)、微小RNA-128b(Microrna-128b，miR-128b)表達(dá)的影響，觀察效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)數(shù)字表法將我院2019年7月至2021年7月收治的急性缺血性腦卒中198例患者分為對(duì)照組、觀察組各99例。對(duì)照組包括男57例，女42例，年齡60～71歲，平均(65.78±4.39)歲；體質(zhì)指數(shù)(BMI)21～28 kg/m2，平均(24.15±3.05)kg/m2；其中合并高血壓患者61例，合并冠心病患者23例。觀察組男49例，女50例，年齡61～72歲，平均(66.39±4.15)歲；BMI 21～27 kg/m2，平均(23.85±1.80)kg/m2；合并高血壓患者54例，合并冠心病患者24例。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究所有患者家屬均知情同意，獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[(2019)倫審第(56)號(hào)]。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)對(duì)缺血性腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，經(jīng)我院影像檢查確診，所有患者均于發(fā)病4 h內(nèi)入院就診，并接受阿替普酶溶栓治療，病歷資料齊全。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)尼麥角林、阿替普酶不耐受者；(2)腦出血、腦外傷患者；(3)腦組織惡性腫瘤者；(4)精神疾病患者；(5)未接受阿替普酶溶栓治療者。

剔除標(biāo)準(zhǔn)：(1)醫(yī)護(hù)工作依從性差者；(2)因其他原因退出本研究者。

1.2 治療方法 兩組患者均進(jìn)行吸氧、降低顱內(nèi)壓、改善微循環(huán)、控制血壓等常規(guī)治療。對(duì)照組患者使用阿替普酶治療：1 min內(nèi)靜脈推注阿替普酶0.9 mg/kg(最高劑量90 mg)，其余阿替普酶與100 mL 0.9%生理鹽水混合后靜脈滴注，時(shí)間1 h左右。觀察組患者使用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療：尼麥角林：2次/d，20 mg/次，于早晚飯后使用溫水吞服。兩組患者均連續(xù)治療14 d。

1.3 指標(biāo)觀察

1.3.1 生活能力、神經(jīng)功能評(píng)價(jià) 使用ADL評(píng)分表[9]評(píng)價(jià)患者日常生活能力，總分100分，評(píng)分越高表示日常生活能力越高。采用NIHSS評(píng)分表[10]評(píng)價(jià)患者神經(jīng)功能，總分42分，評(píng)分越低神經(jīng)功能損傷越輕。

1.3.2 IMT、斑塊面積、血液流變學(xué)水平檢測(cè) 對(duì)患者進(jìn)行頸動(dòng)脈彩超檢查，對(duì)比兩組治療前及治療結(jié)束1周后頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(carotid intima-media thickness，IMT)、頸動(dòng)脈斑塊面積變化情況，本研究中對(duì)患者進(jìn)行頸動(dòng)脈彩超檢查的醫(yī)生為課題專職醫(yī)生，檢查前經(jīng)過系統(tǒng)培訓(xùn)。取患者治療前、治療結(jié)束1周后靜脈血5 mL，離心處理(離心半徑10 cm，轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心時(shí)間15 min)后-50℃保存，血液流變動(dòng)態(tài)分析儀檢測(cè)全血高切黏度(HBV)、全血低切黏度(LBV)水平。

1.3.3 Toll樣受體4(Toll-like receptor 4，TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路蛋白、miR-128b表達(dá)檢測(cè) Western blot法檢測(cè)TLR4/NF-κB通路蛋白表達(dá)：待測(cè)標(biāo)本內(nèi)添加裂解液，提取蛋白后定量、變性、SDS-PAGE凝膠電泳、轉(zhuǎn)PVDF膜，室內(nèi)封閉2 h，添加一抗(1∶1 000)及內(nèi)參抗體(1∶2 000)孵育，1 d后TBST清洗3次，添加二抗(1∶5 000)孵育，2 h后清洗3次，顯色、曝光、成像，檢測(cè)TLR4、NF-κB p65表達(dá)。RT-PCR法檢測(cè)miR-128b表達(dá)：提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后擴(kuò)增處理。預(yù)變性處理10 min、變性處理10 s(95℃)，退火25 s(63℃)，延伸10 s(72℃)，進(jìn)行42個(gè)循環(huán)，2-ΔΔCt方法計(jì)算miR-128b表達(dá)量。

