阿爾泰冷蒿化學(xué)成分研究

李知瑾 鄭麗華 劉磊

【摘 要】 目的：對(duì)阿爾泰冷蒿的化學(xué)成分進(jìn)行研究。方法：利用液-液萃取、硅膠、葡聚糖凝膠、聚酰胺、大孔樹(shù)脂、重結(jié)晶等手段，提取分離得到了10個(gè)單體化合物，其后通過(guò)理化常數(shù)測(cè)定、波譜數(shù)據(jù)分析及文獻(xiàn)對(duì)照等手段鑒定了單體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，利用MTT方法對(duì)單體化合物進(jìn)行抗腫瘤活性的篩選。結(jié)果：從阿爾泰冷蒿中提取分離得到的化合物包括木栓酮（1）、豆甾-5-烯-3β，7α-二醇（2）、3，5-二羥基-6，7，3，4-四甲氧基黃酮（3）、蒿黃素（4）、苜蓿素（5） 、貓眼草酚D（6）、Roxbughianin B （7）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（8）、苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷（9）、苜蓿素-4-O-β-D-葡萄糖苷（10），其中3，5-二羥基-6，7，3，4-四甲氧基黃酮（3）對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2的IC50值為（34.58 ± 2.42）μg/mL。結(jié)論：從阿爾泰冷蒿中提取分離得到10個(gè)化合物。同時(shí)，首次對(duì)Roxbughianin B （7）的絕對(duì)構(gòu)型進(jìn)行解析。通過(guò)活性篩選發(fā)現(xiàn)，3，5-二羥基-6，7，3，4-四甲氧基黃酮（3）具有抗腫瘤活性。

【關(guān)鍵詞】

阿爾泰冷蒿;分離;鑒定;抗腫瘤

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2022）08-0038-07

Research on the Chemical Constituents of Artemisia frigida Willd. in Altay

LI Zhijin1，2 ZHENG Lihua1 LIU Lei1*

1.National Engineering Laboratory for Druggable Gene and Protein Screening， Northeast Normal University， Changchun 130024，China;

2.Xiamen Health and Medical Big Data Center （Xiamen Medicine Research Institute）/Xiamen Key Laboratory of Natural Medicine Research and Development， Xiamen 361008，China

Abstract：

Objective To study the chemical constituents of Artemisia frigida Willd.in Altay.Methods Using liquid-liquid extraction， polyamide column chromatography， Sephadex LH-20 column chromatography， silica gel column chromatography， macroporous resin column chromatography and recrystallization， isolated from the 10 compounds. Results They are identified by the methods of the basis physicochemcial propertyes， spectral analysis and comparison with literature data. Compounds were elucidated as： friedelin （1）;Stigmast-5-ene-3β，7α-diol （2）;3，5-dihydroxy-6，7，3，4-trtramethoxy flavone （3）; artemetin （4）;tricin （5）;chrysosplenol D （6）; Roxbughianin B （7）;luteolin-7-O-β-D-glucoside （8）; tricin-7-O-β-D-gluco-pyranoside（9）;tricin-4-O-β-D-glucopyranside （10）.The IC50 values of 3，5-dihydroxy-6，7，3，4-trtramethoxy flavone （3） was（34.58 ± 2.42）μg/mL.Conclusion We extracted and identified 10 compounds. There were all firstly obtained from Artemisia frigida Willd.At the same time， we firstly identified absolute configuration of Roxbughianin B （7）. 3，5-dihydroxy-6，7，3，4-trtramethoxy flavone （3） have antitumor activity.

