靈芝三萜類化合物提取純化及生物活性研究進(jìn)展

徐 瑤，徐樹來(lái), ，劉志彬，祝嗣臣

（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150076；2.黑龍江省普通高校食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150076；3.黑龍江坤健農(nóng)業(yè)股份有限公司，黑龍江齊齊哈爾 161200）

靈芝（Ganoderma）為擔(dān)子菌亞門、層菌綱、多孔菌科、靈芝屬，長(zhǎng)期以來(lái)靈芝被視為滋補(bǔ)強(qiáng)壯、固本扶正的珍奇中草藥，作為保健養(yǎng)生的珍品，常常被用于預(yù)防疾病、增強(qiáng)身體抵抗力、提高機(jī)體靈活度，具有延年益壽的功效[1]。靈芝中含有多種生物活性物質(zhì)，到目前為止，已從其中鑒定出的靈芝三萜類化合物的種類達(dá)300 多種[2]，主要活性化學(xué)成分有三萜類、多糖類、有機(jī)酸、生物堿、氨基酸和礦物質(zhì)等，其中，三萜化合物是靈芝中最重要的生物活性成分之一。

靈芝屬植物主要有赤靈芝、清靈芝、黃靈芝、紫芝、白靈芝和黑靈芝等，是預(yù)防和治療癌癥的潛在候選藥物，其中，三萜類化合物是主要的生物活性成分。因此，靈芝三萜化合物作為藥品和各種保健品的重要成分引起了廣泛關(guān)注[3?4]。然而，由于培養(yǎng)條件、品種、生長(zhǎng)期的不同，以及提取及分離純化方法的不同，其三萜類化合物的含量及提取率不同，且對(duì)其生物活性也有不同的影響。因此，對(duì)靈芝三萜類化合物的提取分離純化方法及其生物活性進(jìn)行綜述研究具有重要意義?；谏鲜霰尘?，本文綜述了靈芝三萜類化合物的主要提取、分離純化技術(shù)方法，及其生物活性應(yīng)用的研究進(jìn)展，以期為靈芝三萜類化合物的研究及應(yīng)用開發(fā)提供相應(yīng)的參考。

1 三萜化合物提取方法研究進(jìn)展

1.1 有機(jī)溶劑提取法

靈芝三萜類化合物結(jié)構(gòu)相似，根據(jù)相似相溶原理，通常采用甲醇或乙醇等有機(jī)溶劑提取。RUAN等[5]以無(wú)水乙醇為提取溶劑，采用響應(yīng)曲面法優(yōu)化靈芝三萜類的提取條件為溫度60 ℃，時(shí)間6 h，三萜中靈芝酸提取得率由0.88 mg/g 提高到2.09 mg/g。侯敏娜等[6]采用95%乙醇3 次回流提取，優(yōu)化后該品種粗提物中靈芝總?cè)坪繛?.07%。陳德力等[7]用傳統(tǒng)氯仿加熱回流提取三萜，測(cè)得彎柄靈芝三萜提取得率為（0.42%±0.08%），而以60%甲醇（氯仿-甲醇）混合液為溶劑，提取溫度180 ℃，靜態(tài)提取2 次，每次12 min 的加速溶劑萃取法，彎柄靈芝總?cè)铺崛〉寐蕿椋?.14%±0.18%）。上述不同學(xué)者的研究結(jié)果表明，盡管同樣采用有機(jī)溶劑提取法，但采用的不同溶劑，其提取得率也有較大差異，這是由于靈芝三萜在不同溶劑中的溶出率存在一定的差異，另一方面，其提取參數(shù)條件、重復(fù)提取次數(shù)、原料品種及部位的不同，均會(huì)對(duì)提取得率有一定的影響。

