大腸桿菌病對雞肝臟和脾臟組織結(jié)構(gòu)的影響

礎(chǔ) 魯

內(nèi)蒙古自治區(qū)阿拉善左旗農(nóng)牧區(qū)生態(tài)管理綜合行政執(zhí)法局，內(nèi)蒙古巴彥浩特 750300

雞大腸桿菌病是指部分或全部由大腸埃希氏菌所引起的局部或全身性感染的疾病，其抗原性復(fù)雜，血清型多樣，臨床癥狀和病理變化多變。從近年來的禽病報(bào)道可以看出，大腸桿菌病已經(jīng)成為影響?zhàn)B雞業(yè)發(fā)展的主要疾病之一。國內(nèi)外對雞大腸桿菌病的病原學(xué)﹑臨床癥狀及防治方面的報(bào)道很多，但對其病理組織學(xué)變化的研究及發(fā)病機(jī)理方面的相關(guān)性研究則鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)選用通過細(xì)菌學(xué)確診的臨床自然病例，對其肝臟和脾臟病理組織學(xué)變化進(jìn)行觀察和研究，并通過對感染大腸桿菌的病雞的病理學(xué)變化的觀察，以充實(shí)大腸桿菌病的資料庫，為病理組織學(xué)文庫建設(shè)增添新的內(nèi)容，從而為進(jìn)一步研究和控制大腸桿菌病提供可靠的資料和理論基礎(chǔ)。同時(shí)，證明大腸桿菌及其代謝產(chǎn)物對機(jī)體的病理作用及機(jī)體在發(fā)生大腸桿菌感染時(shí)所產(chǎn)生的組織應(yīng)答反應(yīng)，從而為藥理學(xué)、藥代動力學(xué)的研究提供依據(jù)，給臨床預(yù)防治療該病提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物

本試驗(yàn)選用自然感染大腸桿菌，經(jīng)細(xì)菌學(xué)診斷為大腸桿菌病的50 只病雞(30 ～50 日齡)，均來自洛陽市周邊縣幾個雞場。由河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院禽病研究室提供。

1.1.2 試驗(yàn)儀器

220-A0 型電熱恒溫干燥箱， MDJ-自動磨刀機(jī)，SD-2 型推拉式三用切片機(jī)，小型三用水箱， XS-型顯微鏡（OLYMPUS）。

1.1.3 試劑

甲醛溶液分析純(37%～40%)，無水乙醇分析純試劑（99.7%），二甲苯分析純試劑（99.0%），石蠟（熔點(diǎn)55 ～59 ℃），蘇木精，伊紅（醇溶液），鹽酸分析純試劑（36%～38%），中性樹膠，草酸銨結(jié)晶紫，碘液，蕃紅染色液（?。?，普通瓊脂平板、麥康凱平板和遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基平板。

1.2 方法

1.2.1 臨床癥狀

雞胚死亡發(fā)生在孵化過程，特別是孵化后期，病變卵黃呈干酪樣或黃棕色水樣物質(zhì)，卵黃膜增厚。病雛雞主要表現(xiàn)為精神萎靡，排出綠白色稀糞和逐漸消瘦死亡或短期死亡，蛋雞主要表現(xiàn)產(chǎn)蛋停止，精神沉郁，腹瀉，糞便中混有蛋清、凝固蛋白及卵黃小塊，具有惡臭味 。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)檢測

根據(jù)不同的病型采取病料（肝﹑脾﹑心﹑血﹑氣管分泌物等）進(jìn)行涂片，革蘭氏染色法染色后鏡檢，可見革蘭氏陰性的中等大小桿菌，進(jìn)一步將病料分別接種到普通瓊脂平板、麥康凱和遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基平板上，置37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h。在普通培養(yǎng)基上則為無色菌落，麥康凱平板上為粉紅色菌落，遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基平板上則為紅色菌落，并見閃爍金屬光澤，即可判斷為大腸桿菌感染。

1.2.3 試驗(yàn)步驟

病料經(jīng)過選取、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片及附貼、染色等組織切片技術(shù)制片后利用OLYMPUS 顯微鏡分別在10 倍光鏡下觀察其組織病理變化，并利用電腦顯微互動采集圖片。

