• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)模型大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究

    2022-05-17 14:57:50董娜娜陳曉蘭鄧鉍莉萬(wàn)靜謝樹(shù)才胡娟羅晨月曹國(guó)瓊
    中國(guó)藥房 2022年9期
    關(guān)鍵詞:機(jī)制

    董娜娜 陳曉蘭 鄧鉍莉 萬(wàn)靜 謝樹(shù)才 胡娟 羅晨月 曹國(guó)瓊

    中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2022)09-1068-07

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.09.08

    摘 要 目的 研究豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)(ISPBS)模型大鼠的保護(hù)作用,并探究其作用機(jī)制。方法 將119只大鼠隨機(jī)分為正常組(生理鹽水)、假手術(shù)組(生理鹽水)、模型組(生理鹽水)、尼莫地平組(陽(yáng)性對(duì)照組,5 mg/kg)和豬牙皂皂苷低、中、高劑量組(3.21、6.42、12.84 mg/kg),每組17只。除正常組外,其余各組大鼠均采用高脂飼料飼養(yǎng)+線栓法復(fù)制ISPBS模型。測(cè)定或觀察大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)學(xué)變化和血清中血液流變學(xué)指標(biāo)[全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、卡松黏度]、血脂四項(xiàng)[三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)]、炎癥因子[白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、IL-10、腫瘤壞死因子α(TNF-α)]及腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)[丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)]變化情況,并測(cè)定腦組織中B淋巴細(xì)胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 與正常組比較,模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、5項(xiàng)血清指標(biāo)(TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β)、血液流變學(xué)指標(biāo)和腦組織中MDA、NO含量以及Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.01),血清中HDL-C、IL-10水平和腦組織中SOD活性、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01),腦組織出現(xiàn)核固縮、胞膜碎裂等明顯病變。與模型組比較,各給藥組上述指標(biāo)均不同程度改善,其中豬牙皂皂苷高劑量組大鼠的上述指標(biāo)變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 豬牙皂皂苷對(duì)ISPBS模型大鼠具有較好的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與減少氧化損傷、減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。

    關(guān)鍵詞 豬牙皂皂苷;痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng);氧化損傷;機(jī)制

    Protective effect and mechanism of saponins from Gleditsia sinensis on ischemic stroke with phlegm and blood stasis model rats

    DONG Nana,CHEN Xiaolan,DENG Bili,WAN Jing,XIE Shucai,HU Juan,LUO Chenyue,CAO Guoqiong(School of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China)

    ABSTRACT ? OBJECTIVE To study the protective effects of saponins from Gleditsia sinensis on ischemic stroke with phlegm and blood stasis(ISPBS) model rats, and to explore its mechanism. METHODS Totally 119 rats were randomly divided into normal group (normal saline), sham operation group (normal saline), model group (normal saline), nimodipine group (positive control group, 5 mg/kg), G. sinensis saponin low-dose, medium-dose and high-dose groups (3.21, 6.42 and 12.84 mg/kg), with 17 rats in each group. Except for normal group, other groups were all given high-fat diet+suture-occluded method to induce ISPBS model. The neurological function score, water content of brain tissue, pathological morphology of brain tissue, the changes of hemorheology indexes ?(whole blood viscosity, erythrocyte aggregation index, Casson-viscosity), four items of blood lipid [triacylglycerol (TG), total cholesterol (TC), low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C)] and inflammatory factors in serum and oxidative stress indexes [malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO), superoxide dismutase (SOD)] in brain tissue were determined or observed in rats. The protein expressions of B lymphocytoma 2 (Bcl-2), Bcl-2 associated X protein (Bax) and caspase-3 in cerebral tissue were also detected. RESULTS Compared with normal group, the score of nerve function, 5 kinds of serum indexes (TC, TG, LDL-C, TNF-α, IL-1β), hemorheology indexes, the contents of MDA and NO and protein expressions of Bax and caspase-3 in cerebral tissue were all increased significantly in model group (P<0.01). The levels of HDL-C and IL-10 in serum, SOD activity and protein expression of Bcl-2 in cerebral tissue were decreased significantly (P<0.01), and obvious lesions such as nuclear pyknosis and cell membrane fragmentation occurred in brain tissue. Compared with model group, above indexes of administration groups were improved to different extents, among which there was statistical significance in above indexes of G. sinensis saponin high-dose group (P<0.01). CONCLUSIONS Saponin from G. sinensis has a good protective effect on ISPBS model rats. Its mechanism may be associated with reducing oxidative damage, reducing the production of pro-inflammatory mediators and resisting neuronal apoptosis.