1.2 超聲波輔助提取

超聲波是一種高頻振蕩波，該法是利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)而產(chǎn)生的空化效應(yīng)及攪拌等作用，破壞細(xì)胞壁，以促進(jìn)活性物質(zhì)溶出的速度，從而提高活性物質(zhì)的提取得率。ZHENG 等[8]在超聲功率210 W、提取時(shí)間100 min 的最佳工藝條件下，測(cè)得三萜得率達(dá)到0.38%。康同輝等[9]以85%乙醇為溶劑，超聲時(shí)間15 min，最佳超聲輔助提取工藝條件下，靈芝三萜得率為2.19%。賈瑞博等[10]以樹舌靈芝為原料，通過(guò)響應(yīng)面進(jìn)行分析，通過(guò)最優(yōu)工藝優(yōu)化，其總?cè)频钠骄崛〉寐蕿?.75%。超聲輔助提取與有機(jī)溶劑提取法相比縮短了提取時(shí)間、提高了提取效率和提取得率。

1.3 酶輔助提取

酶法是通過(guò)酶解破壞細(xì)胞壁的致密構(gòu)造，減小細(xì)胞壁及細(xì)胞間的傳質(zhì)屏障對(duì)有效成分從胞內(nèi)向提取介質(zhì)擴(kuò)散的傳質(zhì)阻力[11]，從而有利于有效成分的溶出。劉曉燕等[12]通過(guò)對(duì)纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶不同添加比例的研究，優(yōu)化靈芝三萜的最佳提取工藝條件為酶解時(shí)間80 min、提取pH 為5、酶解溫度50 ℃，測(cè)得菌草靈芝總?cè)频寐蕿?.99%。丁霄霄等[13]用纖維素酶、半纖維素酶、木瓜蛋白酶組成的復(fù)合酶解處理后的原料繼續(xù)用無(wú)水乙醇80 ℃水浴回流提取2 h，在此條件下靈芝總?cè)频奶崛〉寐蕿椋?.29%±0.04%）。該提取技術(shù)方法不僅能夠保持天然產(chǎn)物的構(gòu)象，不破壞其立體結(jié)構(gòu)和生物活性，還具有快速、高效、專一、反應(yīng)條件溫和且污染較小等優(yōu)點(diǎn)，具有較高的應(yīng)用推廣價(jià)值。

1.4 微波輔助提取

微波是目前天然產(chǎn)物提取的重要輔助手段之一，具有選擇性強(qiáng)、耗時(shí)少、能耗低、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，其高頻電磁波能夠穿透靈芝致密的外層結(jié)構(gòu)而迅速到達(dá)內(nèi)部，并能夠破壞細(xì)胞壁而促使細(xì)胞內(nèi)容物的釋出，可有效提高提取率。CHEN 等[14]采用微波輔助提取靈芝總?cè)?，得率?.968%。并與常規(guī)提取法進(jìn)行對(duì)比，得出微波輔助不僅縮短時(shí)間還提高了提取得率。林倩倩等[15]在最佳微波提取條件下，測(cè)得三萜類化合物的平均提取得率為0.748%。簣霄云等[16]研究了靈芝三萜類化合物的微波提取法，在最優(yōu)條件下靈芝三萜一次提取率可達(dá)93%，提取率均高于超聲輔助提取法、回流法和常規(guī)浸提法，通過(guò)與其他提法方法的對(duì)比分析得出，微波輔助提取法具有試劑用量少、加熱速度快、提取率高等特點(diǎn)，較適合靈芝三萜化合物的提取。

1.5 超臨界CO2萃取

超臨界CO2萃取技術(shù)是一種新型綠色萃取、分離和純化技術(shù)。王杉等[17]用超臨界CO2萃取菌草靈芝，在萃取壓力28 MPa，萃取溫度45 ℃，萃取時(shí)間2.5 h，CO2流量為35 kg/h 的條件下，得到粗提物中三萜類物質(zhì)含量為30.25%。華正根等[18]的研究結(jié)果表明：采用高壓超臨界CO2提取，靈芝三萜含量為1.35%，而采用乙醇回流提取法提取的靈芝三萜含量?jī)H為0.92%，提取物中三萜不僅含量高，而且成分種類多。因此，高壓超臨界CO2提取法具有得率高、提取溫度低、無(wú)化學(xué)溶劑消耗和殘留、能耗低、易回收、提取時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，較適合靈芝三萜的提取，但也有設(shè)備要求高、提取成本高等不足。

