m6A 甲基化修飾與骨肉瘤研究進(jìn)展

王聞雪 譚理 湯博藝 蔡林 謝遠(yuǎn)龍

骨肉瘤 ( osteosarcoma，OS ) 是一種原發(fā)性惡性骨腫瘤，起源于間葉組織，多位于四肢長(zhǎng)骨干骺端，具有強(qiáng)侵襲、易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差等特點(diǎn)。在組織學(xué)上，OS 是一種高密度細(xì)胞腫瘤，由多形紡錘形細(xì)胞組成，并產(chǎn)生骨樣基質(zhì)。OS 多發(fā)于青少年，發(fā)病率約為 3～4 例 / 百萬(wàn)，OS 患者的 5 年生存率平均為 60%。目前發(fā)現(xiàn)，OS 的發(fā)病機(jī)制包括發(fā)生染色體異常、抑癌基因突變、原癌基因和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子表達(dá)失調(diào)、miRNAs、lncRNA 通過(guò)信號(hào)通路影響等，但 OS 發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。近年來(lái)，m6A 甲基化 ( N6-Methyladenosine ) 調(diào)節(jié)因子以 m6A 依賴的方式調(diào)控OS 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄后修飾過(guò)程，對(duì) OS 的發(fā)生發(fā)展、化療耐藥、免疫治療等產(chǎn)生影響。

一、m6A 甲基化修飾概述

N6-甲基腺嘌呤 ( N6-methyladenosine，m6A ) 是高等生物中最為常見(jiàn)的 RNA 修飾形式之一，定義為腺苷酸 N6原子上的甲基化修飾。m6A 甲基化廣泛發(fā)生在真核細(xì)胞mRNA 和非編碼 RNA ( ncRNA ) 中，常在 mRNA 上的 3’ 非翻譯區(qū) ( 3’ UTR ) 和終止密碼子處富集，其核心基序多為“GGm6ACU”。m6A 修飾通過(guò) writer、eraser 和 reader三類生物分子實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)可逆修飾，即 m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶，m6A 去甲基化酶和 m6A 甲基化閱讀蛋白。

m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶主要負(fù)責(zé)催化 m6A 修飾，包括m6A 甲基轉(zhuǎn)化酶樣蛋白 3 ( METTL3 )、類甲基轉(zhuǎn)移酶 14( METTL14 )，Wilms 腫瘤 1 相關(guān)蛋白 ( WTAP ) 和 RNA 結(jié)合基序蛋白 15 ( RBM15 ) 等。其中 METTL3 研究較多，它含有 S-腺苷甲硫氨酸 ( SAM ) 結(jié)合位點(diǎn)和行催化作用的DPPW 結(jié)構(gòu)域，與 METTL14 按照 1∶1 的比例結(jié)合形成二聚體，可被 WTAP 招募到靶 RNA 上催化甲基化。在 AML中，METTL3 / 14 異二聚化物通過(guò)增強(qiáng)原癌基因 MYB 和MYC mRNA 的 3’ 端的 m6A 甲基化而增加其穩(wěn)定性，使這兩個(gè)基因過(guò)表達(dá)。

m6A 去甲基化酶能夠去除 m6A 甲基化，如脂肪與肥胖相關(guān)蛋白 ( FTO ) 和人類中 ALKB 同源蛋白 5 ( ALKBH5 )。ALKBH5 可直接催化 m6A 形成腺嘌呤；FTO 則氧化使m6A 依次形成中間產(chǎn)物 hm6A ( N6-羥甲基腺苷 )、f6A( N6甲酰腺苷 ) 后再去除甲基，可在 AML 中通過(guò)降低錨蛋白重復(fù)序列和 SOCS 盒蛋白基因 2 ( ASB2 ) 和視黃酸受體 α 基因 ( RARA ) mRNA 的 m6A 豐度下調(diào) RARA 和 ASB2的表達(dá)，從而抑制全反式視黃酸 ( ATRA ) 誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞分化，發(fā)揮致癌作用。