Key words：Artemisia frigida Willd. in Altay;Isolation; Identification; Anti-tumor

冷蒿（Artemisia frigid Willd.）又名白蒿、小白蒿、阿給等，為菊科蒿屬（Compositae Artemisia Linn.）小灌木植物，具有芳香氣味，主要分布于青海、新疆、西藏等以及我國(guó)西北、華北、東北各省區(qū)，冷蒿是一種中藥材，也是藏族、蒙古族常用的一種民間藥材[1-3]。冷蒿在不同民族間都有應(yīng)用，中醫(yī)藥以地上部分入藥，蒙醫(yī)藥以全草或地上部分入藥，藏醫(yī)藥以地上部分入藥，中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥、民間醫(yī)藥主要利用冷蒿的地上部分入藥[4-7]，因此本研究選擇阿爾泰冷蒿地上部分作為原材料進(jìn)行研究。在蒙醫(yī)藥大師占布拉道爾吉編著的《無(wú)誤蒙藥鑒》、藏族經(jīng)典醫(yī)書(shū)《四部醫(yī)典》和《晶珠本草》中對(duì)冷蒿均有藥用記載，蒙藥中冷蒿主治出血、關(guān)節(jié)腫脹、腎熱等[5-6]，藏藥中冷蒿主治癰癤、肺病、腎病等[8]，中醫(yī)在治療上主治炎癥和驅(qū)蟲(chóng)等[4]。根據(jù)已有文獻(xiàn)[9-25]報(bào)導(dǎo)，冷蒿化學(xué)成分的研究中，涉及產(chǎn)地主要是我國(guó)內(nèi)蒙古自治區(qū)、青海省、河北省及加拿大，未見(jiàn)對(duì)于新疆地區(qū)阿爾泰冷蒿化學(xué)成分的研究，在已有研究中，冷蒿的化學(xué)成分主要有黃酮類化合物、倍半萜類化合物、苯丙素類化合物、酚類化合物等;對(duì)冷蒿的藥理作用現(xiàn)今也有很多研究，比如抗癌、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能、抗炎消腫等[2，9，12，26-27]。因此，本課題選擇阿爾泰冷蒿作為材料，對(duì)其化學(xué)成分及抗腫瘤活性進(jìn)行研究。冷蒿是蒿類植物在草原區(qū)分布最廣的植物[28]，阿爾泰冷蒿是生長(zhǎng)在阿爾泰地區(qū)的種子植物，其資源豐富，這證明阿爾泰冷蒿資源易于獲得。雖然阿爾泰地區(qū)的冷蒿資源豐富，但是其并未得到有效的利用，因此本課題組與新疆藥監(jiān)局合作，首次選用阿爾泰冷蒿作為原材料對(duì)其化學(xué)成分及抗腫瘤活性進(jìn)行研究，研究的意義在于為阿爾泰冷蒿的應(yīng)用提供前期的理論基礎(chǔ)。DC6A7ADE-C5E9-4CB5-B593-425448CF059F

1 材料與儀器

本實(shí)驗(yàn)藥材為阿爾泰冷蒿的地上部分，2011年秋季采集于新疆地區(qū)。由新疆藥監(jiān)局提供并鑒定此植物為菊科蒿屬（Compositae Artemisia Linn.）植物阿爾泰冷蒿（Artemisia frigid Willd.），室溫陰干，粉碎成粗粉。正己烷、石油醚（PE）、二氯甲烷（CHCl2）、氯仿（CHCl3）、乙酸乙酯（EtOAc）、甲醇（MeOH）、乙醇（EtOH）、丙酮（PA）、正丁醇（nBuOH）、吡啶（Py）、二甲基亞砜（DMSO）等試劑均為分析純，由北京化工廠生產(chǎn)。柱層析用聚酰胺（天津南開(kāi)化工廠）、Sephadex LH-20（Pharmacia公司）、硅膠（青島海洋化工廠）、大孔樹(shù)脂D101（天津光復(fù)）。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司），回流提取器（天津玻璃儀器廠），SHZ-D型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），ZK072B真空干燥型電熱真空干燥箱（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠）。BRUKER Ultra ShieldTM AV400MHzNMR超導(dǎo)核磁共振波譜儀（德國(guó)BRUKER公司），高效液相色譜儀（Aglient 1100），IP X-射線晶體衍射儀（Rigaku IIIA，日本理學(xué)株式會(huì)社）。人肝癌細(xì)胞系（HepG2細(xì)胞）購(gòu)于上海細(xì)胞庫(kù)。