2 靈芝三萜的分離純化研究進(jìn)展

根據(jù)三萜類化合物的物理化學(xué)性質(zhì)，在分離過(guò)程中普遍采用的分離方法為色譜法，包括高效液相色譜（HPLC）、柱層析、薄層色譜、大孔樹脂、高速逆流色譜等，此外，還有離子交換法、結(jié)晶和重結(jié)晶、密度和梯度離心等其他分離純化方法。鑒于篇幅所限，本文僅對(duì)目前普遍采用的主要色譜分離方法的研究進(jìn)展加以介紹。

2.1 高效液相色譜分離純化

靈芝三萜的分離純化是提高其純度的重要環(huán)節(jié)，唐文[19]采用高效液相色譜優(yōu)化后的色譜純化條件，將各個(gè)色譜峰達(dá)到了基線分離。采用建立的液相色譜方法，利用半制備液相從靈芝中分離得到了兩種目標(biāo)靈芝酸單體，純度大于99%。賈紅巖等[20]對(duì)不同品種間三萜類成分含量測(cè)定，得出乙腈-醋酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫對(duì)多種三萜類成分分離純化度高，適用于12 種三萜成分的同時(shí)測(cè)定。高效液相色譜分離純化法具有分離純化度高，精密度高，穩(wěn)定性和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但也有成本高、過(guò)程復(fù)雜等不足，適合于分離純化像靈芝三萜這類附加值較高的產(chǎn)品。

2.2 大孔樹脂分離純化

大孔吸附樹脂色譜是一種不含交換基團(tuán)、有大孔結(jié)構(gòu)的有機(jī)高聚物吸附劑，有吸附和分子篩雙重作用，具有成本低、吸附容量大、選擇性好、樹脂再生簡(jiǎn)便、解吸容易、洗脫率高和可再生等優(yōu)點(diǎn)。錢竹[21]利用定性顯色反應(yīng)和薄板層析，通過(guò)水、20%乙醇、40%乙醇、95%乙醇的洗脫順序進(jìn)行洗脫，AB-8 樹脂對(duì)靈芝酸的吸附量達(dá)8.8372 mg/g。大孔樹脂95%乙醇洗脫組分經(jīng)反相C18柱和制備高效液相色譜分離，經(jīng)HPLC 檢測(cè)分析，純度達(dá)到92.5%。檀琪等[22]對(duì)樺褐孔菌三萜粗提物用AB-8 大孔樹脂吸附、90%乙醇洗脫，三萜純度達(dá)85.13%。崔月花等[23]用HPD400 對(duì)靈芝發(fā)酵液正丁醇萃取相進(jìn)行分離和純化，最大吸附量達(dá)82.0 mg/g?？梢姡M管大孔樹脂分離純化解決了高效液相色譜成本高的問(wèn)題，但不同大孔樹脂類型對(duì)靈芝三萜的分離純化效果差異性較大，需要在實(shí)際使用中進(jìn)行選擇性試驗(yàn)；另外，單一采用大孔樹脂很難獲得理想的純化效果，需要和其他方法配合使用。

2.3 高速逆流色譜HSCCC 分離純化

以乙醇和石油醚提取獲得的三萜粗提液，經(jīng)HSCCC 兩相溶劑系統(tǒng)進(jìn)一步分離后，可方便高效地分離出靈芝酸S、靈芝酸T 和靈芝B。此外，優(yōu)化后的HSCCC 方法可用于較大規(guī)模的靈芝菌絲體中三萜的分離[24]。朱忠敏等[25]利用HZ-816 樹脂和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水的溶劑體系再經(jīng)高速逆流色譜一次分離，可分離得到純度高于93%的靈芝酸F 和純度高于90%的靈芝酸C1；當(dāng)改變?nèi)軇w系中的甲醇和水的比例時(shí)，再經(jīng)高速逆流色譜分離，可分離得到純度高于90%的靈芝酸A 和純度高于85%的靈芝酸C2。采用了大孔吸附樹脂柱層析結(jié)合高速逆流色譜法分離純化，具有高效、快速、制備量大、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，即節(jié)約了成本和很好地解決了有機(jī)溶劑對(duì)環(huán)境的污染問(wèn)題，且有利于高純度靈芝酸的工業(yè)化生產(chǎn)。

