• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)模型大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究

    2022-05-17 14:57:50董娜娜陳曉蘭鄧鉍莉萬(wàn)靜謝樹(shù)才胡娟羅晨月曹國(guó)瓊
    中國(guó)藥房 2022年9期
    關(guān)鍵詞:機(jī)制

    董娜娜 陳曉蘭 鄧鉍莉 萬(wàn)靜 謝樹(shù)才 胡娟 羅晨月 曹國(guó)瓊

    中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2022)09-1068-07

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.09.08

    摘 要 目的 研究豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)(ISPBS)模型大鼠的保護(hù)作用,并探究其作用機(jī)制。方法 將119只大鼠隨機(jī)分為正常組(生理鹽水)、假手術(shù)組(生理鹽水)、模型組(生理鹽水)、尼莫地平組(陽(yáng)性對(duì)照組,5 mg/kg)和豬牙皂皂苷低、中、高劑量組(3.21、6.42、12.84 mg/kg),每組17只。除正常組外,其余各組大鼠均采用高脂飼料飼養(yǎng)+線栓法復(fù)制ISPBS模型。測(cè)定或觀察大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)學(xué)變化和血清中血液流變學(xué)指標(biāo)[全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、卡松黏度]、血脂四項(xiàng)[三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)]、炎癥因子[白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、IL-10、腫瘤壞死因子α(TNF-α)]及腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)[丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)]變化情況,并測(cè)定腦組織中B淋巴細(xì)胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 與正常組比較,模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、5項(xiàng)血清指標(biāo)(TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β)、血液流變學(xué)指標(biāo)和腦組織中MDA、NO含量以及Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.01),血清中HDL-C、IL-10水平和腦組織中SOD活性、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01),腦組織出現(xiàn)核固縮、胞膜碎裂等明顯病變。與模型組比較,各給藥組上述指標(biāo)均不同程度改善,其中豬牙皂皂苷高劑量組大鼠的上述指標(biāo)變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 豬牙皂皂苷對(duì)ISPBS模型大鼠具有較好的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與減少氧化損傷、減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。

    關(guān)鍵詞 豬牙皂皂苷;痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng);氧化損傷;機(jī)制

    Protective effect and mechanism of saponins from Gleditsia sinensis on ischemic stroke with phlegm and blood stasis model rats

    DONG Nana,CHEN Xiaolan,DENG Bili,WAN Jing,XIE Shucai,HU Juan,LUO Chenyue,CAO Guoqiong(School of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China)

    ABSTRACT ? OBJECTIVE To study the protective effects of saponins from Gleditsia sinensis on ischemic stroke with phlegm and blood stasis(ISPBS) model rats, and to explore its mechanism. METHODS Totally 119 rats were randomly divided into normal group (normal saline), sham operation group (normal saline), model group (normal saline), nimodipine group (positive control group, 5 mg/kg), G. sinensis saponin low-dose, medium-dose and high-dose groups (3.21, 6.42 and 12.84 mg/kg), with 17 rats in each group. Except for normal group, other groups were all given high-fat diet+suture-occluded method to induce ISPBS model. The neurological function score, water content of brain tissue, pathological morphology of brain tissue, the changes of hemorheology indexes ?(whole blood viscosity, erythrocyte aggregation index, Casson-viscosity), four items of blood lipid [triacylglycerol (TG), total cholesterol (TC), low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C)] and inflammatory factors in serum and oxidative stress indexes [malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO), superoxide dismutase (SOD)] in brain tissue were determined or observed in rats. The protein expressions of B lymphocytoma 2 (Bcl-2), Bcl-2 associated X protein (Bax) and caspase-3 in cerebral tissue were also detected. RESULTS Compared with normal group, the score of nerve function, 5 kinds of serum indexes (TC, TG, LDL-C, TNF-α, IL-1β), hemorheology indexes, the contents of MDA and NO and protein expressions of Bax and caspase-3 in cerebral tissue were all increased significantly in model group (P<0.01). The levels of HDL-C and IL-10 in serum, SOD activity and protein expression of Bcl-2 in cerebral tissue were decreased significantly (P<0.01), and obvious lesions such as nuclear pyknosis and cell membrane fragmentation occurred in brain tissue. Compared with model group, above indexes of administration groups were improved to different extents, among which there was statistical significance in above indexes of G. sinensis saponin high-dose group (P<0.01). CONCLUSIONS Saponin from G. sinensis has a good protective effect on ISPBS model rats. Its mechanism may be associated with reducing oxidative damage, reducing the production of pro-inflammatory mediators and resisting neuronal apoptosis.