    KEYWORDS ? saponins from Gleditsia sinensis; ischemic stroke with phlegm and blood stasis; oxidative injury; mechanism

    中風(fēng)是全球致殘和致死的主要原因之一,人口老齡化的加劇將導(dǎo)致中風(fēng)發(fā)生率的升高[1]。據(jù)全球疾病負(fù)擔(dān)研究數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)總體中風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為39.9%,位居全球首位[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為,中風(fēng)是在內(nèi)傷的基礎(chǔ)上加上飲食不規(guī)律、情志不暢、過(guò)度疲勞等引起的臟腑陰陽(yáng)失調(diào)[3];痰瘀互結(jié)是中風(fēng)的主要病機(jī)和致病因素,痰濁、瘀血貫穿了中風(fēng)發(fā)生發(fā)展的全過(guò)程[4]。因此,目前中醫(yī)治療中風(fēng)的方法主要為祛痰和開(kāi)竅。

    豬牙皂為豆科植物皂莢Gleditsia sinensis Lam.的干燥不育果實(shí),具有祛痰開(kāi)竅、消腫散結(jié)之功效[5]。據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》(一部)記載,以豬牙皂為主藥、配以鵝不食草和細(xì)辛制成的通關(guān)散,吹鼻可治療痰濁阻竅所致的氣閉神昏、牙關(guān)緊閉、不省人事等癥[5]。研究表明,經(jīng)鼻給藥是藥物到達(dá)大腦最快、最直接的途徑,以該方式給藥后藥物可以無(wú)創(chuàng)方式通過(guò)血腦屏障[6]。本課題組前期研究了豬牙皂不同萃取部位經(jīng)鼻給藥后對(duì)缺血缺氧模型小鼠血腦屏障通透性的影響,發(fā)現(xiàn)芳香類成分和皂苷類成分具有較好的“通關(guān)開(kāi)竅、醒腦復(fù)神”作用[7]。因此,本研究在前期研究基礎(chǔ)上考察豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)(ischemic stroke with phlegm and blood stasis,ISPBS)模型大鼠的保護(hù)作用和可能機(jī)制,為豬牙皂皂苷鼻內(nèi)給藥制劑的研制和應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用的主要儀器有Multiskan Mk3型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司),BA200Digita型顯微攝像系統(tǒng)(麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司),DZKW-4型恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司),LG-R-80B型血液黏度儀(北京中科富邦醫(yī)療設(shè)備有限公司),AUW12D型分析天平(日本Shimadzu公司)。

    1.2 主要藥品與試劑

    本研究所用的主要藥品與試劑有:豬牙皂皂苷(本實(shí)驗(yàn)室按文獻(xiàn)[7]方法自制,1 g豬牙皂生藥可以得到57 mg皂苷),尼莫地平片(亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,批號(hào)170606,規(guī)格20 mg/片),三酰甘油(triacylglycerol,TG)試劑盒、總膽固醇(total cholesterol,TC)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)試劑盒、一氧化氮(nitric oxide,NO)試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào)分別為A110-1-1、A111-1-1、A113-1-1、A112-1-1、A001-1、A003-1、A012),大鼠白細(xì)胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒、大鼠IL-10 ELISA試劑盒、大鼠腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)ELISA試劑盒(上海茁彩生物科技有限公司,批號(hào)分別為ZC-36391、ZC-36379、ZC-37624),兔源B淋巴細(xì)胞瘤2(Bcl-2)抗體(美國(guó)Santa Cruz公司,批號(hào)sc-492),兔源Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)抗體、兔源半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)抗體(美國(guó)CST公司,批號(hào)分別為2772s、9662s),辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔/小鼠免疫球蛋白G(Ig G)二抗(武漢博士德生物工程有限公司,批號(hào)BST13J17B16G56),蘇木精染液、伊紅染液(武漢賽維爾生物技術(shù)有限公司,批號(hào)分別為G1005-1、G1001),磷酸鹽緩沖液(PBS,北京索萊寶科技有限公司,pH 7.2~7.4),多聚甲醛(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格,水為純凈水。

    1.3 動(dòng)物

    本研究所用動(dòng)物為SPF級(jí)SD雄性大鼠,共119只,體質(zhì)量為250~280 g,購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(湘)2019-0014,合格證號(hào)為430726210100322185。所有大鼠均飼養(yǎng)于12 h光照/12 h黑暗、溫度(25±1) ℃、相對(duì)濕度(50±10)%的動(dòng)物房?jī)?nèi),飼養(yǎng)期間自由攝食、飲水。實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。

