六種殺菌劑對哈茨木霉菌絲生長影響研究

曹秀榮 董照鋒 任崗 熊瀟垚 鵬 徐艷

摘 ? 要 ? 哈茨木霉極易侵染香菇、平菇、雙孢菇、杏鮑菇、茶樹菇、毛木耳、靈芝等多種食用菌的培養(yǎng)基質(zhì)、菌種、菌絲和子實體，造成減產(chǎn)甚至絕收。采用菌絲生長速率法分別測定戊唑醇、枯草芽孢桿菌、四霉素、春雷霉素、多抗霉素、多菌靈對哈茨木霉菌絲的抑制作用。結(jié)果表明，戊唑醇抑制作用最強，其次是枯草芽孢桿菌、多菌靈和四霉素，春雷霉素和多抗霉素抑制作用相對較弱。故而戊唑醇和枯草芽孢桿菌不能與哈茨木霉混合使用，多菌靈和四霉素不建議與哈茨木霉混合使用，春雷霉素和多抗霉素可與哈茨木霉聯(lián)合使用以增強防效。戊唑醇、枯草芽孢桿菌、多菌靈和四霉素對哈茨木霉抑制作用明顯，可就其對木霉病害防治展開進一步研究。

關(guān)鍵詞 ? 殺菌劑;哈茨木霉;抑菌率

木霉（Trichoderma spp.） 是廣泛分布于土壤、植物殘體、植物根圍和葉圍、海洋以及空氣等環(huán)境中的一類真菌，對多種細菌和病原真菌有拮抗作用，已被作為生防制劑廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。但木霉也因具有適應(yīng)性強、繁殖速度快、為害期長等特性，極易侵染香菇、平菇、雙孢菇、杏鮑菇、茶樹菇、毛木耳和靈芝等多種食用菌的培養(yǎng)基質(zhì)、菌種、菌絲和子實體，造成減產(chǎn)甚至絕收，為食用菌生產(chǎn)中的第一大競爭性雜菌。其中，綠色木霉（Trichoderma viride）與哈茨木霉（Trichoderma harzianum）是相對優(yōu)勢菌種。

我們研究了戊唑醇、枯草芽孢桿菌、四霉素、春雷霉素、多抗霉素、多菌靈6種殺菌劑對哈茨木霉菌絲生長的影響，以期為哈茨木霉作為生防菌應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)時如何協(xié)調(diào)與生物防治、化學(xué)防治的矛盾，以及其作為食用菌生產(chǎn)中的競爭性雜菌時如何選擇防治藥劑提供 參考。

1 ? 材料與方法

1.1 ? 試驗材料

1）供試藥劑。430 g/L戊唑醇懸浮劑，鹽城利民農(nóng)化有限公司生產(chǎn);100億芽孢/g枯草芽孢桿菌粉劑，陜西綠頓作物科技有限公司生產(chǎn);0.15%四霉素水劑，遼寧微科生物工程股份有限公司生產(chǎn);2%春雷霉素水劑，績溪農(nóng)華生物科技有限公司生產(chǎn);3%多抗霉素水劑，績溪農(nóng)華生物科技有限公司生產(chǎn);40%多菌靈懸浮劑，江蘇劍牌農(nóng)化股份有限公司。以上材料均為市售。

2）供試培養(yǎng)基。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：無菌水1 000 mL，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g。

3）供試菌種。供試的哈茨木霉菌株（Trichoderma harzianum），來源于2021年3月3日從商洛盛澤農(nóng)林科技發(fā)展有限公司香菇基地采回的染病香菇菌棒，經(jīng)實驗室分離鑒定后，接種到PDA試管斜面培養(yǎng)基，于4 ℃條件下保存。

1.2 ? 試驗方法

1）試驗設(shè)計。采用菌絲生長速率法，測定6種供試藥劑對哈茨木霉菌絲的抑制作用。試驗設(shè)7個處理，每個處理4次重復(fù)，各處理濃度依據(jù)使用說明推薦用量確定，無菌水作對照。如表1所示。

2）含藥PDA平板制備。將供試藥劑用滅菌水稀釋至設(shè)計濃度的10倍，編號后備用。取6 mL稀釋好的藥液注入100 mL經(jīng)過滅菌處理的燒杯中，再加入經(jīng)高壓蒸汽滅菌并冷卻至50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基54 mL，充分混勻，制成60 mL設(shè)計濃度的含藥培養(yǎng)基（為防止培養(yǎng)基過快冷凝而影響試驗進程，每個處理多配制20 mL），然后取10 mL注入經(jīng)過滅菌處理的9 cm培養(yǎng)皿中，制成試驗設(shè)計濃度的PDA平板。以無菌水替代藥液，同上述方法制作空白對照。