m6A 甲基化閱讀蛋白可識(shí)別 RNA 甲基化修飾，以m6A 依賴的方式影響 mRNA 的穩(wěn)定性、代謝及翻譯。常見(jiàn)的 reader 有 YTH 域蛋白家族成員 ( YTHDF1，YTHDF2，YTHDF3，YTHDC1 和 YTHDC2 ) 和異質(zhì)核糖蛋白 HNRNP蛋白 ( HNRNPA2B1 和 HNRNPC )，真核起始因子 3 ( eIF3 )等。其中，YTH 域蛋白家族主要識(shí)別哺乳動(dòng)物的 DR( m6A ) CH ( D = A / G / U，R = A / G，H = A / C / U ) 模塊；5’ UTR 中含有 m6A 的 mRNA 可以直接結(jié)合 eIF3，以不依賴帽子結(jié)構(gòu)的方式進(jìn)行翻譯。

二、m6A 修飾相關(guān)酶與 OS

目前已有多種 m6A 修飾相關(guān)酶被證明可以影響 OS 細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲、凋亡等，以影響 OS 預(yù)后與治療( 表 1 )。

表1 m6A 修飾相關(guān)酶對(duì) OS 的影響Tab.1 Effects of m6A-modified enzymes on osteosarcoma

1. m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶與 OS：

( 1 ) METTL3：METTL3 包含一個(gè)甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域( MTD ) 和一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域，其 MTD 含 358～580 個(gè)氨基酸殘基。多項(xiàng)研究表明 METTL3 的異常表達(dá)與 OS 發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Miao 等研究顯示，在 OS 細(xì)胞中 METTL3的表達(dá)量和 m6A 甲基化程度均上升，而沉默甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3 則會(huì)下調(diào)淋巴增強(qiáng)因子-1 ( LEF1 ) mRNA 的表達(dá)和 m6A 修飾峰度，抑制 Wnt / β-catenin 信號(hào)通路的活性，進(jìn)而調(diào)控 OS 細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力。另外，Ling等發(fā)現(xiàn)，METTL3 和 m6A 識(shí)別蛋白 ELAVL1 還能以m6A 依賴的方式誘導(dǎo) OS 中 DRG1 的上調(diào)，DRG1 與細(xì)胞周期的正常進(jìn)行和大量基因的表達(dá)有關(guān)，沉默 DRG1 可抑制OS 細(xì)胞的活力和轉(zhuǎn)移能力。因此，沉默 METTL3 可通過(guò)降低 DRG1 的 mRNA 甲基化，從而干擾識(shí)別蛋白 ELAVL1識(shí)別 DRG1 mRNA，降低 DRG1 mRNA 的表達(dá) ( 圖 1a )。此外，有研究顯示 OS 細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷酶家族蛋白 2 抗體( ATAD2 ) 是 METTL3 的又一個(gè)下游靶標(biāo)，已知 ATAD2 參與多種腫瘤進(jìn)展，METLL3 表達(dá)量增加會(huì)使 ATAD2 過(guò)表達(dá)，引起 OS 細(xì)胞增殖和侵襲程度上升，但目前還不清楚 METLL3 是否通過(guò) m6A 調(diào)控 ATAD2 的表達(dá)量。

此外，METTL3 也可以與 METTL14 結(jié)合形成二聚體。METTL14 可以增加 caspase-3 的含量以促進(jìn) OS 細(xì)胞凋亡，而 METTL3 / 14 二聚體則通過(guò)識(shí)別下游 RNA 序列及翻譯后修飾來(lái)選擇性地調(diào)節(jié) RNA 甲基化程度，從而調(diào)控 OS 的發(fā)生和發(fā)展。