    2 方法

    2.1 分組、造模與給藥

    將119只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分成正常組(生理鹽水)、假手術(shù)組(生理鹽水)、模型組(生理鹽水)、尼莫地平組(陽(yáng)性對(duì)照組,5 mg/kg,劑量按藥品說(shuō)明書(shū)中成人劑量換算后制定)和豬牙皂皂苷低、中、高劑量組[3.21、6.42、12.84 mg/kg;劑量參考2020版《中國(guó)藥典》(一部)豬牙皂成人每日用量(1~1.5 g),并按照體表面積法[8]換算成大鼠的每日用量],每組17只。正常組大鼠采用普通飼料喂養(yǎng);其余各組大鼠均給予高脂飼料(由3.5%膽固醇、10%豬油、0.2%丙硫尿嘧啶、0.5%膽酸鈉、10%白糖、75.8%基礎(chǔ)飼料組成)喂養(yǎng)[4,9]。大鼠飼養(yǎng)28 d后,眼眶取血,檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)及血脂四項(xiàng)的變化,若發(fā)現(xiàn)各指標(biāo)均異常則認(rèn)為痰瘀互結(jié)型大鼠造模成功[4]。正常組、假手術(shù)組、模型組和豬牙皂皂苷組大鼠通過(guò)鼻腔給予等體積生理鹽水或相應(yīng)藥物,尼莫地平組大鼠灌胃給藥,每天給藥1次,連續(xù)7 d。末次給藥1 h后,大鼠禁食不禁水12 h,采用線栓法建立ISPBS模型[10]。具體造模方法為:將大鼠麻醉,然后將其仰臥固定,從頸正中切口,繼而分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(common carotid artery,CCA)、頸外動(dòng)脈(external carotid artery,ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery,ICA),結(jié)扎CCA近心端以及ECA,在CCA距離ICA和ECA分叉口4 mm處剪小口;將魚(yú)線插入ICA,缺血2 h后,將魚(yú)線輕輕拔至分叉口,再灌注24 h。正常組大鼠不進(jìn)行任何處理;假手術(shù)組大鼠僅分離血管,不插入魚(yú)線及結(jié)扎,其余操作與各造模大鼠相同。在ISPBS模型制備過(guò)程中,有部分組別的少數(shù)大鼠造模不成功,故本研究最終每組篩選12只大鼠進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。

    2.2 神經(jīng)功能評(píng)分

    大鼠再灌注24 h后,采用Berderson評(píng)分法對(duì)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分:0分為正常,表示無(wú)神經(jīng)功能缺陷;1分為提尾時(shí)左前肢彎曲;2分為向左側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分為向左側(cè)傾倒;4分為不能行走,即在無(wú)意識(shí)但疼痛刺激下會(huì)出現(xiàn)肢體活動(dòng)。若評(píng)分為1~3分,則表示造模成功[11]。

    2.3 腦組織含水量檢測(cè)

    大鼠再灌注24 h后,每組隨機(jī)取6只大鼠,處死后,立即取出其腦組織,精密稱定腦組織濕質(zhì)量,然后置于105 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干,待干燥至恒重后再稱定腦組織質(zhì)量,并按公式計(jì)算腦組織含水量:腦組織含水量(%)=(腦組織濕質(zhì)量-腦組織干質(zhì)量)/腦組織濕質(zhì)量×100%。

    2.4 血清中血脂四項(xiàng)、炎癥因子和血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)

    大鼠再灌注24 h后,各組取剩余6只大鼠,麻醉后自眼眶取血2 mL,4 ℃靜置30 min,以3 000 r/min離心10 min,分離血清。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定血清中血脂四項(xiàng)(TC、TG、LDL-C、HDL-C)和炎癥因子(IL-1β、IL-10、TNF-α)水平。另外,于大鼠腹主動(dòng)脈取血5 mL,4 h內(nèi)用血液黏度儀進(jìn)行血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)。

    2.5 腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)水平檢測(cè)

    采用ELISA法進(jìn)行測(cè)定。取“2.4”項(xiàng)下取血后的大鼠,處死后,立即取出其缺血側(cè)腦組織,一部分保存于 ?-80 ℃冰箱中,待用;另一部分于冰浴下制成10%腦組織勻漿,在4 ℃下以3 000 r/min離心10 min,取上清液,根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定缺血側(cè)腦組織中MDA、NO含量及SOD活性。

    2.6 腦組織病理形態(tài)學(xué)變化觀察

    采用蘇木精-伊紅(HE)染色法進(jìn)行觀察。取“2.5”項(xiàng)下冷凍的腦組織適量,固定于4%多聚甲醛中,常規(guī)制備石蠟切片(4~6 μm)并行常規(guī)HE染色,然后將切片置于顯微鏡下觀察腦組織的病理形態(tài)學(xué)變化。

    2.7 腦組織中Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表達(dá)檢測(cè)

    采用免疫組化法進(jìn)行測(cè)定。取“2.5”項(xiàng)下冷凍的腦組織適量,固定于4%多聚甲醛中,經(jīng)脫水、修剪、包埋、切片(4~6 μm)及二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后,以過(guò)氧化氫浸泡;濕盒中加入Bax、Bcl-2、caspase-3一抗(稀釋比例均為1 ∶ 200),4 ℃孵育過(guò)夜;加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔/小鼠IgG二抗(稀釋比例均為1 ∶ 200),37 ℃孵育20 min;PBS沖洗,二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蒸餾水洗滌,蘇木精復(fù)染,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。最后采用顯微攝像系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行圖片采集,通過(guò)Image J 1.42軟件分析樣本的平均光密度值(平均光密度值越高表示蛋白表達(dá)越強(qiáng))。