2 結(jié)果

與正常組織相比較，解剖學(xué)上的變化有肝臟腫大，肝包膜增厚，在肝表面形成的纖維素性膜，呈不透明黃白色，易剝脫。病情輕的局部發(fā)生，病情嚴(yán)重的整個肝表面被此膜包裹，把此膜剝脫后肝呈紫褐色，急性死亡病雞肝臟嚴(yán)重淤血。脾臟腫大，呈紅褐色，表面有針尖大小的壞死灶，質(zhì)地脆弱。組織學(xué)上的變化有放射狀肝細(xì)胞素紊亂變?yōu)闊o規(guī)則形，竇狀隙擴(kuò)張，充滿紅細(xì)胞，中央靜脈充血，肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性。脾竇充血，邊緣不明顯，紅髓脾索細(xì)胞索斷裂，白髓脂肪變性，白髓脾小結(jié)細(xì)胞松散，脾小體結(jié)構(gòu)消失，淋巴細(xì)胞減少，網(wǎng)狀細(xì)胞增生。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)致病性大腸桿菌進(jìn)入雞的上呼吸道后，首先附著氣管上皮，此時(shí)，健康的雞可通過呼吸道黏膜上皮的黏液分泌及纖毛的擺動，將大腸桿菌清除，防止侵入深部。當(dāng)侵入肺部時(shí)，大腸桿菌從肺部毛細(xì)血管進(jìn)入血液循環(huán)，引起菌血癥，當(dāng)機(jī)體抵抗力減弱時(shí)，大腸桿菌大量繁殖，引起敗血癥。

從病理組織學(xué)變化看，急性死亡的雞主要出現(xiàn)急性敗血癥和亞急性纖維素炎的變化，主要特征是在各個臟器上均能看到細(xì)菌團(tuán)塊，組織發(fā)生充血、出血和水腫并有大量的細(xì)胞浸潤。在多數(shù)臟器的表面附有纖維蛋白滲出物，這可能是機(jī)體對致病因素侵入機(jī)體所表現(xiàn)出來的應(yīng)答反應(yīng)。當(dāng)細(xì)菌侵入后，機(jī)體主要以粒細(xì)胞的滲出和吞噬作用作為防御反應(yīng)的第一步，當(dāng)侵入機(jī)體的細(xì)菌數(shù)量較多、毒力較強(qiáng)時(shí)，超過了機(jī)體的抵抗力，可引起疾病惡化和死亡。由病理組織學(xué)變化看，與正常肝臟組織結(jié)構(gòu)相比較，在正常組織切片中肝臟呈條索狀，而與豬、貓、駱駝相比較，雞的肝小葉分葉不明顯，因?yàn)楦涡∪~的輪廓清晰度與小葉間的結(jié)締組織的發(fā)達(dá)程度有關(guān)，所以雞肝臟發(fā)生病變時(shí)在肝小葉很難分辨其病變輕重的。慢性死亡的雞，病變由急性、亞急性炎癥轉(zhuǎn)到慢性階段，主要表現(xiàn)為臟器表面的纖維蛋白性滲出物發(fā)生機(jī)化，在病理切片中發(fā)現(xiàn)病程稍長點(diǎn)的雞肝臟切片中的枯否氏細(xì)胞明顯減少，而病程短的急性型枯否氏細(xì)胞相對較多，這說明了在整個病程中枯否氏細(xì)胞吞噬作用是很強(qiáng)的。脾臟外觀多腫脹，其原因是正常情況下，健康雞的脾小結(jié)數(shù)量較少，體積較小，當(dāng)發(fā)生體液免疫時(shí)脾小結(jié)數(shù)量增多，體積增大。包括脾臟內(nèi)組織細(xì)胞的變性壞死，都是促成脾臟腫大的輔助因素。從本試驗(yàn)來看感染大腸桿菌病雞肝臟和脾臟組織結(jié)構(gòu)的病理變化可能與機(jī)體的防御能力增強(qiáng)，使細(xì)菌局限于機(jī)體的局部，引起機(jī)體局部組織的漸進(jìn)性病變有關(guān)。

本試驗(yàn)對病雞臨床癥狀和細(xì)菌學(xué)檢測基礎(chǔ)上只用肉眼觀察解剖學(xué)變化和低倍數(shù)光學(xué)顯微鏡來觀察和分析肝臟和脾臟組織學(xué)變化。因顯微鏡倍數(shù)較低，所觀察到的結(jié)構(gòu)有限，下一步需要在電子顯微鏡觀察和做其他相關(guān)分子生物學(xué)試驗(yàn)研究，更有利于該病深入細(xì)致地研究分析和治療，明確發(fā)病機(jī)理的基礎(chǔ)上，制定出較為合理的預(yù)防和治療措施，以減少養(yǎng)殖戶的損失，提高養(yǎng)殖效益。

4 結(jié)論

4.1 急性死亡病雞的肝臟病理組織學(xué)變化是肝臟嚴(yán)重淤血，肝細(xì)胞素紊亂，竇狀隙擴(kuò)張，充滿紅細(xì)胞。

4.2 急性死亡病雞的脾臟病理組織學(xué)變化脾竇充血，脾小體結(jié)構(gòu)消失。

4.3 慢性的大腸桿菌病表現(xiàn)為各臟器表面的纖維蛋白滲出物發(fā)生機(jī)化，脾臟有輕微的腫脹。

4.4 大腸桿菌致病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。上述結(jié)果只是在組織學(xué)方面說明了感染致病性大腸桿菌病雞的肝臟和脾臟組織結(jié)構(gòu)發(fā)生的變化，從而降低機(jī)體抵抗力而導(dǎo)致發(fā)病。與其相關(guān)的其他致病機(jī)理有待進(jìn)一步研究。