( 2 ) WTAP：WTAP 蛋白通過(guò)與 METTL3 / 14 二聚體嵌合，作為 m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的重要成分在 RNA 代謝的外轉(zhuǎn)錄組調(diào)控中發(fā)揮重要作用。Chen 等表示W(wǎng)TAP 通過(guò) m6A 甲基化修飾降低了 OS 細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子HMBOX1 基因的表達(dá)， WTAP / HMBOX1 部分通過(guò) PI3K /AKT 信號(hào)通路調(diào)節(jié) OS 細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，這與 OS 的預(yù)后不良相關(guān) ( 圖 1b )。具體表現(xiàn)為在 OS 中，WTAP 表達(dá)量增加，HMBOX1 的 mRNA 3’-UTR 區(qū)甲基化程度增加，HMBOX1 活性受到抑制，且表達(dá)下調(diào)。HMBOX1 的表達(dá)變化可作為影響 OS 患者總體生存的獨(dú)立預(yù)后因素。

2. m6A 去甲基化酶與 OS：

( 1 ) FTO：FTO 基因位于人類 16 號(hào)染色體長(zhǎng)臂上，在大腦和多種組織內(nèi)表達(dá)。FTO 通過(guò)去甲基化修飾影響肥胖并與多種癌癥相關(guān)，但在骨組織疾病方面，F(xiàn)TO 僅被證明與骨骼生長(zhǎng)和成骨細(xì)胞分化有關(guān)，而對(duì)于 FTO 在OS 中的調(diào)控則知之甚少。據(jù)報(bào)道，缺乏 FTO 酶活性會(huì)導(dǎo)致骨密度和骨礦物質(zhì)含量顯著降低，這與骨質(zhì)疏松癥狀相似。另外，F(xiàn)TO 在 R-2-羥基戊二酸 ( R-2HG )、miR-22-3p的作用下被抑制，降低癌基因 MYC 轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，其中，c-MYC 的降低可增加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化。Son 等則表明，F(xiàn)TO 通過(guò)與磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶 ( p-AMPK ) 的正反饋環(huán)路誘導(dǎo)輕度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激刺激成骨分化。

( 2 ) ALKBH5：ALKBH5 直接與底物 RNA 結(jié)合并去除m6A，在敲除 ALKBH5 后顯示多聚腺苷酸化的 mRNA 總體 m6A 甲基化水平升高，并且加速這些 mRNA 出核。人漿細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)化遷移基因 1 ( PVT1 ) 是在其它腫瘤中查明的致癌 lncRNA，通過(guò)作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源 RNA 或激活KAT2A 乙酰轉(zhuǎn)移酶等來(lái)促進(jìn)癌癥的發(fā)生和發(fā)展。有學(xué)者揭示 ALKBH5 通過(guò)與 PVT1 結(jié)合減少其 m6A 甲基化修飾，避免其被 YTHDF2 識(shí)別而被降解，增加了 lncRNA 的穩(wěn)定性。這表明除了轉(zhuǎn)錄因子 RUNX2，SOX2 等外，甲基化修飾也可能在 OS 中使 PVT1 表達(dá)量上調(diào)，因此或可作為對(duì) OS 患者有價(jià)值的預(yù)后指標(biāo)。此外，Yuan 等發(fā)現(xiàn) ALKBH5 誘導(dǎo)的去甲基化可通過(guò)直接或以 pre-miRNA-181b-1 間接的方式來(lái)抑制轉(zhuǎn)錄共激活因子相關(guān)蛋白 YAP的 mRNA 穩(wěn)定性和翻譯來(lái)抑制 OS 生長(zhǎng)。YAP 是已知的致癌因子，YTHDF1 m6A reader 可以促進(jìn)被甲基化的轉(zhuǎn)錄物翻譯，它的潛在靶標(biāo)是 YAP，過(guò)表達(dá) YTHDF1 可以消除過(guò)表達(dá) ALKBH5 對(duì) YAP 表達(dá)情況的影響。