    2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01。

    3 結(jié)果

    3.1 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01),模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分顯著升高(P<0.01);與模型組比較,尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    3.2 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織含水量的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠腦組織含水量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01),模型組大鼠腦組織含水量顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組大鼠腦組織含水量均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    3.3 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血脂四項(xiàng)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組和模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著升高(P<0.01),HDL-C水平均顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著降低(P<0.01),HDL-C水平均顯著升高(P<0.01);豬牙皂皂苷中劑量組大鼠血清中TG、LDL-C水平均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。

    3.4 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血液流變學(xué)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組和模型組大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和卡松黏度均顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(除豬牙皂皂苷低劑量組外)、卡松黏度均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表3。

    3.5 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血清中炎癥因子的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠血清中TNF-α、IL-10、IL-1β含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量顯著升高(P<0.01),IL-10含量顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠血清中TNF-α含量均顯著降低(P<0.01),IL-10含量均顯著增加(P<0.01);各給藥組大鼠血清中IL-1β含量均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表4。

    3.6 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠腦組織中MDA、NO含量和SOD活性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);模型組大鼠腦組織中MDA、NO含量顯著增加(P<0.01),SOD活性顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,各給藥組大鼠腦組織中MDA、NO(除豬牙皂皂苷低劑量組外)含量均顯著降低(P<0.01),尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織中SOD活性均顯著升高(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表5。

    3.7 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)變化的影響

    正常組、假手術(shù)組大鼠腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則、核輪廓清晰,神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整、排列緊密。模型組大鼠腦組織形態(tài)不完整,細(xì)胞核固縮或溶解消失,胞膜碎裂,神經(jīng)纖維松散、排列雜亂,腦組織病變較嚴(yán)重。豬牙皂皂苷低、中劑量組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞,部分細(xì)胞核固縮或溶解消失,神經(jīng)纖維較松散。尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織病理改變較模型組均明顯減輕,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)較為完整,神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整、排列緊密,僅可見(jiàn)少量被不同程度破壞的細(xì)胞。結(jié)果見(jiàn)圖1。

    3.8 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);模型組大鼠腦組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,各給藥組大鼠腦組織中Bax蛋白表達(dá)水平(除豬牙皂皂苷低劑量組外)均顯著降低(P<0.01);尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織中Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表6、圖2。

    4 討論

    尼莫地平是一種選擇性較強(qiáng)的二氫毗陡類有機(jī)鈣拮抗劑,易于透過(guò)血腦屏障,臨床上主要用于腦血管灌流不足、腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血等腦血管疾病的治療[12-14],目前被認(rèn)為是預(yù)防和治療腦血管疾病的首選藥物[15],因此本研究將其作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,ISPBS的發(fā)生發(fā)展和血脂代謝、血液流變學(xué)異常密切相關(guān)。血脂代謝異常主要表現(xiàn)為TG、TC、LDL-C水平異常升高和HDL-C水平異常降低,可引發(fā)血液流動(dòng)性、血液黏度、紅細(xì)胞膜滲透性等異常改變,出現(xiàn)中醫(yī)理論上“痰瘀致病”的病理變化,進(jìn)而誘發(fā)中風(fēng)[16-17]。在本研究中,ISPBS模型大鼠的血脂和血液流變學(xué)指標(biāo)異常,符合痰瘀互結(jié)證的病理特征;豬牙皂皂苷能降低模型大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、卡松黏度以及血清中TG、TC、LDL-C水平,升高血清中HDL-C水平。這提示豬牙皂皂苷具有改善ISPBS模型大鼠血液流變學(xué)、調(diào)節(jié)其血脂代謝的作用。

    腦中風(fēng)患者的腦損傷是一個(gè)快速級(jí)聯(lián)反應(yīng),包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、凋亡基因激活、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、興奮性氨基酸毒性增加等[18]。炎癥反應(yīng)是腦缺血再灌注后繼發(fā)性損傷的重要誘因和發(fā)病機(jī)制[19-20]。腦缺血發(fā)生后會(huì)引起炎癥細(xì)胞活化和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌,進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)和神經(jīng)細(xì)胞損傷[21]。IL-10作為一種多功能炎癥負(fù)調(diào)控因子,可抑制炎癥反應(yīng)的擴(kuò)散,能一定程度保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受傷害,具有神經(jīng)保護(hù)作用[22]。本研究結(jié)果顯示,豬牙皂皂苷能降低ISPBS模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平,升高血清中IL-10水平。這提示豬牙皂皂苷可以通過(guò)抑制IL-1β、TNF-α分泌和促進(jìn)IL-10釋放,進(jìn)而起到抗炎的作用。

    氧化應(yīng)激是腦缺血再灌注后繼發(fā)性損傷的主要發(fā)病機(jī)制,也是該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)之一[23-24]。在腦缺血的不同時(shí)期,NO以不同的方式改善腦組織損傷及神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[25]。腦缺血發(fā)生后,缺血區(qū)域產(chǎn)生大量自由基,自由基攻擊細(xì)胞膜引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),從而產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物(如MDA)。因此,測(cè)定腦組織中MDA含量可間接反映腦組織損傷程度[26]。SOD是重要的過(guò)氧化物分解酶,可有效清除氧自由基,從而抑制腦組織的過(guò)氧化反應(yīng),保護(hù)腦組織[25]。本研究結(jié)果顯示,豬牙皂皂苷能降低ISPBS模型大鼠腦組織中MDA、NO含量,升高其腦組織中SOD活性。這提示豬牙皂皂苷可通過(guò)抑制MDA、NO生成和促進(jìn)SOD產(chǎn)生,從而減少過(guò)氧化反應(yīng)引發(fā)的腦組織損傷。

