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    脂肪移植處理技術(shù)研究進(jìn)展

    2022-05-28 08:05:52楊健肖志波
    中國美容醫(yī)學(xué) 2022年4期
    關(guān)鍵詞:純化存活率加工

    楊健 肖志波

    [摘要]自體脂肪移植術(shù)已有一百多年歷史,如何提高移植脂肪存活率,減少并發(fā)癥,一直是整形外科的研究熱點。整形科醫(yī)生們仔細(xì)研究了術(shù)中的每一個步驟,如:供區(qū)的選擇、脂肪的獲取、純化、注射的方法等以求提高移植存活率。近十幾年來,在移植前處理脂肪的方法上有較多新理論、新技術(shù)出現(xiàn),如:提取及添加基質(zhì)血管成分與脂肪來源干細(xì)胞、制成納米脂肪與基質(zhì)血管成分膠等。脂肪移植前進(jìn)行純化和加工是有必要且有益的,本文針對脂肪移植的處理技術(shù)以及相應(yīng)處理對移植脂肪的影響進(jìn)行綜述。

    [關(guān)鍵詞]脂肪移植;存活率;純化;加工;脂肪來源干細(xì)胞

    [中圖分類號]R622? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455(2022)04-0182-04

    Research Progress of Processing Technology on Fat Transplantation

    YANG Jian,XIAO Zhibo

    (Department of Plastic Surgery, the Second Hospital of Harbin Medical University,Harbin 150086,Heilongjiang,China)

    Abstract: Autologous fat transplantation has a history of more than 100 years. How to improve the survival rate of fat transplantation and reduce complications has always been a hot topic in plastic surgery.In order to improve the survival rate of transplantation,plastic surgeons carefully studied every step of the operation, such as the choice of donor site,fat acquisition, purification, injection methods, etc.In recent ten years,there are many new theories and technologies in fat pretreatment,such as extraction and addition of stromal vascular fraction and adipose-derived stem cells,processing of nano fat and stromal vascular fraction gel(SVF-Gel),etc.It is necessary and beneficial to purify and process fat before transplantation.This article reviews the processing technology of fat transplantation and the effect of corresponding process on fat transplantation.

    Key words:fat transplantation; survival rate; purification; fat processing; adipose-derived stem cells

    自1893年德國Neuber報道了第一批脂肪移植術(shù)后,因自體脂肪來源于自身組織,無免疫排斥,獲取方便等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用。由于早期獲取脂肪的方式為開放式,損傷大,移植的脂肪組織重吸收嚴(yán)重,長期療效顯著低于預(yù)期,加之上個世紀(jì)60年代,硅膠注射的流行,脂肪移植技術(shù)曾一度被放棄。直到20世紀(jì)80年代,Klein發(fā)明腫脹麻醉技術(shù)及Coleman提出結(jié)構(gòu)脂肪移植技術(shù)后為脂肪移植的快速發(fā)展奠定了堅實的基礎(chǔ),脂肪移植技術(shù)才再次得到廣泛認(rèn)可,但脂肪移植不可預(yù)測的重吸收仍是不可忽視的缺點,移植脂肪吸收率差別很大,可達(dá)到20%~80%[1],很多患者往往需要二次或多次手術(shù),極大地限制了脂肪移植技術(shù)在臨床的應(yīng)用。移植脂肪供區(qū)的選擇及獲取、處理、注射方法均會影響移植脂肪的存活率,但少有文獻(xiàn)證據(jù)支持供區(qū)的選擇會明顯影響脂肪移植存活率,Coleman技術(shù)及李青峰的“3M3L”注射技術(shù)得到了臨床廣泛的認(rèn)可,而在脂肪處理方面近年來產(chǎn)生了許多新理論新技術(shù)用于提高移植存活率及治療效果,脂肪的處理不再是單純的純化脂肪,現(xiàn)將脂肪處理技術(shù)分為純化及加工兩部分。