國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)果表明，靈芝三萜分離純化是一個(gè)較為復(fù)雜的過(guò)程，盡管該領(lǐng)域嘗試了對(duì)很多方法進(jìn)行研究，但各種方法都存在一定的不足，細(xì)化分離純化流程，采用分階段多方法聯(lián)合的分離純化形式可能是未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)。

3 靈芝三萜藥理作用

三萜類化合物是靈芝中的主要生物活性物質(zhì)，其中，最具代表性的就是靈芝酸，而靈芝酸是一類高度氧化的羊毛甾烷衍生物，其結(jié)構(gòu)如圖1 所示[26]。

圖1 靈芝酸結(jié)構(gòu)Fig.1 The structure of ganodenic acid

根據(jù)異戊二烯定則，多數(shù)三萜被認(rèn)為是由6 個(gè)異戊二烯縮合而成的，而主要活性部分是四環(huán)三萜和五環(huán)三萜，依據(jù)碳原子數(shù)目的不同可分為C24、C27 及C30 三種。環(huán)上的雙鍵大多數(shù)位于△8（9）位，大部分在C11 和C23 位有羰基，而且C3、C7 和C15 位大多數(shù)被羰基或羥基取代。根據(jù)官能團(tuán)和側(cè)鏈將其命名為靈芝酸、靈芝酸甲酯、赤靈酸、靈赤酸、靈赤酸甲酯、靈芝孢子酸、靈芝醇、靈芝醛和靈芝內(nèi)酯等[27]。其中，靈芝酸又分為靈芝酸A、靈芝酸DM、靈芝酸T、靈芝酸D、靈芝酸H 等。根據(jù)靈芝三萜類結(jié)構(gòu)、種類、羊毛甾烷骨架上所連基團(tuán)的不同以及與生物受體作用的多樣性，決定了其藥理學(xué)和生物學(xué)活性的多樣性。

3.1 對(duì)腎病的治療作用

腎臟疾病因其在世界范圍內(nèi)的大量存在，及其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制導(dǎo)致缺乏有效的治療方法而逐漸引起人們的關(guān)注。SU 等[28]研究了利用從中藥?kù)`芝中分離出的靈芝三萜對(duì)常染色體顯性多囊腎病的影響，靈芝三萜通過(guò)囊腫小管的生成、延長(zhǎng)和上皮細(xì)胞的分化來(lái)阻止腎臟囊腫的發(fā)生。靈芝三萜活性成分物質(zhì)有望成為治療常染色體顯性多囊腎病的新型藥物。

在阿霉素腎病的發(fā)病機(jī)制中，氧化應(yīng)激是引起慢性腎病的普遍因素之一，活性氧激活NF-κB 調(diào)節(jié)促炎細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)[29]。在體外抗纖維化活性的研究中發(fā)現(xiàn)靈芝內(nèi)酯B 在體內(nèi)可通過(guò)劑量依賴性抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和ROS 的產(chǎn)生，激活Nrf2，從而抑制阿霉素腎病[30]。此外，在慢性腎病模型中，靈芝內(nèi)酯B 降低了尿白蛋白水平，并抑制了肌成纖維細(xì)胞的激活。這些發(fā)現(xiàn)有望為抗慢性腎病藥物的開發(fā)提供新的途徑。

3.2 抗腫瘤細(xì)胞的作用

癌癥是一種多因素疾病，會(huì)導(dǎo)致行為和代謝的改變，并導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控和免疫系統(tǒng)減弱。三萜類物質(zhì)能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并通過(guò)某些信號(hào)通路間接誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。