    在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的14種caspase中,有8種被認(rèn)為參與了細(xì)胞的凋亡過(guò)程,其中caspase-3被認(rèn)為在凋亡過(guò)程中占主導(dǎo)地位,是最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶[27]。Bcl-2和Bax蛋白是具有調(diào)控細(xì)胞凋亡作用的一對(duì)重要的內(nèi)源性蛋白,Bax作為一種轉(zhuǎn)錄因子參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程,Bcl-2則可抑制Bax的作用,二者共同決定細(xì)胞的生存情況[28]。這提示豬牙皂皂苷能下調(diào)ISPBS模型大鼠腦組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)并上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)。上述結(jié)果提示,豬牙皂皂苷可以抑制神經(jīng)元凋亡從而改善腦組織損傷。

    5 結(jié)語(yǔ)

    豬牙皂皂苷對(duì)ISPBS模型大鼠具有一定的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與減少氧化損傷、減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。但是,本研究?jī)H初步探討了豬牙皂皂苷抗ISPBS的作用及可能機(jī)制,其更多的作用機(jī)制以及具體是哪種成分起作用等問(wèn)題均需要進(jìn)一步深入研究。

    參考文獻(xiàn)

    [ 1 ] GBD 2017 Causes of Death Collaborators. Global,regional,and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories,1980-2017:a syste- matic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017[J]. Lancet,2018,392(10159):1736-1788.

    [ 2 ] 《中國(guó)腦卒中防治報(bào)告》編寫(xiě)組.《中國(guó)腦卒中防治報(bào)告2019》概要[J].中國(guó)腦血管病雜志,2020,17(5):272-281.

    [ 3 ] 萬(wàn)維海,宋宏姝.從純內(nèi)傷和內(nèi)傷兼外風(fēng)論治中風(fēng)[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(15):66-67.

    [ 4 ] 劉抒雯,劉敬霞,劉超,等. 扎里奴思方對(duì)痰瘀互結(jié)型腦缺血再灌注大鼠血液流變學(xué)、血脂及自由基代謝的影響

    [J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,32(5):884-890,895,974.

    [ 5 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S]. 2020年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2020:331,1567.

    [ 6 ] ALAVIAN F,SHAMS N. Oral and intra-nasal administration of nanoparticles in the cerebral ischemia treatment in animal experiments:considering its advantages and disadvantages[J]. Curr Clin Pharmacol,2020,15(1):20-29.

    [ 7 ] 楊敬鴻,陳曉蘭,楊曉梅,等.基于信息熵理論和方差分析比較豬牙皂不同組分對(duì)小鼠缺血缺氧及血腦屏障通透性影響[J].中藥藥理與臨床,2018,34(6):83-86.

    [ 8 ] 黃繼漢,黃曉暉,陳志揚(yáng),等.藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004,9(9):1069-1072.

    [ 9 ] 張令霖,方格,連新福,等.痰瘀互結(jié)證局部腦缺血再灌注動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2018,38(12):1479-1483.

    [10] 田芳,張昊,莫燦龍,等.線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注模型的改進(jìn)及評(píng)價(jià)[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2015,31(5):665-669.

    [11] BEDERSON J B,PITTS L H,TSUJI M,et al. Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and ? ?development of a neurologic examination[J]. Stroke,1986,17(3):472-476.

    [12] 水海峰,王風(fēng),刁鐵梅,等.尼莫地平及參麥注射液對(duì)腦復(fù)蘇效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].急診醫(yī)學(xué),1996,5(3):131-134.

    [13] 賽雙橋,余海鵬,梁婉如,等.尼莫地平對(duì)腦卒中后認(rèn)知功能障礙的影響[J].中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理,2021,12(17):101-104.

    [14] 劉顯國(guó),李勝利,黃國(guó)祥,等.尼莫地平片治療急性腦出血患者的臨床研究分析[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2022,38(4):296-299.

    [15] 謝志勇,何文. N-三甲基殼聚糖對(duì)尼莫地平凝膠透皮吸收促進(jìn)作用的體外研究[J].中國(guó)藥師,2011,14(10):1420-1422.

    [16] 陳文華,饒李亮,尹晟.銀杏達(dá)莫注射液治療急性腦梗死的療效及其對(duì)血液流變學(xué)的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,12(6):788-789,792.

    [17] 王冬梅,胡俊,傅冬梅.血漿中血脂類生化指標(biāo)與腦血管病的相關(guān)性研究[J].中華老年心腦血管病雜志,2015,17(3):315-316.