    1? 顆粒脂肪的純化

    目前,腫脹麻醉吸脂術(shù)是脂肪移植首選的取脂方法,而抽吸獲得的脂肪顆粒中不僅含有脂肪細(xì)胞,還有生理鹽水、利多卡因、腎上腺素、細(xì)胞碎片、纖維條索及脂滴等成分,將這些成分和脂肪顆粒一并注射到受區(qū),會導(dǎo)致脂肪顆粒實際注射量難以精確計算,且部分成分會在受區(qū)引起炎癥,這對脂肪移植是不利的[2]。Peer[3]的脂肪移植存活理論認(rèn)為移植物的體積保留率取決于移植時脂肪細(xì)胞的存活數(shù)量及移植后脂肪細(xì)胞血供能否及時重建,因此,移植前通過適當(dāng)處理以增加活性較高的脂肪細(xì)胞含量,去除壞死的脂肪細(xì)胞及腫脹液等雜質(zhì),并提高受區(qū)的血運,從而提高移植脂肪存活率是很有必要的[4]。目前,顆粒脂肪的純化方法主要有洗滌、離心、靜置及過濾等四種。

    1.1 洗滌:洗滌法是將抽吸獲得的脂肪顆粒,以洗滌液反復(fù)洗滌,然后去掉洗滌液。至于用何種洗滌液,洗滌液與脂肪組織的比例及洗滌幾次,王麗君等[5]研究發(fā)現(xiàn)洗滌液與脂肪組織的容積比為3:1的條件下洗滌3次,生理鹽水洗滌的效果要優(yōu)于平衡鹽液。Condé-Green等[6]發(fā)現(xiàn)生理鹽水洗滌處理后的脂肪組織不僅清除了大部分血液、腫脹液等雜質(zhì),而且相比離心法,洗滌法處理的脂肪細(xì)胞完整性和活性更好,認(rèn)為洗滌可能是脂肪移植的最佳純化方法。因單純的洗滌法處理的抽吸脂肪含有較多液體,目前臨床上常將洗滌法與其他純化方法聯(lián)合應(yīng)用以提高純化效果,有學(xué)者認(rèn)為吸脂液若含有較多血液和細(xì)胞碎片需洗滌純化,若無則無需洗滌。

    1.2 離心:離心法可迅速去掉大部分腫脹液及血細(xì)胞等雜質(zhì),獲得較純凈的脂肪顆粒。但是否應(yīng)該用離心法純化脂肪,如何選擇合適的離心速度和離心時間,國內(nèi)外仍存較多爭議。

    Bozkurt等[7]通過研究不同離心速度(1 000,2 000,3 000,4 000,5 000 rpm)/4 min對大鼠自體脂肪移植存活的影響,推測2 500 rpm(698.75 g)離心4 min對自體脂肪移植物的存活效果最好。Pulsfort等[8]研究表明,經(jīng)離心力高達(dá)5 000 rpm(20 627 g)處理后的抽吸脂肪與離心力較低或未離心組相比,不同離心處理的脂肪細(xì)胞活力沒有明顯變化,并且高速離心似乎比低速離心能更好地去除油滴和細(xì)胞碎片。相反,F(xiàn)erraro等[9]通過體外實驗證明500 rpm(50 g)以上的離心力就會破壞脂肪組織的結(jié)構(gòu)完整性,油性成分增加。在體內(nèi)實驗中,經(jīng)1 300 rpm(250 g)離心5 min的抽吸脂肪移植后組織密度更高,留存的組織中祖細(xì)胞含量更高,移植后細(xì)胞存活率也更高,術(shù)后效果最好。Xie等[10]利用葡萄糖轉(zhuǎn)移試驗比較了不同離心條件下脂肪細(xì)胞的活性,結(jié)果表明離心會降低脂肪細(xì)胞活性,且轉(zhuǎn)速越高,損傷越大,認(rèn)為應(yīng)慎用離心法。Hoareau L等[11]通過給免疫缺陷小鼠注入經(jīng)強(qiáng)力離心(900 g,1 800 g)、溫和離心(100 g,400 g)及未純化處理過的抽吸脂肪,注射24 h后檢測小鼠血液中白細(xì)胞介素6(IL-6)和趨化因子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)的含量,強(qiáng)力離心組死亡脂肪細(xì)胞是溫和離心組的三倍,且IL-6和MCP-1的比率更高,提示高速離心會損傷脂肪細(xì)胞并造成移植后吸收率增加。