據(jù)研究報(bào)道，從靈芝菌子實(shí)體提取的靈芝三萜能抑制肝癌細(xì)胞和Hela 細(xì)胞等的增殖，以及對(duì)人類結(jié)腸HT-29 癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性[31?34]。SMINA 等[32]通過(guò)小鼠試驗(yàn)證明，靈芝總?cè)凭哂姓T導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抗腫瘤活性的作用；MIN 等[33]通過(guò)體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)證明三萜類化合物對(duì)Meth-A 和LLC 腫瘤細(xì)胞株具有細(xì)胞毒作用；WANG 等[34]發(fā)現(xiàn)靈芝三萜類具有激活Caspases-9 和Caspases-3 來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致前列腺癌細(xì)胞發(fā)生調(diào)亡；SHAO 等[35]發(fā)現(xiàn)靈芝三萜類的抗癌作用可能與組蛋白乙?；陀薪z分裂細(xì)胞周期有關(guān)，分別通過(guò)調(diào)控不可降壓性5GCN5 和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2CDK2 來(lái)實(shí)現(xiàn)，盡而通過(guò)相互調(diào)節(jié)作用來(lái)發(fā)揮抗癌作用，主要作用于NF-κB、RAS-MAPK、PI3K/Akt/mTOR 和細(xì)胞周期，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[36]；DEDIS等[37]從靈芝菌子實(shí)體中提取分離得到的lucidumol D 對(duì)人體乳腺癌MCF-7 細(xì)胞、人體肝癌HepG2 細(xì)胞、人體宮頸癌HeLa 細(xì)胞、人體結(jié)直腸癌Caco-2 細(xì)胞和人體結(jié)直腸癌HCT-116 細(xì)胞具有選擇性的抗增殖和細(xì)胞毒性作用；LIN 等[38]對(duì)靈芝三萜類進(jìn)行了端粒G-四鏈體DNA 的高親和力和選擇性穩(wěn)定的篩選，結(jié)果表明靈芝酸A 和靈芝酸DF 具有較高的結(jié)合親和力并有選擇性地與pG4DNA 的側(cè)鏈結(jié)合，表明該三萜類可能是潛在的抗癌藥物[39]；ZHENG等[40]發(fā)現(xiàn)靈芝酸A、靈芝酸B、靈芝醇B、靈芝甘露三醇和靈芝甘露二醇5 個(gè)三萜類化合物對(duì)人鼻咽癌5-8F 細(xì)胞的端粒酶有明顯的抑制作用；LIU 等[41]證明了靈芝烯酸，具有逆轉(zhuǎn)HepG2/ADM 細(xì)胞對(duì)阿霉素DOX、長(zhǎng)春新堿VCR 和紫杉醇的耐藥性，并顯著逆轉(zhuǎn)表達(dá)MCCB1 的耐藥性。上述國(guó)內(nèi)外諸多學(xué)者的研究結(jié)果表明，靈芝三萜類化合物對(duì)多種癌細(xì)胞或具有細(xì)胞毒性、抑制作用、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的效果，可能是未來(lái)重要的抗癌藥物成分之一，具有很高的應(yīng)用開發(fā)價(jià)值。

3.3 抗骨質(zhì)疏松作用

骨質(zhì)疏松癥是一種骨量減少，骨組織微結(jié)構(gòu)惡化，導(dǎo)致骨骼脆性增強(qiáng)和骨折風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重會(huì)造成全身性骨骼疾病[42]。LIU 等[43]研究發(fā)現(xiàn)從靈芝提取物中分離出靈芝酸DM 能通過(guò)抑制破骨細(xì)胞的分化而明顯地抑制破骨細(xì)胞的形成，靈芝酸DM 抑制活化的T 細(xì)胞c-FOS 和核因子C1 的表達(dá)，這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子是破骨細(xì)胞形成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致樹突狀細(xì)胞特異性跨膜蛋白的表達(dá)受到抑制，減少了向破骨細(xì)胞融合的轉(zhuǎn)化。其中，靈芝酸F（2）和靈芝酸DM（5）在C7 上有羰基具有抑制破骨細(xì)胞分化的效果，這些結(jié)果表明，靈芝酸F 和靈芝酸DM 抑制破骨細(xì)胞分化過(guò)程中C7 上的羰基，該羰基是誘導(dǎo)抑制破骨細(xì)胞分化的必需基團(tuán)。因此，這兩個(gè)化合物由于有抑制破骨細(xì)胞分化的作用，可能成為治療骨質(zhì)疏松癥的新療法。