1.3.4 炎癥因子及Chemerin水平檢測(cè) 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清炎癥因子及Chemerin水平，酶標(biāo)分析儀檢測(cè)450 nm處吸光值，計(jì)算腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、Chemerin水平，檢測(cè)過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.5 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 按照顯效、有效、無效的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臨床療效進(jìn)行評(píng)價(jià)，顯效：臨床癥狀消失，NIHSS評(píng)分下降90%以上；有效：臨床癥狀改善，NIHSS評(píng)分下降18%～90%；無效：NIHSS評(píng)分下降幅度低于18%?？傆行?顯效率+有效率。

2 結(jié)果

2.1 兩組生活能力、神經(jīng)功能比較 本研究過程中并未出現(xiàn)剔除/脫落病例。治療前兩組ADL、NIHSS評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組ADL評(píng)分高于治療前，NIHSS評(píng)分低于治療前，且觀察組ADL評(píng)分高于對(duì)照組，NIHSS評(píng)分低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者生活能力、神經(jīng)功能比較 分

2.2 兩組IMT、斑塊面積對(duì)比 治療前兩組IMT、斑塊面積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組IMT、斑塊面積低于治療前，與對(duì)照組比較，觀察組IMT、斑塊面積較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組IMT、斑塊面積對(duì)比

2.3 兩組血液流變學(xué)變化比較 治療前兩組HBV、LBV水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組HBV、LBV水平低于治療前，且觀察組HBV、LBV水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血液流變學(xué)變化

2.4 兩組TLR4/NF-κB通路蛋白及下游炎癥因子水平變化 治療前兩組TLR4、NF-κB p65表達(dá)及TNF-α、IL-1β水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組TLR4、NF-κB p65表達(dá)及TNF-α、IL-1β水平低于治療前，且觀察組TLR4、NF-κB p65表達(dá)及TNF-α、IL-1β水平均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組TLR4/NF-κB通路蛋白、因子水平比較

2.5 兩組Chemerin、miR-128b表達(dá)水平變化 治療前兩組Chemerin、miR-128b表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組Chemerin、miR-128b表達(dá)水平低于治療前，且與對(duì)照組相比，觀察組Chemerin、miR-128b表達(dá)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表5 兩組Chemerin、miR-128b表達(dá)水平變化

2.6 兩組治療效果對(duì)比 與對(duì)照組比較，觀察組治療有效率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=8.342,P=0.003)。見表6。

表6 兩組治療有效率比較 例(%)

3 討論

急性缺血性腦卒中發(fā)生發(fā)展伴隨著機(jī)體腦組織神經(jīng)元細(xì)胞損傷，對(duì)患者日常生活能力、神經(jīng)功能造成嚴(yán)重影響[11]。有研究表示，急性缺血性腦卒中患者神經(jīng)功能出現(xiàn)異常，日常生活能力相對(duì)較差，對(duì)急性缺血性腦卒中患者進(jìn)行治療能夠減輕患者神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重程度，從而使患者日常生活能力得到改善[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療，急性缺血性腦卒中患者ADL評(píng)分上升、NIHSS評(píng)分下降，說明兩者聯(lián)合能夠減輕患者神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重程度，提升患者日常生活能力，有助于患者病情恢復(fù)、預(yù)后改善。其原因可能是，尼麥角林能夠擴(kuò)張腦組織血管，具有腦保護(hù)作用，阿替普酶能夠溶解血栓、改善腦血管供血狀況的作用，兩者聯(lián)合應(yīng)用可共同發(fā)揮腦保護(hù)作用，治療效果顯著。

