懷古顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

林禹澎 姜英子 解生旭 徐雅娟

【摘 要】 目的：建立懷古顆粒的質(zhì)量控制方法。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法，色譜柱為安捷倫Eclipe XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-醋酸-水（36∶4∶64），流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm。結(jié)果：柚皮苷在0.061～0.427 mg范圍內(nèi)線性良好（r=0.999）;精密度實(shí)驗(yàn)RSD為0.85%;穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD為1.16%，重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)RSD為2.13%;平均加樣回收率為99.01%（RSD為4.41%）。結(jié)論：該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可用于懷古顆粒中柚皮苷含量的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】

懷古顆粒;質(zhì)量控制;柚皮苷;HPLC法;含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2022）08-0045-03

Toxicological Safety Evaluation of Huaigu Granules

LIN Yupeng1 JANG Yingzi1* XIE Shengxu2 XU Yajuan2

1.College of pharmacy， Yanbian University， Yanji 133002，China;

2.Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine， Changchun 130012 ，China

Abstract：

Objective Establishing a quality control method for huaigu granules. Methods HPLC wasused. Agilent Eclipse XDB-C18 column（4.6 mm×150 mm，5 μm）was used.The mobile phase was methanol-acetic acid-water（36∶4∶64）. The flow rate was 1 mL/min.Thecolumn temperature was 30 ℃ and the detection wavelength was 283 nm. Results Naringin was linear in the range of 0.061～0.427 mg（r=0.999）; RSD of precision testwas 0.85%; RSD of stability test was 1.16%， RSD of reproducibility test was 2.13%; Theaverage recovery was 99.01% （RSD was 4.41%）. Conclusion The method is simple，rapid and reproducible， and can be used for the determination of naringin in huaigu granules.

Key words：

Huaigu Granules; Quality Control; Naringin; HPLCMethod; Content Determination

懷古顆粒由骨碎補(bǔ)6g、山茱萸2.2g、懷牛膝2.2g、川芎1.2g、鹿茸0.16g五味藥材組成，具有增強(qiáng)骨密度，預(yù)防骨質(zhì)疏松保健功能。五味藥材作為骨傷科常用中藥，其在治療骨質(zhì)疏松癥方面的運(yùn)用已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可，為臨床治療骨質(zhì)疏松方劑中的常用藥物[1～6]。骨碎補(bǔ)為方中君藥，具有補(bǔ)腎強(qiáng)骨，治筋骨瘺軟之功效[7]，柚皮苷為其主要成分。研究采用HPLC高效液相色譜法測(cè)定懷古顆粒中柚皮苷的含量，為懷古顆粒的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-2010C高效液相色譜儀;FA2004B萬分之一天平;GA-425十萬分之一天平;KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 材料 懷古顆粒（廠家：北京海潤(rùn)德醫(yī)藥集團(tuán)有限公司;批號(hào)：20181201，20181202;20181203）對(duì)照品柚皮苷購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇購(gòu)自Fisher，為色譜純;水為雙蒸水自制;冰醋酸購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 采用安捷倫Eclipe XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-醋酸-水（36∶4∶64）;流速：1 mL/min;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm;進(jìn)樣量：10 μL;上述色譜條件下，柚皮苷對(duì)照品與其他組分峰分離度良好。色譜圖如圖1所示。因該顆粒所含成分較多，此條件下其他成分無法得到有效的分離，故在2～4 min有些許雜峰，其不影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.2 對(duì)照品溶液制備 取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0.305 mg的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取本品0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，密塞，超聲處理（功率300 W，頻率40 KHZ）30 min，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性及范圍 精密吸取上述對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12、14 μL，注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以柚皮苷進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示，結(jié)果顯示，柚皮苷含量在0.061～0.427 μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5 精密度考察 取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，精密吸取10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄柚皮苷峰面積。以積分峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差，反映儀器的精密度，計(jì)算其RSD值為0.85%，說明儀器精密度良好。5795460B-2C22-496F-B722-880663CF3290

2.6 穩(wěn)定性考察 根據(jù)2.3項(xiàng)下方法制得供試品溶液，分別于放置0、2、4、6、8、24 h后，精密吸取10 μL，進(jìn)樣，測(cè)定供試品中柚皮苷的峰面積值，計(jì)算RSD值為1.16%，表面柚皮苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性考察 稱取同一批供試品6份，每份精密稱定0.25 g，按2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積，計(jì)算柚皮苷的含量，得RSD值為2.13%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

2.8.1 對(duì)照品溶液的制備 同2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液的制備。

2.8.2 加樣對(duì)照品溶液制備 取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.32 mg的溶液，即得。

2.8.3 回收率供試品溶液制備 精密量取已知含量的供試品溶液0.125 g，共6份，分別精密加入加樣對(duì)照品溶液1 mL后，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。計(jì)算加樣回收率，結(jié)果為：柚皮苷的平均回收率為99.01%，RSD為4.41%。

3 討論

3.1 色譜柱考察 對(duì)不同型號(hào)的色譜柱進(jìn)行了考察，在SHIMADZU VP-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）;Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）;Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）三根色譜柱中，XDB-C18的保留時(shí)間最短為10.2 min，理論塔板數(shù)最大，為2888，故選用此柱。

3.2 流動(dòng)相考察 在甲醇-醋酸-水（35∶4∶65）的基礎(chǔ)上對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示以甲醇-醋酸-水（36∶4∶64）為流動(dòng)相時(shí)所得的供試品色譜圖峰型較好，且保留時(shí)間更短，理論塔板數(shù)最大，故選流動(dòng)相比例為甲醇-醋酸-水（36∶4∶64）。

3.3 提取方法考察 在懷古顆粒供試品溶液的制備中，考察了不同的提取方法，分別為甲醇超聲提取方法、乙醇超聲提取方法和甲醇加熱回流提取方法。三種提取方法測(cè)定的含量分別為2.584、2.425、2.537 mg/g，發(fā)現(xiàn)甲醇超聲提取方法柚皮苷損失較少，方法操作簡(jiǎn)便，故選用次提取方式。

3.4 方法學(xué)考察 由線性考察結(jié)果可知柚皮苷在含量為0.061～0.427 μg范圍內(nèi)線性良好，可作為懷古顆粒質(zhì)量控制的指標(biāo);精密度考察的RSD為0.85%，說明儀器精密度良好;重復(fù)性考察的RSD為2.13%，表面該含量測(cè)定方法重復(fù)性良好;穩(wěn)定性考察的RSD為1.16%，表面柚皮苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好;回收率實(shí)驗(yàn)的平均回收率為99.01%，RSD為4.41%，符合中華人民共和國(guó)藥典的要求。

4 結(jié)論

懷古顆粒中骨碎補(bǔ)主要含黃酮類、三萜類等成分[8];山茱萸主要含有環(huán)烯醚萜類、鞣質(zhì)等成分[9];懷牛膝主要含有甾酮類、生物堿等成分[10];川芎主要含有酚類、有機(jī)酸類等成分[11]。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示所建立的含量測(cè)定方法能有效地分離出柚皮苷成分，且所建立含量測(cè)定方法重現(xiàn)性、加樣回收率、精密度等均符合藥典規(guī)定，故將此方法用于懷古顆粒中柚皮苷的含量測(cè)定。

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（收稿日期：2021-04-02 編輯：劉 斌）5795460B-2C22-496F-B722-880663CF3290