    Kurita等[12]認(rèn)為,油分的增加并不一定意味著是離心使破壞脂肪細(xì)胞增加所致,也可能是從脂肪部分分離出來的油分增加,同時發(fā)現(xiàn)超過3 000 g的離心力對脂肪干細(xì)胞和脂肪細(xì)胞有一定的損傷作用,但是適當(dāng)?shù)碾x心會濃縮它們,從而提升受區(qū)體積留存率。他們推薦最佳的離心力為1 200 g,與Coleman等[13]提出的1 286 g相近,以獲得良好的短期和長期效果。

    1.3 靜置:靜置沉淀法是最早出現(xiàn)且最簡單的純化方法,即利用重力作用使抽吸脂肪中密度不同的成分分離。有研究指出當(dāng)靜置時間超過2 h,才能達(dá)到析出90%以上的水分和油滴[14],而臨床因為手術(shù)時間的限制,一般靜置0.5 h左右,有的靜置時間甚至更短。Strong等[15]發(fā)現(xiàn)在動物實驗中,離心、過濾或靜置沉淀法處理后,脂肪留存率沒有觀察到明顯的差異,然而在臨床研究中,與靜置沉淀法相比,離心處理脂肪的結(jié)果更有利。

    1.4 過濾:過濾法是通過過濾網(wǎng)或濾器將脂肪組織和雜質(zhì)分離,一般與洗滌法聯(lián)合使用。Zhu等[16]發(fā)現(xiàn)洗滌聯(lián)合過濾處理的脂肪組織與未純化組、靜置組、Coleman離心組相比,液體、血細(xì)胞及游離脂質(zhì)含量顯著較低,通過測量激動劑誘導(dǎo)脂肪組織脂解后甘油的釋放來測定脂肪組織的活力,顯示洗滌加過濾組比其他組具有更高的細(xì)胞活性,因此,他們認(rèn)為洗滌并過濾純化效果更好。至于用什么材質(zhì)的過濾網(wǎng),Minn等[17]通過苯磺酸水合物(XTT)吸光度試驗評估純化后的脂肪細(xì)胞存活率研究,發(fā)現(xiàn)金屬篩過濾的脂肪組織活性明顯低于棉紗過濾組,而離心組與棉紗組無明顯差異。吳榮薇等[18]通過對比離心法、靜置法和棉墊過濾法純化后脂肪樣本的脂肪含量、含油量及液體含量,認(rèn)為棉墊過濾法純化效果更好、更有利于術(shù)后脂肪細(xì)胞存活。

    2? 純化脂肪的再加工

    2.1 基質(zhì)血管成分與脂肪來源干細(xì)胞:基質(zhì)血管成分(Stromal vascular fraction,SVF)是將抽吸的脂肪組織經(jīng)過膠原酶消化、洗滌、離心、過濾,并去除成熟脂肪細(xì)胞后得到的異質(zhì)細(xì)胞群,包括脂肪來源干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells,ASCs)、血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及血液成分細(xì)胞群等[19]。ASCs是存在于脂肪組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞,除了具有多向分化的潛能外還具有依賴旁分泌的治療作用,ASCs可分泌多種細(xì)胞因子、生長因子和趨化因子,調(diào)節(jié)血管生成和免疫反應(yīng),促進(jìn)受損組織的再生;一項關(guān)于ASCs治療缺血性疾病的系統(tǒng)綜述中總結(jié)認(rèn)為ASCs的血管生成作用更多歸因于它們的分泌潛能,而不是它們的多向分化能力[20]。