2 提取分離

稱取7 kg干燥阿爾泰冷蒿地上部分粗粉，70%EtOH浸沒(méi)粗粉，回流提取2 h/次，共提取3次，隨后合并提取液，減壓濃縮得墨綠色浸膏，再懸浮于適量去離子水中，依次用與去離子水等體積的PE、EtOAc、水飽和的nBuOH各萃取3次，分別合并各萃取層，減壓濃縮得到萃取物。對(duì)石油醚層萃取物（136.0 g）、乙酸乙酯層萃取物（131.3 g）、水飽和的正丁醇層（436.0 g）進(jìn)行硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、葡聚糖凝膠柱層析、大孔樹(shù)脂柱層析、半制備高效液相色譜的系統(tǒng)分離，每個(gè)流份薄層色譜（TLC）或高效液相色譜（HPLC）跟蹤檢測(cè)，最終確定化合物的純度，得到化合物1～化合物10。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶，易溶于CHCl3，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， CDCl3）： δ1.001（3H，d，J=2.8 Hz） 29位的一個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，CDCl3）：δ213.19（C=O）， 59.48（C-10）， 58.23（C-4）， 53.10（C-8）， 42.79（C-18）， 42.14（C-5）， 41.52（C-2）， 41.29（C-6）， 39.69（C-14）， 39.25（C-22）， 38.29（C-13）， 37.44（C-9）， 36.00（C-11）， 35.62（C-16）， 35.34（C-19）， 35.01（C-29）， 32.77（C-15）， 32.42（C-21）， 32.08（C-28）， 31.77（C-30）， 30.50（C-17）， 29.99（C-12）， 28.16（C-20）， 22.27（C-1） ， 20.25（C-27）， 18.65（C-26）， 18.23（C-7）， 17.94（C-25）， 14.60（C-24）。上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[29]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物1鑒定為木栓酮。

化合物2：白色油狀，易溶于CHCl3，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， CDCl3）：δ3.60（1H，m）、3.85（1H，s）為連氧碳上的質(zhì)子信號(hào)，δ5.61（1H，s）為雙鍵碳上的質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，CDCl3）：δ146.23（C-5）， 123.87（C-6）， 71.36（C-3）， 65.35（C-7）， 55.71 （C-17）， 49.42（C-14）， 45.83（C-24）， 42.26（C-9），42.30（C-13）， 42.00（C-4）， 39.17（C-12），37.51（C-8）， 37.00（C-1）， 37.40（C-10）， 36.10（C-20），33.91（C-22）， δ31.38（C-2）， 25.92（C-23）， 28.27（C-16），24.29（C-15）， 29.12（C-25）， 23.06（C-28），20.70（C-11），18.79（C-27）， 19.79（C-26）， 19.02（C-21）， 18.24（C-19），12.06（C-29）， 11.71（C-18），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[30-31]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，因此鑒定化合物2為豆甾-5-烯-3β，7α-二醇。

化合物3：黃色粉末，易溶于CHCl3、DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， CDCl3）：δ7.71（1H，s）、7.66（1H，dd）、7.04（1H，d，J=8.40Hz）、6.50（1H，s）為黃酮骨架結(jié)構(gòu)上2、6、5、8位的質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，CDCl3）：δ178.90（C-4）， 158.78（C-7）， 155.95（C-2）， 152.79（C-5）， 152.32 （C-9）， 148.35（C-4）， 146.36（C-3）， 138.71（C-3）， 122.61（C-6）， 122.48（C-1）， 114.59（C-5），110.93（C-2）， 106.60（C-10）， 90.33（C-8）， 60.90（-OCH3），60.18（-OCH3）， 56.33（-OCH3）， 56.14（-OCH3），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[32]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物3鑒定為3，5-二羥基-6，7，3，4-四甲氧基黃酮。