3. m6A 甲基化閱讀蛋白與 OS：

( 1 ) YTH 家族：YTH 家族包括 YTH m6A 結(jié)合蛋白( YTHDF1-3 )、YTH 結(jié)構(gòu)域 1 ( YTHDC1 ) 和 YTH 結(jié)構(gòu)域 2( YTHDC2 )，YTH 結(jié)構(gòu)域采用包含 3 個(gè) α 螺旋和 6 個(gè) β 鏈的保守 α / β 折疊，6 個(gè) β 鏈形成桶狀褶皺，3 個(gè) α 螺旋排列在 β 鏈上形成疏水核心。YTH 家族成員可被 m6A招募，影響包括 mRNA 剪接、核輸出、翻譯和降解在內(nèi)的多種 mRNA 代謝過(guò)程，已有證據(jù)表明 YTH 家族在 OS 調(diào)控中發(fā)揮作用。例如，YTHDF2 在 OS 組織中受 miR-766靶向下調(diào)，抑制 OS 細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲能力，miR-766 過(guò)表達(dá)可抵消 YTHDF2 的作用。Zhang 等發(fā)現(xiàn)包括YTHDC1 在內(nèi)的多種 m6A 調(diào)控因子的表達(dá)在 OS 轉(zhuǎn)移樣本中有顯著差異，但具體調(diào)控機(jī)制尚不明晰。YTHDF1 受致癌轉(zhuǎn)錄因子 c-Myc 調(diào)控，下調(diào)后可抑制 Wnt / β-catenin通路活性或可以此促進(jìn) OS 的發(fā)生發(fā)展和化療耐藥。

( 2 ) eIF3：eIF3 約 800 kDa，是與 40S 核糖體和幾種 eIF 相互作用 ( 包括 eIF1 和 eIF4F 的 eIF4G 亞基 ) 而調(diào)控翻譯起始的最重要的 eIF 家族成員。Choi 等發(fā)現(xiàn)，eIF3b 沉默引起了腫瘤壞死因子受體超家族成員 21( TNFRSF21 ) 的上調(diào)，從而降低了 OS 細(xì)胞的活力并誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。TNFRSF21 含有一個(gè)被稱為死亡受體 6( DR6 ) 的死亡結(jié)構(gòu)域，可激活半胱氨酸蛋白酶 caspase-3促進(jìn)細(xì)胞凋亡。但 TNFRSF21 不是 eIF3 惟一的靶點(diǎn)，因?yàn)?TNFRSF21 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡速率低于 eIF3b 沉默誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡速率。Luo 等的研究也佐證了這一點(diǎn)，OS組織中 RPL34 mRNA 表達(dá)顯著上調(diào)或是受到了 eIF3 莖環(huán)結(jié)構(gòu)的激活。Gao 等表明，敲除 eIF3c 導(dǎo)致 U-2OS 細(xì)胞凋亡率增加，激活 SAPK / JNK 的激活信號(hào)通路并促進(jìn)CASP3 / 7，二者可均裂解細(xì)胞底物以完成細(xì)胞凋亡，但eIF3c 基因下調(diào)導(dǎo)致促凋亡的具體作用機(jī)制尚不清楚。

目前，仍有一些 m6A 修飾相關(guān)酶對(duì) OS 的影響未被發(fā)現(xiàn)，如 RBM15、KIAA1429、YTHDC1 / 2、HNRNPA2B1等，且已知 m6A 修飾相關(guān)酶對(duì) OS 的調(diào)控通路亟待研究。

三、m6A 與 OS 化療耐藥

化療對(duì)改善 OS 患者的預(yù)后有重要作用，主要包括手術(shù)治療后的輔助化療和局部治療前進(jìn)行的全身的新輔助化療，可實(shí)現(xiàn) 60% 以上的長(zhǎng)期無(wú)事生存率。但 OS 細(xì)胞的耐藥性是化療面臨的主要難題，化療耐藥的 OS 患者預(yù)后極差。m6A 甲基化修飾可通過(guò)調(diào)節(jié)多藥外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、藥物代謝酶、藥物靶標(biāo)等表達(dá)，并通過(guò)影響 DNA 的損傷修復(fù)、自噬等信號(hào)通路而與腫瘤耐藥密切相關(guān)。例如，OS化療的主流藥物有阿霉素、甲氨蝶呤、順鉑和異環(huán)磷酰胺等，m6A 甲基化的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)可影響這些 OS 化療藥物敏感性的耐藥性。有研究顯示，METTL3 / 14 使 TRIM7 mRNA 3’ 端發(fā)生 m6A 甲基化，經(jīng) YTHDF2 識(shí)別，可降解靶 RNA從而降低 TRIM7 的表達(dá)。而 TRIM7 可在 K184 位點(diǎn)泛素化 BRMS1 來(lái)下調(diào)其表達(dá)。BRMS1 能夠誘導(dǎo)上皮到間質(zhì)轉(zhuǎn)化 ( EMT ) 過(guò)程調(diào)節(jié) TRIM7 誘導(dǎo)的 OS 對(duì)阿霉素和甲氨蝶呤的敏感性 ( 圖 1c )。因此，OS 細(xì)胞中 TRIM7 mRNA 3’ 端m6A 甲基化水平的降低可增強(qiáng) OS 細(xì)胞的耐藥性。