    Matsumoto等[21]通過小鼠體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)抽出的脂肪中ASCs的數(shù)量大約是切除整塊脂肪組織中的一半,可能是脂肪移植遠(yuǎn)期吸收率較高的原因之一,由此提出了細(xì)胞輔助脂肪移植(Cell-assisted lipotransfer,CAL)。CAL是輔助SVF的脂肪移植技術(shù),通過向純化脂肪中添加SVF,使貧ASCs脂肪成為富ASCs的脂肪。SVF細(xì)胞在缺氧和其他生長因子等刺激下分泌血管內(nèi)皮生長因子、肝細(xì)胞生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子-b,并強(qiáng)烈影響干細(xì)胞的分化,促進(jìn)血管生成和傷口愈合[22],所以輔助SVF脂肪移植可以提高移植脂肪存活率,并減少脂肪移植的并發(fā)癥,如:纖維化、假性囊腫形成和鈣化等[23]。

    用膠原酶處理脂肪組織獲得SVF的過程時間較長,會明顯導(dǎo)致手術(shù)時間延長,并且膠原酶對于人體屬于外源性物質(zhì),會增加制備過程中外源性物質(zhì)和生物污染的風(fēng)險。Gontijo-de-Amorim等[24]采用機(jī)械法(不采用酶消化脂肪組織)富集SVF混合純化脂肪移植到面部,治療面部體積缺損,結(jié)果表明機(jī)械富集SVF保持了較高的細(xì)胞活性。該技術(shù)重復(fù)性好,處理的脂肪成活率高,移植脂肪體積保持不變,組織形態(tài)正常,無纖維化、囊腫和鈣化現(xiàn)象。機(jī)械富集SVF法不需要任何昂貴的機(jī)械設(shè)備,成本低,降低了酶消化法相應(yīng)的風(fēng)險,相比酶消化法更適合臨床應(yīng)用。

    2.2 微脂顆粒和納米脂肪:用直徑3 mm帶有多個1 mm銳側(cè)孔的吸脂管抽吸獲得的脂肪稱為微脂顆粒(Microfat)[25],微脂顆粒相對于傳統(tǒng)脂肪顆粒體積較小,一般用于面部美容,或是用于制作納米脂肪。微脂顆粒只能移植到皮下,移植到真皮深層時會容易出現(xiàn)皮膚表面凹凸不平、囊腫樣變及鈣化結(jié)節(jié)等并發(fā)癥。將微脂顆粒轉(zhuǎn)移到兩個10 ml的注射器中,兩個注射器用連接器連接后,來回推動注射器30次機(jī)械乳化脂肪,然后用尼龍布過濾去除纖維成分,Tonnard等將此方法獲得的脂肪乳液稱之為納米脂肪[26]。納米脂肪顆粒直徑為400~600 μm,而微脂超過1.2 mm[27],所以有學(xué)者認(rèn)為將其稱為“超微粒脂肪”更合適。納米脂肪在臨床上主要用于治療皺紋、瘢痕和改善膚質(zhì),目前正在研究更廣泛的應(yīng)用[28-31]。納米脂肪中成熟脂肪細(xì)胞幾乎完全被破壞,且去除了其中的細(xì)胞外基質(zhì)纖維,但富含ASCs、脂肪微血管碎片(Microvascular fragments)[32]和生長因子[33]。因此,它可以用來提供ASCs用于再生,然而作為一種真皮填充劑,它并不是一種理想的充填產(chǎn)品。

    Zhu等[34]基于Tonnard等[26]的納米脂肪技術(shù)開發(fā)了一種新的純機(jī)械加工脂肪方法,將乳化脂肪在常溫下以2 000 g的離心條件下離心3 min,丟棄上層的油和最底層的液體部分,獲得的粘性物質(zhì)他們定義為基質(zhì)血管成分膠(SVF-Gel)。SVF-Gel具有很強(qiáng)的再生功能[35],并在傷口愈合方面有很好的療效[36]。Cai等[37]使用SVF-Gel治療女性頸部水平皺紋,并對比了單純注射A型肉毒毒素(BTX-A)治療頸部皺紋的效果,結(jié)果顯示SVF-Gel是一種治療水平頸部皺紋的有效方法,特別是對Ⅲ型和Ⅳ型皺紋的患者。移植的SVF-Gel不僅可以起到填充物的作用,產(chǎn)生即時的改善作用,而且可以刺激膠原蛋白合成,從而產(chǎn)生持續(xù)的治療效果。陳若淼等[38]通過小鼠實驗發(fā)現(xiàn)SVF-Gel輔助脂肪顆粒移植可促進(jìn)移植物初期血管化及成脂化,提高移植脂肪最終存活率。