化合物4：黃色結(jié)晶，易溶于CHCl3、DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖3。1H NMR （400MHz， CDCl3）： δ7.74（1H，dd）、7.69（1H，d，J=1.6Hz）、6.99（1H，d，J=8.4Hz）、6.51（1H，s）為黃酮骨架結(jié)構(gòu)上2、6、3、8位的質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，CDCl3）：δ178.89（C-4）， 158.78（C-7）， 155.87（C-2）， 152.79（C-5）， 152.32 （C-9）， 151.41（C-4）， 148.80（C-5）， 138.84（C-3）， 132.23（C-6）， 122.93（C-6）， 122.15（C-1），111.31（C-2）， 110.87（C-3）， 90.33（C-8）， 60.89（-OCH3），60.20（-OCH3）， 56.33（-OCH3）， 56.10（-OCH3） ， 56.01（-OCH3），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[33]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物4鑒定為蒿黃素。DC6A7ADE-C5E9-4CB5-B593-425448CF059F

化合物5：黃色粉末，易溶于DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， DMSO-d6）：δ12.96（1H，s）為黃酮5位羥基質(zhì)子信號(hào)，δ7.33（2H，s）、6.99（1H，s）、6.56（1H，s）、6.20（1H，s）為黃酮骨架芳香環(huán)上的質(zhì)子信號(hào)，δ10.79（1H，s）、9.31（1H，s）為兩個(gè)羥基的質(zhì)子。13C NMR（100Hz，DMSO-d6）：δ181.77（C-4）， 164.09（C-2）， 163.62（C-7）， 161.37（C-5）， 157.30 （C-9）， 148.15（C-3、C-5）， 139.83（C-4）， 120.35（C-1）， 104.36（C-2、C-6）， 103.70（C-3）， 103.56（C-10），98.78（C-6）， 94.15（C-8）， 56.34（2個(gè)-OCH3），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[34]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物5鑒定為苜蓿素。

化合物6：黃色油狀，易溶于MeOH、DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （500MHz， DMSO-d6）：δ7.52（1H，d，J=5.0Hz）、7.44（1H，dd）、6.84 （1H，d，J=15.0 Hz）、6.80（1H，s）為黃酮骨架芳香環(huán)質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，DMSO-d6）：δ178.13（C-4）， 158.56（C-7）， 156.06（C-2）， 149.41（C-5，C-9，C-4）， 145.40 （C-3）， 137.53（C-3）， 131.54（C-6）， 120.71（C-1，C-6）， 115.65（C-5）， 115.28（C-2）， 105.49（C-10）， 91.24（C-8），60.02（-OCH3），59.59（-OCH3）， 56.44（-OCH3），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[35-36]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物6鑒定為貓眼草酚D 。

化合物7：無(wú)色結(jié)晶，易溶于MeOH、DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400 MHz， MeOD）：δ6.00（1H，d， J=5.84Hz）、5.88（1H，d， J=5.84 Hz）為一組烯基質(zhì)子信號(hào)，δ4.93與氘代甲醇試劑峰重疊為化合物上6位質(zhì)子信號(hào)，化學(xué)位移值在3.00以下的均為此化合物的烷基取代基團(tuán)。13C NMR（100Hz，MeOD）：δ183.46（C-12）， 140.48（C-3）， 138.57（C-2）， 90.03（C-1）， 84.55（C-6）， 81.07（C-4）， 76.13（C-10）， 66.24（C-5）， 41.75（C-7）， 41.10（C-11）， 36.95（C-9），28.77（C-14）， 26.32（C-15）， 24.04（C-8）， 11.22（C-13）。HMBC（MeOD）：C、H的遠(yuǎn)程相關(guān)，清楚地給出C、H的遠(yuǎn)程相關(guān)關(guān)系。通過(guò)HMQC（MeOD）波譜給出的信息可以得出以下結(jié)論，此化合物的2、3、5、6、7、8、9、11、13、14、15位上直接相連的C、H有相關(guān)，如圖2所示。上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[37]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，并用SHELXTL軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析通過(guò)對(duì)化合物結(jié)構(gòu)的調(diào)整使得Goof值接近1，證明此化合物單晶衍射所得到的結(jié)果符合此化合物的絕對(duì)構(gòu)型，如圖3所示。因此認(rèn)為化合物7是Roxbughianin B。

