黔產(chǎn)兩種桑寄生黃酮、多糖及人體必需元素含量分析

張 倩，葉 迪，張雙慶，岳怡梅，張桂玲，羅緒強

（1.貴州師范學院 化學與材料學院，貴州 貴陽 550018；2.貴州師范學院 地理與資源學院，貴州 貴陽 550018）

桑寄生原名桑上寄生，亦稱廣寄生，為檀香目桑寄生科寄生屬植物［1］，常寄生于桑、桃、李、油桐、油茶、馬尾松、桂花、梨樹、李樹、油茶、厚皮香、核桃等多種植物上［2］。主要分布于我國云南、四川、甘肅、陜西、山西、河南、貴州、湖北、湖南等地［3］。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，2015 版《中國藥典》明確其性味歸經(jīng)及功效，能祛風濕、強筋骨，臨床上常用于風濕痹痛、腰膝酸軟、筋骨無力、崩漏經(jīng)多、妊娠漏血、胎動不安等癥狀的治療［4-5］。

桑寄生化學成分較多，藥理活性較強，枝葉中富含黃酮、生物堿、萜類、多肽、蛋白、凝集素、多糖等高分子化合物、有機酸等小分子化合物，主要藥物活性成分為黃酮類化合物［6-7］。桑寄生屬于臨床上常見的中藥，貴州桑寄生資源十分豐富，全省各地區(qū)均有分布，尤以畢節(jié)、黔西南、銅仁等地的林區(qū)或住宅旁老樹上寄生較多見，產(chǎn)量較大，且寄主具有廣泛的多樣性［5，8-10］。中藥所謂的有效成分并不完全等于藥材本身的藥理作用，嚴格講來，至今還沒有找到中藥的真正有效成分和其作用的物質(zhì)基礎，中藥中的多糖類或黃酮化合物和金屬元素可結(jié)合成金屬配合物，二者協(xié)同可以發(fā)揮抗氧化功能［11-13］。本研究對黔產(chǎn)花椒樹桑寄生與皂角樹桑寄生中的黃酮、多糖及人體必需礦物質(zhì)元素含量進行了測定分析，為探討其有效成分與藥物療效關(guān)系提供參考。

1 材料

1.1 供試樣品

供試黔產(chǎn)花椒樹桑寄生和皂角樹桑樹桑寄生采購自貴陽市南明區(qū)萬東橋中藥材批發(fā)市場，產(chǎn)地貴州關(guān)嶺。隨機選擇5 株成熟、健康的植株，每株按枝莖和葉片分別采集，不同株同部位樣品混合成一個樣裝入干凈信封。樣品帶回實驗室后，用自來水和去離子水快速沖洗干凈、晾干，105℃殺青，置于烘箱中60℃烘干（約4 hr），粉碎過 100目篩后封存于密封袋內(nèi)避光干燥保存，備用。

1.2 主要儀器

721N 型可見分光光度計（上海儀電分析儀器有限公司）；Wasst-mpx 型等離子體發(fā)射光譜儀（美國安捷倫公司）；Agilent HPLC 1290-770x型高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國安捷倫公司）。

1.3 主要試劑

無水乙醇（重慶萬盛川東化工有限公司，AR）；甲醇（重慶萬盛川東化工有限公司，AR）；無水乙酸鈉（天津市登峰化學試劑廠，AR）；無水氯化鋁（GR）；蘆丁對照品（合肥博美生物科技有限公司，AR）；苯酚（西隴科學股份有限公司，AR）；葡萄糖（常德比克曼生物科技有限公司，AR）；濃硫酸（重慶萬盛川東化工有限公司，AR）；硝酸（上海國藥集團化學試劑有限公司，GR）；氫氟酸（重慶川東化工有限公司，GR）。

2 方法

2.1 黃酮含量的測定

以85%乙醇為提取液，料液比為1:30，85℃下提取3 小時，反復提取2 次，合并濾液，減壓濃縮至一定體積。黃酮含量采用三氯化鋁醋酸鈉顯色法測定［14］，標準曲線方程為y=20.924x+0.0167，r=0.9994。

2.2 總多糖含量的測定

以水為提取液，料液比1:20，95℃下提取2 小時，反復提取2 次，合并濾液，減壓濃縮至一定體積。多糖含量采用苯酚-硫酸法測定［15-16］，標準曲線方程為y=63.033x+0.0512，r=0.9997。

2.3 元素含量的測定

稱取0.25 g 樣品于聚四氟乙烯坩堝中，加入2 mL超純濃硝酸和1.5 mL 氫氟酸（沿壁加入以沖刷瓶壁避免粘留樣品），蓋上蓋子及不銹鋼外套，擰緊，放入烘箱中于150℃加熱16 h。取出冷卻，置于電熱板上蒸干，加入硝酸，蒸干，反復兩次以確保HF 除盡。然后再加入2 mL 硝酸，蓋上蓋子，于150℃加熱16 h。最后將消解液完全轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中定容，控制瓶中酸度為2%左右，待測。做樣品的同時，用上述步驟制備空白樣2-3 個（空白樣指不加樣品，只加HNO3和蒸餾水，但要保證容量瓶中HNO3濃度在2%左右）。

K、Ca、Mg含量采用等離子體發(fā)射光譜儀測定，測定波長選擇依次為K：767 nm；Ca：423.5 nm；Mg：286.0 nm。Fe、Mn、V、Co、Cr、Cu、Zn、Mo、Ni 含量采用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測定。以植物成分分析標準物質(zhì)GBW07604（GSV-3）楊樹葉作質(zhì)量控制，標樣元素含量測定結(jié)果均在標準值范圍內(nèi)。各項測定值均為植物干物質(zhì)的元素總量。