    2.3 同種異體脂肪基質(zhì):同種異體脂肪基質(zhì)[39](Allograft adipose matrix,AAM)是一個新興的研究熱點,AAM是脂肪組織去除脂質(zhì)和細(xì)胞成分剩下的細(xì)胞外基質(zhì)成分,包含膠原蛋白和內(nèi)源性成脂及血管生成因子等。Kokai等[39]通過體外細(xì)胞基質(zhì)研究、臨床前小鼠模型體內(nèi)植入和初步臨床評價,證明AAM具有促進(jìn)血管生成和成脂潛力,可以重塑和再生皮下軟組織。Giatsidis等[40]通過六組小鼠模型試驗:單純外部負(fù)壓吸引組External volume expansion (EVE組)、單純脂肪組織移植組(FAT組)、單純同種異體脂肪基質(zhì)移植組(AAM組)、(AAM+FAT)組、(EVE+AAM)組以及(EVE+AAM+FAT)組。通過比較移植物的重量、橫截面積、移植物中新生血管數(shù)量及移植物周圍血管生成數(shù)量等數(shù)據(jù),結(jié)果表明AAM的成分支持脂肪生成和血管生成。將同種異體脂肪基質(zhì)與抽吸的自體游離脂肪顆粒等分混合一起注射移植,有增加移植受區(qū)遠(yuǎn)期體積留存率,并降低囊腫的發(fā)生率等優(yōu)點。AAM是脫掉細(xì)胞成分的,使得其作為同種異體移植物(人與人之間)使用是安全的[41],且不用擔(dān)心移植物核心處的壞死,表明AAM有單獨用作軟組織缺損修復(fù)的潛能,對于想要做脂肪移植的消瘦患者具有極大的應(yīng)用潛力。

    3? 小結(jié)和展望

    就脂肪純化方面,洗滌過濾法雖能較好地保護(hù)脂肪細(xì)胞活性,但操作步驟繁多,脂肪細(xì)胞受外部環(huán)境污染的可能性大。靜置沉淀法對脂肪組織損傷最小,但純化效率較低,雜質(zhì)析出不完全。盡管離心是否會損傷脂肪細(xì)胞還有爭論,但是目前大部分學(xué)者都贊成使用溫和的離心力離心純化脂肪,避免高速離心對脂肪細(xì)胞的破壞。因為即使脂肪純化方法相同,收獲和注射的技術(shù)和位置也可能會影響移植脂肪的吸收,所以,目前還沒有一種技術(shù)能顯示出比其他技術(shù)更優(yōu)越的脂肪移植效果,還需要更多的臨床研究來確定哪種純化方法更好?;蛟S聯(lián)合純化方法更有優(yōu)勢,有研究認(rèn)為REVOLVE和PUREGRAFT等商業(yè)過濾清洗一體化系統(tǒng)是進(jìn)行大容量脂肪移植的最合適的選擇[42]。加工純化脂肪制作脂肪衍生物方面,目前尚無提取ASCs、制作納米脂肪及SVF-Gel的規(guī)范統(tǒng)一技術(shù),而AAM需要更多、更深入、全面細(xì)致的基礎(chǔ)和臨床研究,可能成為一種新的軟組織填充策略。

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    [收稿日期]2020-10-13

    本文引用格式:楊健,肖志波.脂肪移植處理技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國美容醫(yī)學(xué),2022,31(4):182-185.

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