化合物8：黃色粉末，易溶于DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， DMSO-d6）： δ7.46（1H，d， J=8.48 Hz）、6.91（1H，d，J=8.24Hz）為黃酮骨架結(jié)構(gòu)上2和6位的芳香環(huán)上的質(zhì)子信號(hào)，δ4.60-δ5.39之間為與黃酮相連的葡萄糖質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，DMSO-d6）：δ181.87（C-4）， 164.45（C-2）， 162.93（C-7）， 161.12（C-9）， 156.93 （C-5）， 149.92（C-3）， 145.77（C-4）， 121.35（C-6）， 119.15（C-1）， 113.55（C-2）， 105.32（C-10），103.15（C-3）， 99.87（C-1） ， 99.52（C-6）， 94.70（C-8）， 77.15（C-5”）， 76.38（C-3”）， 73.10（C-2”），69.53（C-4”）， 60.60（C-6”），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[38]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物8鑒定為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物9：黃色粉末，易溶于DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， DMSO-d6）：δ12.95（1H，s）和δ9.36（1H，s）為黃酮上羥基質(zhì)子信號(hào)，δ7.36（2H，s）、7.08（1H，s）、6.94（1H，s）、6.46（1H，s）、6.44（1H，s）為黃酮骨架芳香環(huán)上的質(zhì)子信號(hào)，δ4.64-δ5.39之間為與黃酮相連的葡萄糖質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，100MHz， DMSO-d6）：δ182.05（C-4）， 164.09（C-2，C-4）， 162.99（C-7）， 161.06（C-9）， 156.85（C-5）， 148.19（C-3，5）， 140.04（C-1）， 120.16（C-10）， 104.48（C-2，6）， 103.77（C-3）， 100.12（C-1），99.48（C-6）， 95.29（C-8） ， 77.34（C-5”）， 76.47（C-3”）， 73.12（C-2”）， 69.62（C-4）， 60.61（C-6”）， 56.35（2個(gè)-OCH3），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[39-40]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物9鑒定為苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷。DC6A7ADE-C5E9-4CB5-B593-425448CF059F

化合物10：黃色粉末，易溶于DMSO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。1H NMR （400MHz， DMSO-d6）：δ7.33（2H，s）、7.05（1H，s）、6.57（1H，s）、6.21（1H，s）為黃酮骨架芳香環(huán)上的質(zhì)子信號(hào)，δ4.33-δ5.14之間為與黃酮相連的葡萄糖質(zhì)子信號(hào)。13C NMR（100Hz，DMSO-d6）：δ181.90（C-4）， 164.36 （C-2）， 163.01（C-7）， 161.40（C-9）， 157.42（C-5）， 152.89（C-4）， 137.57（C-1）， 125.72（C-10）， 104.95（C-2，6）， 103.84（C-3）， 101.95（C-1），98.95（C-6）， 94.32（C-8） ， 77.41（C-5”）， 76.62（C-3”）， 74.16（C-2”）， 69.88（C-4”）， 60.79（C-6”）， 56.73（2個(gè)-OCH3），上述核磁共振波譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)[41]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，化合物10鑒定為苜蓿素-4-O-β-D-葡萄糖苷。