頸動(dòng)脈斑塊形成在急性缺血性腦卒中癥狀發(fā)展過程中起到重要作用。缺血性腦卒中病情嚴(yán)重程度與血管斑塊密切相關(guān)，觀察血管斑塊、狹窄程度變化情況對(duì)患者病情狀況、臨床療效具有較高評(píng)估價(jià)值。有學(xué)者在研究中表示，減輕頸動(dòng)脈硬化嚴(yán)重程度，穩(wěn)定、減小動(dòng)脈硬化斑塊對(duì)急性缺血性腦卒中患者病情恢復(fù)、神經(jīng)功能提升、預(yù)后改善具有重要意義[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，使用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療，急性缺血性腦卒中患者IMT、斑塊面積明顯下降，說明兩者聯(lián)合能夠降低急性缺血性腦卒中患者IMT，使斑塊縮小、穩(wěn)定，有助于患者頸動(dòng)脈粥樣硬化改善，促進(jìn)患者病情恢復(fù)，從而發(fā)揮治療效果。

有學(xué)者在研究中表示，急性缺血性腦卒中發(fā)展與腦組織血液流變學(xué)狀況密切相關(guān)[14-15]。HBV、LBV為評(píng)價(jià)機(jī)體血液流變學(xué)的主要指標(biāo)，改善患者血液流變學(xué)，能夠緩解患者腦組織血凝狀況，從而發(fā)揮治療效果。本研究發(fā)現(xiàn)，使用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療，急性缺血性腦卒中患者HBV、LBV水平下降，說明兩者聯(lián)合能夠改善患者腦組織血液流變學(xué)，從而起到腦保護(hù)作用，其原因可能是，阿替普酶具有調(diào)節(jié)纖維蛋白溶解系統(tǒng)活性的藥理作用，應(yīng)用阿替普酶對(duì)急性缺血性腦卒中患者進(jìn)行治療，能夠改善患者腦血管供血狀況，緩解患者腦組織血液高凝狀況，發(fā)揮起到溶解血栓的作用。

急性缺血性腦卒中患者病情發(fā)展、嚴(yán)重程度與腦組織炎癥反應(yīng)狀況具有密切聯(lián)系，減輕腦組織炎癥反應(yīng)是促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)關(guān)鍵[16]。TLR4/NF-κB通路與炎癥反應(yīng)具有密切聯(lián)系，TNF-α、IL-1β均為TLR4/NF-κB通路下游炎癥因子，兩者水平變化與機(jī)體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。有學(xué)者在研究中表示，抑制急性缺血性腦卒中患者TLR4/NF-κB通路激活，能夠減輕炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度，從而減輕患者神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重程度[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，使用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療，急性缺血性腦卒中患者TLR4、NF-κB p65表達(dá)及TNF-α、IL-1β水平均明顯下降，說明兩者聯(lián)合能夠調(diào)控TLR4/NF-κB通路蛋白表達(dá)，抑制其下游炎癥因子水平，從而減輕患者神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重程度，治療效果顯著。

Chemerin主要形成于脂肪細(xì)胞，在缺血性腦卒中發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮促進(jìn)作用[18-19]。miR-128b在缺血性腦卒中呈異常高表達(dá)，檢測(cè)其表達(dá)對(duì)患者診斷、預(yù)后檢測(cè)具有較高的評(píng)估價(jià)值[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，使用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療，患者Chemerin、miR-128b表達(dá)水平下調(diào)，說明該治療方案能夠調(diào)控Chemerin、miR-128b表達(dá)水平，從而幫助患者病情恢復(fù)，治療效果顯著。

綜上所述，使用尼麥角林聯(lián)合阿替普酶治療，急性缺血性腦卒中患者生活能力、神經(jīng)功能提升，IMT、斑塊面積下降，血液流變學(xué)改善，炎癥反應(yīng)減輕，Chemerin、miR-128b表達(dá)受到調(diào)控，治療效果顯著，為急性缺血性腦卒中的臨床治療提供依據(jù)。

利益相關(guān)聲明：所有作者均聲明不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明：陳璐菡：數(shù)據(jù)整理、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、論文撰寫；陳偉良：研究指導(dǎo)、論文修改、經(jīng)費(fèi)支持。