不同提取方法對氯化丁基膠塞中游離硫測定的影響研究

張 華,李 揮,徐業(yè)朝,陳 明,李岱岳,杜志斌

(1.河北省藥品職業(yè)化檢查員總隊，河北 石家莊 050024;2.河北省藥品醫(yī)療器械檢驗研究院，河北 石家莊 050200;3.河北省藥品審評中心，河北 石家莊 050024)

引言

藥用丁基膠塞，特別是鹵化丁基膠塞由于其固有的潔凈度、生物特性、密封性和化學(xué)穩(wěn)定性等，在醫(yī)藥包裝領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。為提高膠塞的密封性和穩(wěn)定性，在其加工過程中會加入硫化劑、抗氧化劑以及增塑劑等多種助劑。研究指出，膠塞中微量的助劑對膠塞與藥物相容性具有一定的影響，鹵化丁基膠塞硫化處理過程中不可避免地會在膠塞內(nèi)殘存一些未被化學(xué)鍵合的反應(yīng)剩余物、不參與反應(yīng)的物質(zhì)及熱分解的產(chǎn)物如游離硫等，硫磺的應(yīng)用歷史悠久，是最重要的硫化劑之一，而游離硫可能會與藥物發(fā)生反應(yīng)，影響和污染藥物，隨藥物進(jìn)入人體后可能會引起不良反應(yīng)，危害健康[1-4]。

當(dāng)前國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T15251-2008中測定硫含量的方法包括亞硫酸鈉和銅螺旋法，這兩種方法均有一定的局限性，不僅實際操作復(fù)雜、耗費時間長，而且只適用于常量分析。隨著分析測試技術(shù)的發(fā)展，用質(zhì)譜法電位滴定法以及色譜法測定游離硫含量的研究不斷增多[5-8]。本研究考察了游離硫的四種提取方法，并使用高效液相色譜法對提取液進(jìn)行測定，實驗對比了不同提取方法對測定結(jié)果的影響。對鹵化丁基膠塞的穩(wěn)定性、安全性評價提供了參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀(Agilent公司)，MS104TS電子天平(梅特勒-托利多)，eppendorf移液槍。

1.2 包材與試劑

對照品游離硫(純度98%)，河北旭隆化工有限公司；甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮均為色譜純。氯化丁基膠塞是由某廠家提供的4種產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：Thermo Acclaim120 C18色譜柱(5μm，4.6 mm×250 mm)，流動相：甲醇(A)和水(B)作流動相，梯度洗脫(0～7min，95%A；7～15min，95%A→100%A；15～30min，100%A；30～30.1min，100%A→95%A;30.1～35min,95%A)；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：220nm，紫外檢測器；進(jìn)樣量：10μL。在該色譜條件下，游離硫?qū)φ掌啡芤簼舛染鶠?0μg/mL時，其保留時間為15.326min，保留時間3min附近的峰為溶劑峰，見圖1。

圖1 游離硫?qū)φ掌犯咝б合嗌V圖

2.2 對照品溶液配制

精密移取游離硫的標(biāo)準(zhǔn)品于量瓶中，同時加二氯甲烷-無水乙醇(1∶1)配成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；用二氯甲烷-無水乙醇(1∶1)依次稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成分別為80、40、20、10、5、1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。同時配制空白試劑。

2.3 不同提取方法

(1)方法1：參考王麗[9]等人的研究方法，于磨口硼硅玻璃燒瓶中稱定約2g樣品，加入20mL無水乙醇-正己烷-丙酮(4∶3∶3)，煮沸回流4h，放冷，定容至20 mL。微孔濾膜過濾即得。

(2)方法2：參考魏君[10]等人的研究方法，選取甲醇-異丙醇(1：1)作為提取溶劑，提取條件為50℃，4h。

(3)方法3：參考馮靖[11]等人的研究方法，使用20mL二氯甲烷-無水乙醇(1∶1)作為提取溶劑，煮沸回流4h，放冷，定容至20 mL，經(jīng)微孔濾膜過濾即得。

(4)方法4：參考李婷婷[12]等人的研究方法，選取20mL甲醇作為提取試劑，超聲30min，靜置24h，定容至20mL，經(jīng)微孔濾膜過濾即得。

2.4 線性關(guān)系、定量限和檢測限

以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程，線性范圍等見表1。精密量取2.2節(jié)中對照品溶液適量，倍比稀釋，按2.1節(jié)中色譜條件進(jìn)樣測定，分別以信噪比3∶1和10∶1計算檢測限和定量限。結(jié)果見表1。

表1 回歸方程與線性范圍

2.5 精密度和回收率

取2.2節(jié)下質(zhì)量濃度為20μg/mL的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積。結(jié)果表明游離硫峰面積的RSD為0.5%(n=6)。精密度良好。按2.3中實驗條件分別提取質(zhì)量濃度為20μg/mL的樣品溶液，每個樣品平行制備3份，計算回收率，實驗結(jié)果見表2。

表2 不同提取方法中游離硫的回收率實驗結(jié)果

2.6 樣品含量測定

分別取適量膠塞按2.3節(jié)中不同的提取方法制備供試品溶液，再按2.1節(jié)色譜條件進(jìn)樣測定，平行測定3次，記錄峰面積并以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算膠塞中游離硫的含量，取平均值。結(jié)果見表3，每組平行數(shù)據(jù)的峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。

表3 不同批次氯化丁基膠塞中游離硫不同提取方法的測定結(jié)果(μg/mL)

3 結(jié)果與討論

3.1 測定結(jié)果分析

經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)，在四種膠塞中均提取到游離硫，其中鍍膜鹵化丁基膠塞中游離硫含量較少，可能與膠塞的生產(chǎn)工藝有關(guān)。通過比較4種不同提取方法的測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)：超聲處理的樣品和加熱至50℃處理的樣品中游離硫的測定結(jié)果數(shù)值較小，其與煮沸回流處理的樣品相比提取不充分。除此之外，所選用的提取溶劑對膠塞的膨脹程度以及提取溶劑的極性也會顯著影響提取結(jié)果。圖2為同一種膠塞用方法3和方法4分別進(jìn)行提取，結(jié)果均檢測到了游離硫，游離硫保留時間分別為15.377min和15.386min，方法3煮沸回流提取效果明顯優(yōu)于方法4。色譜圖上3min附近的峰為溶劑峰，因為兩種方法所用提取溶劑不同，所以溶劑峰強(qiáng)度有差別。

圖2 不同提取方法提取氯化丁基膠塞樣品的HPLC色譜圖

3.2 小結(jié)

考察了不同提取方法測定4種氯化丁基膠塞中游離硫的含量，發(fā)現(xiàn)用煮沸回流的提取方法提取效果較好。本研究為評價藥用氯化丁基膠塞的穩(wěn)定性、安全性提供了參考。由于鹵化膠塞使用時所接觸的藥液成分各不相同，在選用此類膠塞時還應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品自身特性進(jìn)行具體的考察。