    [18] 蔡友德,何前松,樊梓媛,等.基于抗氧化作用探討大黃游離蒽醌類成分對(duì)腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)機(jī)制[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2019,41(4):5-10.

    [19] BURROWS F,HALEY M J,SCOTT E,et al. Systemic inflammation affects reperfusion following transient cerebral ischaemia[J]. Exp Neurol,2016,277:252-260.

    [20] 武曉偉,劉聰,李佳,等.芪蛭通絡(luò)膠囊及其9味活血化瘀藥拆方對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥房,2019,30(19):2674-2678.

    [21] ANRATHER J,IADECOLA C. Inflammation and stroke:an overview[J]. Neurotherapeutics,2016,13(4):661-670.

    [22] 楊曉煒,姚立巖,李海紅,等.阿托伐他汀對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及炎癥機(jī)制[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2021,42(2):6-10.

    [23] SANDERSON T H,REYNOLDS C A,KUMAR R,et al. Molecular mechanisms of ischemia-reperfusion injury in brain:pivotal role of the mitochondrial membrane potential in reactive oxygen species generation[J]. Mol Neurobiol,2013,47(1):9-23.

    [24] 胡躍強(qiáng),秦紅玲,唐農(nóng),等.基于Nrf2/ARE信號(hào)通路探討清熱化瘀方對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2018,24(14):128-133.

    [25] WU L Q,XIONG X X,WU X M,et al. Targeting oxidative stress and inflammation to prevent ischemia-reperfusion injury[J]. Front Mol Neurosci,2020,13:28.

    [26] 吳桂甫,王柳萍,凌蘭,等.莪術(shù)對(duì)大鼠缺血性腦中風(fēng)的治療作用及其機(jī)制研究[J].中藥與臨床,2013,4(6):34-36.

    [27] 劉春華,劉捷.神經(jīng)元凋亡與Caspase家族及細(xì)胞周期研究進(jìn)展[J].人民軍醫(yī),2018,61(7):641-644.

    [28] YU S J,CHO I A,KANG K R,et al. Licochalcone-E induces caspase-dependent death of human pharyngeal squamous carcinoma cells through the extrinsic and intrinsic apoptotic signaling pathways[J]. Oncol Lett,2017,13(5):3662-3668.

    (收稿日期:2021-10-26 修回日期:2022-04-02)

    (編輯:林 靜)