3）菌絲接種。將哈茨木霉菌接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，在溫度28 ℃、濕度90%條件下培養(yǎng)4天，活化菌種。在一培養(yǎng)皿內(nèi)菌落生長均勻、旺盛的同一半徑處用打孔器制作直徑6 mm的菌餅，用接種針挑取菌餅正面向下轉(zhuǎn)接種到各處理PDA平板培養(yǎng)基中心位置，置于溫度28 ℃、濕度90%條件下培養(yǎng)，分別于48小時、72小時、96小時用十字交叉法測量各皿菌落直徑，并按下試計算菌絲生長抑制率：

2 ? 結(jié)果與分析

從表2、圖1可知：依據(jù)使用說明推薦的田間劑量濃度下，6種殺菌劑對哈茨木霉菌絲96小時抑制率由大到小排序為：戊唑醇>枯草芽孢桿菌>四霉素>多菌靈>春雷霉素>多抗霉素。戊唑醇抑制效果最好，48小時、72小時、96小時抑制率均達到98%以上，呈逐漸增大趨勢;枯草芽孢桿菌抑制率略低于戊唑醇，48小時、72小時、96小時抑制率均達到92%以上，72小時達到最高，72～96小時基本穩(wěn)定;春雷霉素和多抗霉素48小時、72小時、96小時抑制率均低于20%，96小時抑制率分別為6.3%和4.4%;多菌靈和四霉素抑制率處于中等水平，96小時抑制率分別為58.4%和50.1%。

3 ? 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，在推薦的田間劑量下，春雷霉素和多抗霉素對哈茨木霉菌菌絲生長抑制作用較小，96小時抑制率分別為6.3%、4.4%;四霉素和多菌靈對哈茨木霉菌絲96小時抑制率分別為58.4%、50.1%，抑制作用明顯;戊唑醇和枯草芽孢桿菌對哈茨木霉菌絲有顯著的抑制作用，96小時抑制率分別達到99.4%、94.6%。

由以上結(jié)果得出，6種殺菌劑中，能與哈茨木霉配伍，增強防治效果的藥劑為春雷霉素和多抗霉素，不建議與哈茨木霉配伍的藥劑為四霉素和多菌靈，堅決禁止與哈茨木霉配伍的藥劑為戊唑醇和枯草芽孢桿菌。由于戊唑醇和枯草芽孢桿菌對哈茨木霉抑制作用顯著，可在進一步研究其對食用菌菌絲生長影響的基礎(chǔ)上，確定其可否適用于食用菌木霉病害防治。

參考文獻

[1] 馬賽，宋雨萌，羅蘭.哈茨木霉菌對大白菜的促生作用及對根腫病的防治效果[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，52（5）：110-112.

[2] 王進忠，郝立東，尚巧霞，等.6種常用殺菌劑對木霉菌生長發(fā)育的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2005（06）：308-311.

[3] 徐同，鐘靜萍，李德葆.木霉對土傳病原真菌的拮抗作用[J].植物病理學(xué)報，1993（1）：65-69.

[4] 張公杰，李東明.木霉病的研究現(xiàn)狀[J].菌物學(xué)報，2019，38（8）：1 287-1 297.

[5] 吳曉金.食用菌栽培相關(guān)木霉的調(diào)查和分析[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2008.

[6] 顏一紅.食用菌木霉種類鑒定及木霉、疣孢霉防治研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2011.

[7] Gangzheng Wang，et al.Diversity and Patho-genicity of Trichoderma spp.are associated with Green Mold Disease of spp.are associated with Green Mold Lentinula edodes in China[A].中國菌物學(xué)會.中國菌物學(xué)會2016年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C].中國菌物學(xué)會：中國菌物學(xué)會，2016：71

[8] 楊武，王威，向世海，等.一株食用菌綠霉病菌拮抗菌株的分離與鑒定[J].中國食用菌，2020，39（1）：55-60.

[9] Park Myung Soo，Bae Kyung Sook，Yu Seung Hun.韓國平菇菇床上流行的木霉分離物的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)分析（英文）[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004（01）： 157-164.

[10] 馬林，曲紹軒，王曉強，等.食用菌木霉的生防細菌鑒定及相關(guān)基因功能預(yù)測[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2016，32（3）：528-533.

[11] 馬志強，牛芳勝，畢秋艷.一種評價哈茨木霉菌與化學(xué)農(nóng)藥聯(lián)合增效作用的方法[J].農(nóng)藥，2013，52（12）：921-923.

[12] 王鳴華，沈慧敏，周小毛.植物化學(xué)保護實驗[M].北京： 北京大學(xué)出版社，2014：113-115.

[13] 張鉉哲，冉隆賢，李永剛，等.植物病理學(xué)研究技術(shù)[M].北京：北京大學(xué)出版社，2015：147-148.

[14] 董照鋒，熊瀟垚，陳光華.不同濃度殺菌劑對茶云紋葉枯病菌抑制作用[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，40（01）：6-10.

[15] 董照鋒.茶輪斑病體外抑制試驗及大田防治效果[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，39（01）：13-20.