3.4 抗衰老作用

從靈芝子實(shí)體中提取到的三萜類在體外和體內(nèi)均顯示出具有抗氧化特性，通過(guò)直接清除細(xì)胞中產(chǎn)生的自由基來(lái)減少氧化損傷，包括自由基清除劑和抗癌活性[44]。并且三萜類還顯示出清除超氧陰離子自由基和羥自由基的活性[45]。AJITH 等[46]報(bào)道三萜類對(duì)老年大鼠線粒體脫氫酶、電子傳遞鏈復(fù)合物I 和II 活性的影響。SUDHEESH 等[47]分析了三萜類物質(zhì)對(duì)衰老小鼠心臟和大腦線粒體抗氧化狀態(tài)的影響，三萜類物質(zhì)可顯著提高老齡小鼠心臟和腦線粒體GSH 水平以及錳超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶GST 活性（P＜0.05），顯著降低老齡小鼠心臟和腦線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化水平、晚期氧化蛋白產(chǎn)物AOPP 和活性氧（ROS）水平（P＜0.05），從而改善衰老所致的抗氧化狀態(tài)。

3.5 抗炎作用

炎癥與癌癥、糖尿病和其他多種代謝性疾病有關(guān)，由于一氧化氮水平的增加與急性和慢性炎癥疾病密切相關(guān)，因此，許多學(xué)者通過(guò)對(duì)一氧化氮水平的控制來(lái)降低炎癥。SU 等[48]從靈芝中分離出多種靈芝三萜化合物，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究對(duì)脂多糖激活的RAW264.7 細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的抑制作用，發(fā)現(xiàn)ganoluciduone B 在12.5 μmol/mL 的濃度下對(duì)一氧化氮的抑制率為45.5%，表明三萜化合物對(duì)炎癥有很好的控制作用。

3.6 其他活性

此外，靈芝三萜類化合物能降低血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶的濃度，增強(qiáng)肝臟中的超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活性，并降低丙二醛含量[49]。靈芝三萜具有促進(jìn)BDNF 樣神經(jīng)元的存活[50]，以及具有降低了脂肪細(xì)胞中的甘油三酸酯、總膽固醇水平[51]和促血管生成[52]等多種功效。靈芝中的三萜烯類化合物能夠影響鼻咽癌5-8F 細(xì)胞端粒酶的活性和存活，并通過(guò)分子對(duì)接的方式強(qiáng)化三萜類化合物對(duì)抑制端粒酶的活性的影響?？梢?，靈芝三萜生物活性涉及諸多領(lǐng)域，除已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行研究的領(lǐng)域之外，還有尚未探究的空白領(lǐng)域，因此，要加大對(duì)靈芝三萜提取、分離純化及其生物活性研究，將會(huì)為尋找疾病的新治療藥物提供新途徑。

3.7 靈芝在保健食品及功能性食品中的應(yīng)用

目前，靈芝食品的開發(fā)多停留在全成分利用的初級(jí)階段，遠(yuǎn)未達(dá)到醫(yī)藥領(lǐng)域類似靈芝三萜這樣的細(xì)化程度，主要用于開發(fā)保健食品及新型功能性食品。近年來(lái)，靈芝可用部位不斷被挖掘，在保健食品中的可用部位原料包括靈芝子實(shí)體、靈芝孢子粉、靈芝孢子油和靈芝菌絲體等。截至2018 年底，已批準(zhǔn)含有上述可用部位的保健食品數(shù)量達(dá)到1270 余個(gè)[53]。鑒于靈芝孢子在功能性成分釋放和有效利用方面存在的瓶頸問(wèn)題，有關(guān)學(xué)者對(duì)靈芝孢子破壁方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并開發(fā)了硬膠囊、軟膠囊、片劑、口服液、粉劑、顆粒、茶劑等保健食品[54]。為探究靈芝功能性食品的功能性，林花等[55]通過(guò)小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了靈芝功能性食品具有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用。張瑞婷等[56]不僅綜述了靈芝在保健食品中的應(yīng)用研究進(jìn)展，還對(duì)未來(lái)靈芝在普通食品及化妝品等多領(lǐng)域的應(yīng)用開發(fā)進(jìn)行了展望，說(shuō)明靈芝在未來(lái)食品領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