4 抗腫瘤活性

由于本實(shí)驗(yàn)從阿爾泰冷蒿中提取分離得到的化合物主要包括黃酮類化合物和倍半萜類化合物，有文獻(xiàn)報(bào)道顯示黃酮類化合物和倍半萜類化合物具有較好的抗腫瘤活性，因此本實(shí)驗(yàn)選擇對(duì)阿爾泰冷蒿中提取分離得到的化合物進(jìn)行抗腫瘤活性研究。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞HepG2接種在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，分別加入0.1、1、10、100 μg/mL不同濃度的藥物（用DMSO將化合物配制成10 mg/mL的母液，再用含有3%血清的細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行逐級(jí)稀釋），每孔為100 μL。藥物作用48 h后，每孔加入20 μL 2.5 mg/mL MTT溶液，在恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，之后棄上清，每孔加入100 μL DMSO，使用微量震動(dòng)器震動(dòng)10 min之后用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)OD490值。對(duì)以上10個(gè)化合物進(jìn)行抗腫瘤活性的初步篩選，結(jié)果顯示化合物2、化合物3、化合物7的IC50值分別為（78.54± 20.51 ）μg/mL、（34.58± 2.42） μg/mL 、（149.52± 7.09）μg/mL ，化合物4和化合物8的 IC50值均大于200 μg/mL ，化合物1、化合物5、化合物6、化合物9、化合物10由于在檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)有藥物在細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)析出，因此數(shù)據(jù)不可信。

5 討論

本論文對(duì)阿爾泰冷蒿地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行研究，對(duì)其70%乙醇提取物的石油醚萃取層、乙酸乙酯萃取層、水飽和的正丁醇萃取層混合物進(jìn)行分離，經(jīng)鑒定得到10個(gè)單體化合物，其中7個(gè)黃酮類化合物、2個(gè)甾體類化合物和1個(gè)倍半萜類化合物，并首次解析化合物7Roxbughianin B的絕對(duì)構(gòu)型。通過(guò)文獻(xiàn)查閱可知，蒿屬植物中含有大量的黃酮類化合物 [42]和倍半萜類化合物[43]，其中從黃蒿中提取分離得到的青蒿素即為倍半萜類化合物的典型代表。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，阿爾泰冷蒿中提取分離得到的蒿黃素（4230 mg）和Roxbughianin B（174 mg）含量較其他成分略多。根據(jù)文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)，至今僅有一篇文獻(xiàn)[44]在灰苞蒿中提取的到Roxbughianin B，主要提取分離流程分為四步，利用甲醇提取，乙酸乙酯萃取，兩次硅膠柱色譜分離得到 Roxbughianin B（6 mg），對(duì)比已有文獻(xiàn)的提取分離方法可知，本實(shí)驗(yàn)對(duì)Roxbughianin B的提取分離流程更為簡(jiǎn)單并且提取率更高，即阿爾泰冷蒿提取分離Roxbughianin B得步驟為三步，70%乙醇提取，乙酸乙酯萃取，一次硅膠柱色譜分離得到Roxbughianin B（174 mg）。因此，以上結(jié)果就為蒿黃素和Roxbughianin B的來(lái)源提供了新思路。

冷蒿的藥理作用方面，有文獻(xiàn)[12]研究顯示冷蒿總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化能力，本課題通過(guò)抗腫瘤活性篩選發(fā)現(xiàn)，3，5-二羥基-6，7，3，4-四甲氧基黃酮（3）對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2有較好的抑制作用，3，5-二羥基-6，7，3，4-四甲氧基黃酮是一種黃酮類化合物，在此前的研究中并未發(fā)現(xiàn)冷蒿中黃酮類化合物具有抗腫瘤活性。然而，本實(shí)驗(yàn)提取分離得到的倍半萜類化合物Roxbughianin B對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的抑制作用效果不佳，根據(jù)之前的文獻(xiàn)報(bào)道，從冷蒿中提取分離的倍半萜類化合物具有較好的抗腫瘤活性，其中包括去氫-姜黃烯、二氫去氫木香內(nèi)酯對(duì)人子宮頸腫瘤細(xì)胞、人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞和人黑色素瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)均有影響[9]。從本研究的結(jié)果可知，阿爾泰冷蒿的化學(xué)成分研究還有很大的空間，因此對(duì)于阿爾泰冷蒿的研究還應(yīng)繼續(xù)，對(duì)其化學(xué)成分的深度挖掘?qū)?duì)阿爾泰冷蒿的應(yīng)用提供前期的理論基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2021-09-01 編輯：劉 斌）DC6A7ADE-C5E9-4CB5-B593-425448CF059F