    猜你喜歡
    機(jī)制
    構(gòu)建“不敢腐、不能腐、不想腐”機(jī)制的思考
    創(chuàng)新完善機(jī)制 做實(shí)做優(yōu)考核
    自制力是一種很好的篩選機(jī)制
    文苑(2018年21期)2018-11-09 01:23:06
    建立激勵(lì)相容機(jī)制保護(hù)數(shù)據(jù)安全
    保留和突破:TPP協(xié)定ISDS機(jī)制中的平衡
    定向培養(yǎng) 還需完善安置機(jī)制
    破除舊機(jī)制要分步推進(jìn)
    氫氣對(duì)缺血再灌注損傷保護(hù)的可能機(jī)制
    注重機(jī)制的相互配合
    打基礎(chǔ) 抓機(jī)制 顯成效
    中亚洲国语对白在线视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产麻豆69| 亚洲精品国产色婷婷电影| 韩国av一区二区三区四区| 一区二区三区激情视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久精品成人免费网站| 国产高清videossex| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久久久久大精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美一级a爱片免费观看看 | 少妇 在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 色播亚洲综合网| 亚洲成国产人片在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 大陆偷拍与自拍| 操出白浆在线播放| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 亚洲国产精品成人综合色| 最新在线观看一区二区三区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 天堂√8在线中文| 给我免费播放毛片高清在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 1024香蕉在线观看| 亚洲九九香蕉| 久久草成人影院| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产xxxxx性猛交| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜老司机福利片| 中文字幕精品免费在线观看视频| 美女大奶头视频| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 村上凉子中文字幕在线| 一夜夜www| 亚洲成a人片在线一区二区| 丝袜美足系列| 亚洲 国产 在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美成狂野欧美在线观看| 九色国产91popny在线| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 精品人妻在线不人妻| 国内精品久久久久精免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 丰满的人妻完整版| 最近最新免费中文字幕在线| 久久伊人香网站| 天天一区二区日本电影三级 | av天堂久久9| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 电影成人av| 午夜久久久在线观看| 色老头精品视频在线观看| 国产又爽黄色视频| 中国美女看黄片| 日韩欧美国产在线观看| 久久久久久人人人人人| 黄色视频不卡| 国产区一区二久久| 亚洲色图av天堂| 在线观看一区二区三区| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品野战在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 91av网站免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 在线观看www视频免费| 88av欧美| x7x7x7水蜜桃| 欧美激情久久久久久爽电影 | 99精品在免费线老司机午夜| 久久久久久人人人人人| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产精品永久免费网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产欧美日韩一区二区三| 久久精品成人免费网站| 国产精品野战在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 香蕉丝袜av| 国产成人欧美在线观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产91精品成人一区二区三区| 大香蕉久久成人网| 热re99久久国产66热| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲熟妇熟女久久| 国产成人av教育| 亚洲av成人一区二区三| avwww免费| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产精品精品国产色婷婷| 成人国语在线视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久精品国产清高在天天线| 精品国产一区二区久久| 欧美日本视频| 欧美在线黄色| 久久午夜亚洲精品久久| 在线观看舔阴道视频| 午夜福利18| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 两个人看的免费小视频| 免费在线观看影片大全网站| 欧美激情高清一区二区三区| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲专区中文字幕在线| 高清黄色对白视频在线免费看| 91麻豆av在线| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲美女黄片视频| or卡值多少钱| 国产麻豆成人av免费视频| 国产亚洲精品一区二区www| 国产xxxxx性猛交| 免费看十八禁软件| 热re99久久国产66热| av网站免费在线观看视频| 国产片内射在线| 身体一侧抽搐| 亚洲七黄色美女视频| 在线播放国产精品三级| 亚洲成人久久性| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 岛国在线观看网站| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 99久久国产精品久久久| 成人永久免费在线观看视频| 国产不卡一卡二| 国产成人影院久久av| 亚洲精品av麻豆狂野| 午夜影院日韩av| 色播亚洲综合网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久国产欧美日韩av| a在线观看视频网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 日日爽夜夜爽网站| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品久久视频播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 多毛熟女@视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品日韩av在线免费观看 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 999久久久精品免费观看国产| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产片内射在线| ponron亚洲| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 丝袜人妻中文字幕| 国产亚洲精品一区二区www| 精品人妻在线不人妻| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品福利观看| 长腿黑丝高跟| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品久久电影中文字幕| 午夜福利18| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 男人舔女人的私密视频| 视频在线观看一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩三级视频一区二区三区| 午夜久久久在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美激情高清一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产成人精品久久二区二区91| 9色porny在线观看| 99re在线观看精品视频| av福利片在线| 欧美成人午夜精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产99白浆流出| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲第一电影网av| 韩国精品一区二区三区| 国产成人影院久久av| netflix在线观看网站| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 99re在线观看精品视频| 99久久国产精品久久久| 激情视频va一区二区三区| 久久中文字幕一级| 脱女人内裤的视频| 国产精品久久久久久精品电影 | 看黄色毛片网站| 一a级毛片在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲国产欧美网| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 女警被强在线播放| 亚洲电影在线观看av| 国产精品av久久久久免费| 最新美女视频免费是黄的| 精品人妻1区二区| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美日韩精品网址| 亚洲中文av在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产野战对白在线观看| 免费在线观看黄色视频的| av免费在线观看网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 伦理电影免费视频| 欧美在线黄色| 女人精品久久久久毛片| 91字幕亚洲| 中亚洲国语对白在线视频| 精品国产国语对白av| 宅男免费午夜| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美色视频一区免费| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 超碰成人久久| 黑丝袜美女国产一区| 91大片在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 看免费av毛片| 在线免费观看的www视频| 久久久国产成人精品二区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久久久精品吃奶| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲精品美女久久av网站| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 999久久久国产精品视频| 午夜福利在线观看吧| 韩国av一区二区三区四区| 国产成年人精品一区二区| 色av中文字幕| 无遮挡黄片免费观看| 99香蕉大伊视频| 国产精品免费视频内射| 人成视频在线观看免费观看| 一本综合久久免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产欧美日韩一区二区三| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 黄色 视频免费看| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 一进一出抽搐动态| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 99香蕉大伊视频| 脱女人内裤的视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 老汉色av国产亚洲站长工具| 麻豆国产av国片精品| 国产精品野战在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 久久中文字幕一级| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜激情av网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| aaaaa片日本免费| 