4 總結(jié)及展望

盡管人們?cè)陟`芝研究及應(yīng)用領(lǐng)域已取得了一定的進(jìn)展，但仍然存在一系列問(wèn)題需要進(jìn)一步探究。同時(shí)，對(duì)靈芝三萜化合物研究及未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)加以展望，以期為靈芝三萜類化合物的研究及應(yīng)用開發(fā)提供相應(yīng)的參考。

提取技術(shù)及方法的綜述結(jié)果表明，各種方法均具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，嘗試采用組合提取方法從而汲取不同方法的優(yōu)點(diǎn)，克服單一方法的缺點(diǎn)和不足，以提高提取率及提取效率。探究更高的提取率及提取效率、使工藝過(guò)程更簡(jiǎn)單、成本更低、方便易行、環(huán)境更友好的新方法、新技術(shù)、新裝備將成為未來(lái)靈芝三萜提取領(lǐng)域的研究發(fā)展趨勢(shì)，同時(shí)，不斷優(yōu)化提取方案和引進(jìn)生物活性追蹤等先進(jìn)技術(shù)，確保在提取過(guò)程中有效保護(hù)其生物活性，也是未來(lái)提取技術(shù)研究的重要課題。

分離純化的綜述結(jié)果表明，盡管現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了靈芝三萜較高純度的分離純化，但僅僅能夠分離出靈芝三萜中的靈芝酸A、靈芝B、靈芝酸C1、靈芝酸C2、靈芝酸S、靈芝酸T 等部分化合物，且由于分離程度低，所以分離出來(lái)的三萜化合物種類少，大部分屬于混合物，尚有大量的化合物無(wú)法進(jìn)一步細(xì)化分離，這嚴(yán)重制約靈芝三萜生物活性的應(yīng)用開發(fā)。探究靈芝三萜細(xì)化分離純化技術(shù)方法，分離出更多的三萜化合物單體，以深度開發(fā)和綜合利用其生物活性，為藥理學(xué)、藥效學(xué)和毒理學(xué)等方面的深入研究打下基礎(chǔ)，也將是未來(lái)該領(lǐng)域的一個(gè)重要研究分支。

三萜化合物的作用機(jī)理、構(gòu)效關(guān)系、分子調(diào)控機(jī)制以及藥理動(dòng)力學(xué)研究尚不是很明確。未來(lái)還有很多方面需要不斷探究：從分子結(jié)構(gòu)層面揭示其分子結(jié)構(gòu)和生物活性之間的關(guān)系，了解其不同功能性的作用基團(tuán)，探究提取分離過(guò)程中不同方法對(duì)其結(jié)構(gòu)及生物活性的影響關(guān)系，最大限度地降低提取分離過(guò)程中對(duì)其結(jié)構(gòu)及生物活性的影響，以有效保護(hù)其生物活性成分；另一方面，從人體細(xì)胞學(xué)、代謝組學(xué)和預(yù)防醫(yī)學(xué)等多方面來(lái)闡述靈芝三萜化合物的特殊功能性，以期更深入地了解靈芝三萜的作用機(jī)制，揭示靈芝三萜作用機(jī)理等，將會(huì)為未來(lái)靈芝三萜化合物的應(yīng)用開發(fā)奠定更堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

在食品工程領(lǐng)域，靈芝主要用于開發(fā)附加值較高的保健食品及新型功能性食品，靈芝制品尚停留在原料的初級(jí)利用階段，遠(yuǎn)未達(dá)到醫(yī)藥領(lǐng)域類似靈芝三萜這樣的細(xì)化程度。隨著靈芝精細(xì)化加工的不斷深入，靈芝醫(yī)藥加工副產(chǎn)物的綜合利用也將成為一個(gè)重要的研究開發(fā)方向。這不僅可以提高靈芝深加工的附加值，還可以降低食品開發(fā)原料成本，從而有利于應(yīng)用于食品開發(fā)，成為大眾百姓消費(fèi)的產(chǎn)品。

相信隨著上述問(wèn)題的逐一解決，將會(huì)更加有效地提高三萜化合物的應(yīng)用潛力及靶向性，以利于功能性食品和藥品的開發(fā)，并將其副產(chǎn)物應(yīng)用于普通食品開發(fā)，為人類飲食健康及臨床醫(yī)學(xué)發(fā)揮更大的作用。