已有不少研究顯示 m6A 甲基化的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)可影響阿霉素和順鉑腫瘤治療的耐藥性。Pan 等發(fā)現(xiàn)，METTL3使 miR-221-3P 上調(diào)，通過(guò)負(fù)調(diào)控與 miRNA 結(jié)合的 HIPK2 mRNA 的表達(dá)，從而促進(jìn)其靶標(biāo)血清膽堿酯酶 1 的表達(dá)，導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性。Zhang 等研究則說(shuō)明 TRIM11 mRNA 的 m6A 水平在鼻咽癌細(xì)胞中較高，可具 E3 泛素連接酶活性，與 Dvl 相關(guān)蛋白 Daple 結(jié)合并以p62 選擇性自噬的方式促進(jìn) Daple 的泛素化降解，從而上調(diào) Daple 負(fù)調(diào)控的 β-catenin 蛋白，進(jìn)一步上調(diào)多藥外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 ABCC9，導(dǎo)致順鉑排出細(xì)胞而減少藥物積蓄，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。此外，ALKBH5 在口腔鱗狀細(xì)胞癌中通過(guò)促進(jìn) FOXM1 和 NANOG 表達(dá)從而上調(diào)順鉑抗性細(xì)胞系中的 CSC 群體可增強(qiáng)順鉑耐藥性。盡管目前在 m6A 甲基化影響 OS 化療耐藥領(lǐng)域研究成果匱乏，但m6A 甲基化很可能成為降低 OS 化學(xué)耐藥性的靶點(diǎn)已毋庸置疑，可以依據(jù) m6A 甲基化對(duì)其它腫瘤耐藥的調(diào)節(jié)，窺見(jiàn)其對(duì) OS 化療耐藥的作用，為研究其機(jī)制提供思路。有研究指出 Wnt-β-catenin 信號(hào)通路的上調(diào)有利于抵抗 OS 化療中使用的阿霉素、順鉑和甲氨蝶呤，因此，m6A 甲基化可能調(diào)控經(jīng)典或非經(jīng)典 Wnt 通路中的關(guān)鍵分子以控制Wnt-β-catenin 途徑水平，從而調(diào)節(jié) OS 細(xì)胞化療耐藥性。此外，發(fā)現(xiàn)可能通過(guò) m6A 水平升高促使化學(xué)耐藥性癌細(xì)胞中雌激素相關(guān)受體 ERRγ pre-mRNA 的剪接與蛋白表達(dá)，進(jìn)一步與 ABCB1 ( 藥物外排的重要的 ABC 膜轉(zhuǎn)運(yùn)體 )的啟動(dòng)子結(jié)合以增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄，降低藥物儲(chǔ)蓄；ERRγ 或通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪酸氧化限速酶 CPT1B 以上調(diào)此過(guò)程，抑制細(xì)胞凋亡，從而增強(qiáng)癌細(xì)胞的耐藥性。而 ERRα 能夠通過(guò)調(diào)節(jié) ABCB1 的轉(zhuǎn)錄和 mRNA 穩(wěn)定性來(lái)調(diào)節(jié) OS 細(xì)胞對(duì)阿霉素和順鉑的耐藥?？梢院侠硗茰y(cè) m6A 也可影響 ERRα的表達(dá)而調(diào)節(jié) OS 細(xì)胞化學(xué)耐藥。針對(duì)以上發(fā)現(xiàn)，可以對(duì)m6A 是否參與調(diào)控 Wnt 通路以及 ERRα mRNA 的 m6A 水平對(duì)其表達(dá)的影響繼續(xù)研究。此外，m6A 甲基化是否影響 OS 細(xì)胞外排轉(zhuǎn)運(yùn)化療藥物、調(diào)節(jié)藥物靶標(biāo)水平、控制藥物降解以及影響 OS 干細(xì)胞產(chǎn)生等有待進(jìn)一步篩選與研究，以填補(bǔ) m6A 對(duì) OS 化療耐藥性調(diào)控方面的空白。