3 結(jié)果與分析

3.1 黃酮含量

黃酮類化合物屬植物次生代謝產(chǎn)物，是廣泛存在于自然界中的具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)的化合物，是人類飲食中最豐富的多酚類物質(zhì)，約占攝入總量的2/3。黃酮類化合物主要以苷類或碳糖基的形式存在于植物體內(nèi)，也有以游離形式存在的。因其具有多種顯著的生理活性從而具有重要的藥用價值，黃酮類化合物不僅可以防治心血管疾病，還有止咳、祛痰、抗菌、抗自由基、抗氧化的作用?？商岣邫C體免疫能力，有一定的抗癌能力［17-18］。陳志杰對紅花桑寄生葉片的黃酮含量和其抗氧化活性進行了研究，結(jié)果表明紅花桑寄生葉片黃酮含量為4.65%，具有一定的抗氧化活性［19］。陳曉琪等研究表明桑寄生總黃酮對鏈脲佐菌素致高血糖有很好的降糖效果［20］。桑寄生總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠有明顯的祛風濕作用［21］。

研究結(jié)果表明（圖1），不同寄主桑寄生黃酮含量不同，且在葉片和枝莖間差異顯著。供試樣品中，黃酮含量以花椒樹桑寄生葉片中最高，為71.22 mg/g，皂角樹桑寄生枝莖中最低，為13.89 mg/g。黔產(chǎn)兩種桑寄生葉片中黃酮含量均高于枝莖中含量，花椒樹桑寄生葉片黃酮含量是枝莖的3.2 倍，皂角樹桑寄生葉片黃酮含量是枝莖的4.2 倍。

圖1 兩種寄主桑寄生葉片與枝莖黃酮含量

3.2 多糖含量

多糖又稱多聚糖，由糖苷鍵連接起來的醛糖或酮糖組成的高聚物，是營養(yǎng)素的重要組成部分，在自然界中廣泛存在，包括植物、動物以及微生物，其中植物多糖因具有低毒性、高生物相容性、高生物降解性及抗腫瘤、抗氧化損傷、抗癌、抗菌、和增強機體免疫等多種生物活性成為目前的研究熱點［22-27］。對桑寄生多糖的研究主要集中在紅花桑寄生和椆樹桑寄生［28-29］，對花椒桑寄生和皂角樹桑寄生多糖的含量研究鮮見文獻報道。

本研究結(jié)果表明（圖2），不同寄主桑寄生多糖含量不同，且在葉片和枝莖間差異顯著。供試樣品中，多糖含量以皂角樹桑寄生枝莖中最高，為0.87mg/g，花椒樹桑寄生枝莖中最低，為0.26 mg/g。黔產(chǎn)兩種桑寄生多糖在葉片和枝莖中多糖含量不像黃酮含量葉片均高于枝莖，花椒樹桑寄生葉片多糖含量是枝莖的1.9 倍，而皂角樹桑寄生枝莖黃酮含量是葉片的1.3 倍。

圖2 兩種寄主桑寄生葉片與枝莖多糖含量

3.3 必需元素含量

一般認為有機化學成分是決定中藥性能與藥效的主要因素，近年來發(fā)現(xiàn)微量元素是溝通動物與植物信息的橋梁，微量元素與活性物質(zhì)在人體內(nèi)相互協(xié)同、相互補充、相互滲透、相互制約，并參與體內(nèi)各類生化反應，促進機體自身調(diào)節(jié)，從而達到治療疾病的目的。

K、Ca、Mg、Fe、Mn、V、Co、Cr、Cu、Zn、Mo、Ni 既是植物必需元素，也是人體必需元素。本研究結(jié)果表明（表1），不同寄主桑寄生K、Ca、Mg、Fe、Mn、V、Co、Cr、Cu、Zn、Mo、Ni 等12種必需元素的含量和分配模式均有所不同。K、Ca、Mg、Fe、Mn、V、Co、Cr 元素含量在花椒樹桑寄生和皂角樹桑寄生葉片中的含量高于枝莖中的含量，Zn、Mo、Ni 元素含量在花椒樹桑寄生和皂角樹桑寄生枝莖中的含量高于葉片中的含量，而Cu 元素含量在兩種桑寄生葉片與枝莖中的含量相差不大。

表1 不同寄主桑寄生葉、枝必需元素含量（mg·kg-1）

4 結(jié)論

黃酮含量以花椒樹桑寄生葉片最高，皂角樹桑寄生枝莖最低，黔產(chǎn)桑寄生中葉片的黃酮含量遠遠高于枝莖中的含量。皂角樹桑寄生多糖含量高于花椒樹桑寄生多糖含量，多糖含量在桑寄生中的高低順序為皂角樹桑寄生枝莖＞皂角樹桑寄生葉片＞花椒樹桑寄生葉片＞花椒樹桑寄生枝莖。K、Ca、Mg 元素在葉片中的含量均是皂角樹桑寄生高于花椒樹桑寄生，而在枝莖中的含量均是花椒樹桑寄生高于皂角樹桑寄生。Fe、Cr、Zn、Mo、Ni 含量，無論是在葉片中還是在枝莖中均是皂角樹桑寄生高于花椒樹桑寄生，而Mn 則相反。V、Co 含量在兩種寄生中均是葉片的含量均高于枝莖的含量，但花椒樹桑寄生中葉片和枝莖間的差距比較大，而皂角樹桑寄生中葉片和枝莖間的含量比較接近。Cu 含量在兩種寄生間的差別不大，在同種寄生中葉片和枝莖間的差別也不大。桑寄生黃酮、多糖、人體必需元素含量間可能存在某種關(guān)系，這種關(guān)系的改變對桑寄生藥效可能會產(chǎn)生一定程度的影響，關(guān)于這方面的探討，有待進一步研究。