欧美激情久久久久久爽电影 | 欧美国产日韩亚洲一区| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品九九99| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲五月天丁香| 亚洲 欧美一区二区三区| 午夜免费观看网址| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 婷婷丁香在线五月| 美女大奶头视频| x7x7x7水蜜桃| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩av在线大香蕉| 搞女人的毛片| 制服丝袜大香蕉在线| 99国产精品99久久久久| 美女高潮到喷水免费观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产欧美日韩一区二区三| 精品久久久久久成人av| 精品国产一区二区三区四区第35| 少妇的丰满在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美日本视频| 大陆偷拍与自拍| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 午夜久久久久精精品| 男女下面进入的视频免费午夜 | 人人澡人人妻人| 精品人妻在线不人妻| 色av中文字幕| 亚洲片人在线观看| 多毛熟女@视频| 国产不卡一卡二| 精品久久蜜臀av无| 国产又爽黄色视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久热这里只有精品99| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 午夜a级毛片| 婷婷丁香在线五月| 午夜a级毛片| 成人亚洲精品av一区二区| 美女大奶头视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| av天堂在线播放| 国产极品粉嫩免费观看在线| 波多野结衣高清无吗| 91国产中文字幕| 不卡av一区二区三区| 女性生殖器流出的白浆| svipshipincom国产片| 亚洲在线自拍视频| 亚洲第一av免费看| 日韩有码中文字幕| 在线观看免费视频日本深夜| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品电影一区二区三区| 欧美黑人精品巨大| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产成人av激情在线播放| 国产又色又爽无遮挡免费看| 美女 人体艺术 gogo| 女同久久另类99精品国产91| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 人人澡人人妻人| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲精品国产区一区二| 搡老妇女老女人老熟妇| 日日夜夜操网爽| 日本 av在线| 人人妻人人澡人人看| av免费在线观看网站| videosex国产| 久久国产精品人妻蜜桃| 美女免费视频网站| 久99久视频精品免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 叶爱在线成人免费视频播放| av天堂久久9| 最好的美女福利视频网| 高清毛片免费观看视频网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 两个人免费观看高清视频| 精品无人区乱码1区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩欧美免费精品| 人人澡人人妻人| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 咕卡用的链子| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产三级在线视频| 69精品国产乱码久久久| 91九色精品人成在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | a在线观看视频网站| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久人妻熟女aⅴ| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久久久久久午夜电影| 91大片在线观看| 国产又爽黄色视频| 精品国产一区二区久久| 黄色 视频免费看| 午夜精品在线福利| 国产精品98久久久久久宅男小说| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美成人免费av一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 精品久久蜜臀av无| 欧美午夜高清在线| 日日夜夜操网爽| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美乱色亚洲激情| av视频在线观看入口| 国产精品99久久99久久久不卡| 十八禁人妻一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 无人区码免费观看不卡| 国产在线观看jvid| 欧美大码av| 天堂√8在线中文| 色播在线永久视频| 久久久久久久精品吃奶| 动漫黄色视频在线观看| x7x7x7水蜜桃| 亚洲国产看品久久| 久久热在线av| 午夜福利免费观看在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本 欧美在线| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 亚洲国产欧美网| 黑丝袜美女国产一区| 国产主播在线观看一区二区| 欧美成人午夜精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 看黄色毛片网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久人人精品亚洲av| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 在线观看免费午夜福利视频| 曰老女人黄片| 久久人人精品亚洲av| 日本一区二区免费在线视频| 国产高清视频在线播放一区| 91国产中文字幕| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久久久久大精品| 精品高清国产在线一区| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久精品国产清高在天天线| 久久人妻av系列| 久久中文看片网| 国产人伦9x9x在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 91大片在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 69av精品久久久久久| 国产伦一二天堂av在线观看| 露出奶头的视频| 色播在线永久视频| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品国产高清国产av| 18禁美女被吸乳视频| 国产精品亚洲美女久久久| 性色av乱码一区二区三区2| 91九色精品人成在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 成人永久免费在线观看视频| а√天堂www在线а√下载| 曰老女人黄片| 国产精品 国内视频| 手机成人av网站| 丝袜美腿诱惑在线| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久久久大精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 一进一出抽搐动态| 久久久久久人人人人人| 久久久国产成人免费| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 一本久久中文字幕| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品久久视频播放| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 亚洲五月天丁香| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产成人精品久久二区二区91| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 大陆偷拍与自拍| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 极品教师在线免费播放| 久久精品国产综合久久久| 露出奶头的视频| 咕卡用的链子| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 久久精品91蜜桃| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产一区在线观看成人免费| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品久久久久久,| 国产单亲对白刺激| 美女大奶头视频| 午夜福利成人在线免费观看| av在线播放免费不卡| 亚洲男人的天堂狠狠| 午夜福利一区二区在线看| 国产高清videossex| 亚洲av美国av| 免费观看精品视频网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产真人三级小视频在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜久久久在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 最新美女视频免费是黄的| 国产精品一区二区三区四区久久 | 男男h啪啪无遮挡| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| www日本在线高清视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| www.www免费av| 老司机靠b影院| 老司机午夜十八禁免费视频| 99re在线观看精品视频| 正在播放国产对白刺激| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 看片在线看免费视频| 日韩欧美免费精品| 曰老女人黄片| 在线观看免费日韩欧美大片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 桃色一区二区三区在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久伊人香网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产成人精品久久二区二区91| 国产视频一区二区在线看| 午夜精品在线福利| www.自偷自拍.com| 最新在线观看一区二区三区| 午夜a级毛片| 看黄色毛片网站| 亚洲人成电影观看| 国产精品久久久av美女十八| 一级毛片精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 波多野结衣av一区二区av| 免费在线观看日本一区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲精品一区av在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产成人精品无人区| 韩国精品一区二区三区| 精品第一国产精品| av视频在线观看入口| 嫩草影视91久久| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 性色av乱码一区二区三区2| 午夜精品国产一区二区电影| 午夜久久久久精精品| 久久人妻熟女aⅴ| 日韩免费av在线播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 69精品国产乱码久久久| 精品国产亚洲在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲电影在线观看av| 欧美在线一区亚洲| 免费无遮挡裸体视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 手机成人av网站| 满18在线观看网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 老汉色∧v一级毛片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一本综合久久免费| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久久国产精品麻豆|