四、m6A 與 OS 免疫治療

腫瘤免疫治療是指通過(guò)激活或增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和免疫反應(yīng)來(lái)殺滅腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織，包括基于程序性細(xì)胞死亡蛋白 1 ( PD-1 ) 及配體 PD-L1 的免疫檢查位點(diǎn)阻斷療法 ( ICB 療法 )、細(xì)胞因子療法、治療性腫瘤疫苗等。其中PD-1 主要表達(dá)于 CD8T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜，與配體 PDL1 結(jié)合可抑制 T 細(xì)胞的活化，從而引起腫瘤及其微環(huán)境的免疫耐受。研究表明 OS 細(xì)胞系中 PD1 / PDL1 表達(dá)上調(diào)，并與轉(zhuǎn)移腫瘤的發(fā)生正相關(guān)。針對(duì) PD-1 / PD-L1 的抑制劑，可增加內(nèi)源性抗腫瘤的活性，在轉(zhuǎn)移性 OS 小鼠模型中，聯(lián)合抗細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞抗原 4 ( CTLA-4 ) 可進(jìn)一步增強(qiáng) T 細(xì)胞功能。

現(xiàn)有研究結(jié)果表明，m6A 參與了抗病毒效應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)通路中免疫細(xì)胞的分化與成熟 ( 圖 1d )，因此 m6A 調(diào)節(jié)劑或可干預(yù)腫瘤臨床免疫治療。例如，缺乏 METTL3 可高度特異性誘導(dǎo)干擾素刺激基因；缺乏 YTHDF1 促進(jìn)了樹(shù)突狀細(xì)胞 ( DC ) 上腫瘤抗原的交叉呈遞，改善了 PD-1抑制劑的治療效果；缺乏 YTHDF3 的小鼠在病毒感染后 IFN-α 和 INF-β 表達(dá)量增加；WTAP 的表達(dá)與 T 淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)顯著相關(guān)，從而抑制免疫細(xì)胞的產(chǎn)生；在敲除黑素瘤小鼠模型中 m6A 去甲基酶 ALKBH5 和 FTO 可增強(qiáng)抗PD-1 抗體免疫治療的效果，延長(zhǎng)小鼠的生存時(shí)間。目前，m6A 在 OS 免疫治療中的研究還很少，但可依據(jù) m6A對(duì)其它腫瘤免疫治療影響的思路，從 m6A 修飾相關(guān)酶對(duì)抗原的交叉呈遞，免疫細(xì)胞的增殖、分化、成熟，腫瘤微環(huán)境物質(zhì)代謝，腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞種類與水平，免疫治療檢查點(diǎn)以及治療性腫瘤疫苗與佐劑的效用等方面著手，繼續(xù)研究 m6A 的具體作用，從而可以通過(guò) m6A 靶點(diǎn)增強(qiáng) OS免疫治療，并利用修飾靶點(diǎn)的 m6A 水平建立模型以評(píng)估治療效果。

圖1 m6A 在 OS 中的功能 a：m6A 對(duì) OS 的發(fā)生發(fā)展；b：m6A對(duì) OS 患者的預(yù)后；c：m6A 對(duì) OS 的化療耐藥；d：m6A 對(duì) OS 的免疫治療Fig.1 Functions of m6A in OS a: m6A on OS occurrence and development; b: m6A on OS prognosis; c: m6A on OS chemoresistance; d: m6A on OS immunotherapy

五、m6A 與 OS 預(yù)后

癌細(xì)胞可以通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子重編程、上皮 - 間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、缺氧和化療等多種方式重編程到原始癌細(xì)胞狀態(tài)造成預(yù)后不良。研究表明 m6A 也可以通過(guò)上述方式與 OS 預(yù)后不良顯著相關(guān)。例如，F(xiàn)TO 的低表達(dá)可能通過(guò)體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞周期途徑與 OS 不良預(yù)后相關(guān)。Li 等表明，多種 m6A 相關(guān)基因的異常調(diào)控可能促進(jìn)有絲分裂和G2M 檢查點(diǎn)通路，從而導(dǎo)致 OS 預(yù)后不良。Wang 等探討了數(shù)個(gè) m6A 調(diào)控基因 ( 但不包括 FTO 和 METTL14 ) 的表達(dá)水平與 88 例 OS 患者無(wú)轉(zhuǎn)移生存率之間的關(guān)系。結(jié)果表明，在 OS 患者中，高水平的 METTL13、ALKBH5、FZD8、KLF4 和低水平的 BMP2 和 SMAD5，傾向于與更差的無(wú)轉(zhuǎn)移生存率相關(guān)。這表明 m6A 修飾相關(guān)酶可以作為OS 預(yù)后的標(biāo)志，幫助臨床檢測(cè)評(píng)估與針對(duì)治療。

六、總結(jié)與展望

目前，對(duì) m6A 甲基化修飾在 OS 中的研究日益加深，各項(xiàng)研究均表明 m6A 通過(guò)影響細(xì)胞增殖分化、細(xì)胞信號(hào)通路、細(xì)胞耐受和細(xì)胞凋亡而調(diào)控 OS 的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和耐藥。筆者在總結(jié) m6A 修飾相關(guān)酶基本功能及其對(duì) OS 發(fā)生發(fā)展、治療與預(yù)后影響的基礎(chǔ)上，整理了 m6A 對(duì) OS 化療耐藥、免疫治療、預(yù)后方面的調(diào)控，在當(dāng)前相關(guān)研究較少的情況下，提供了開(kāi)展深入研究的建議與思路。實(shí)際上，除 OS 外，還有許多骨組織疾病，如骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等都被認(rèn)為與 m6A 相關(guān)，為 m6A 在骨組織中的調(diào)控提供了研究思路，m6A 在其它多種腫瘤中的調(diào)控也給出更多研究方向。Wang 等分析了 OS 干細(xì)胞的 m6A 甲基化組，鑒定出 OS 干細(xì)胞中一些 m6A 相關(guān)酶的表達(dá)及多重耐藥 OS 細(xì)胞系中 2372 個(gè)高甲基化和 3229個(gè)低甲基化 m6A 峰，有望成為 OS 的新治療靶點(diǎn)。但一方面，對(duì) m6A 酶系統(tǒng)的作用機(jī)制仍有待探索，例如，有研究發(fā)現(xiàn) YTH 家族的多個(gè)成員可結(jié)合 m5C、m1A 調(diào)控下游基因表達(dá)，因此，YTH 家族是否均可歸屬與 m6A 酶系統(tǒng)有待進(jìn)一步證實(shí)；另一方面，盡管大量研究已經(jīng)證實(shí)多種 m6A 調(diào)控因子可作為 OS 的潛在生物標(biāo)志物，但由于m6A 的動(dòng)態(tài)可逆性，其特異度和敏感度較低，難以通過(guò)臨床驗(yàn)證。因此，將 m6A 研究成果應(yīng)用于臨床治療尚存距離。進(jìn)一步了解 m6A 對(duì) OS 的調(diào)控機(jī)制及其表達(dá)特性，有助于開(kāi)發(fā)具有高度選擇性靶向 m6A 及相關(guān)蛋白質(zhì)的藥物，并對(duì)于 OS 的早期診斷和預(yù)后判斷具有重要意義。期待隨著研究的深入和醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，RNA m6A 甲基化修飾可以成為 OS 診斷與治療的重要理論基礎(chǔ)。