    KEYWORDS ? saponins from Gleditsia sinensis; ischemic stroke with phlegm and blood stasis; oxidative injury; mechanism

    中風(fēng)是全球致殘和致死的主要原因之一,人口老齡化的加劇將導(dǎo)致中風(fēng)發(fā)生率的升高[1]。據(jù)全球疾病負(fù)擔(dān)研究數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)總體中風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為39.9%,位居全球首位[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為,中風(fēng)是在內(nèi)傷的基礎(chǔ)上加上飲食不規(guī)律、情志不暢、過(guò)度疲勞等引起的臟腑陰陽(yáng)失調(diào)[3];痰瘀互結(jié)是中風(fēng)的主要病機(jī)和致病因素,痰濁、瘀血貫穿了中風(fēng)發(fā)生發(fā)展的全過(guò)程[4]。因此,目前中醫(yī)治療中風(fēng)的方法主要為祛痰和開(kāi)竅。

    豬牙皂為豆科植物皂莢Gleditsia sinensis Lam.的干燥不育果實(shí),具有祛痰開(kāi)竅、消腫散結(jié)之功效[5]。據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》(一部)記載,以豬牙皂為主藥、配以鵝不食草和細(xì)辛制成的通關(guān)散,吹鼻可治療痰濁阻竅所致的氣閉神昏、牙關(guān)緊閉、不省人事等癥[5]。研究表明,經(jīng)鼻給藥是藥物到達(dá)大腦最快、最直接的途徑,以該方式給藥后藥物可以無(wú)創(chuàng)方式通過(guò)血腦屏障[6]。本課題組前期研究了豬牙皂不同萃取部位經(jīng)鼻給藥后對(duì)缺血缺氧模型小鼠血腦屏障通透性的影響,發(fā)現(xiàn)芳香類成分和皂苷類成分具有較好的“通關(guān)開(kāi)竅、醒腦復(fù)神”作用[7]。因此,本研究在前期研究基礎(chǔ)上考察豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)(ischemic stroke with phlegm and blood stasis,ISPBS)模型大鼠的保護(hù)作用和可能機(jī)制,為豬牙皂皂苷鼻內(nèi)給藥制劑的研制和應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用的主要儀器有Multiskan Mk3型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司),BA200Digita型顯微攝像系統(tǒng)(麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司),DZKW-4型恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司),LG-R-80B型血液黏度儀(北京中科富邦醫(yī)療設(shè)備有限公司),AUW12D型分析天平(日本Shimadzu公司)。

    1.2 主要藥品與試劑

    本研究所用的主要藥品與試劑有:豬牙皂皂苷(本實(shí)驗(yàn)室按文獻(xiàn)[7]方法自制,1 g豬牙皂生藥可以得到57 mg皂苷),尼莫地平片(亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,批號(hào)170606,規(guī)格20 mg/片),三酰甘油(triacylglycerol,TG)試劑盒、總膽固醇(total cholesterol,TC)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)試劑盒、一氧化氮(nitric oxide,NO)試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào)分別為A110-1-1、A111-1-1、A113-1-1、A112-1-1、A001-1、A003-1、A012),大鼠白細(xì)胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒、大鼠IL-10 ELISA試劑盒、大鼠腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)ELISA試劑盒(上海茁彩生物科技有限公司,批號(hào)分別為ZC-36391、ZC-36379、ZC-37624),兔源B淋巴細(xì)胞瘤2(Bcl-2)抗體(美國(guó)Santa Cruz公司,批號(hào)sc-492),兔源Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)抗體、兔源半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)抗體(美國(guó)CST公司,批號(hào)分別為2772s、9662s),辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔/小鼠免疫球蛋白G(Ig G)二抗(武漢博士德生物工程有限公司,批號(hào)BST13J17B16G56),蘇木精染液、伊紅染液(武漢賽維爾生物技術(shù)有限公司,批號(hào)分別為G1005-1、G1001),磷酸鹽緩沖液(PBS,北京索萊寶科技有限公司,pH 7.2~7.4),多聚甲醛(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格,水為純凈水。

    1.3 動(dòng)物

    本研究所用動(dòng)物為SPF級(jí)SD雄性大鼠,共119只,體質(zhì)量為250~280 g,購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(湘)2019-0014,合格證號(hào)為430726210100322185。所有大鼠均飼養(yǎng)于12 h光照/12 h黑暗、溫度(25±1) ℃、相對(duì)濕度(50±10)%的動(dòng)物房?jī)?nèi),飼養(yǎng)期間自由攝食、飲水。實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。

    2 方法

    2.1 分組、造模與給藥

    將119只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分成正常組(生理鹽水)、假手術(shù)組(生理鹽水)、模型組(生理鹽水)、尼莫地平組(陽(yáng)性對(duì)照組,5 mg/kg,劑量按藥品說(shuō)明書(shū)中成人劑量換算后制定)和豬牙皂皂苷低、中、高劑量組[3.21、6.42、12.84 mg/kg;劑量參考2020版《中國(guó)藥典》(一部)豬牙皂成人每日用量(1~1.5 g),并按照體表面積法[8]換算成大鼠的每日用量],每組17只。正常組大鼠采用普通飼料喂養(yǎng);其余各組大鼠均給予高脂飼料(由3.5%膽固醇、10%豬油、0.2%丙硫尿嘧啶、0.5%膽酸鈉、10%白糖、75.8%基礎(chǔ)飼料組成)喂養(yǎng)[4,9]。大鼠飼養(yǎng)28 d后,眼眶取血,檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)及血脂四項(xiàng)的變化,若發(fā)現(xiàn)各指標(biāo)均異常則認(rèn)為痰瘀互結(jié)型大鼠造模成功[4]。正常組、假手術(shù)組、模型組和豬牙皂皂苷組大鼠通過(guò)鼻腔給予等體積生理鹽水或相應(yīng)藥物,尼莫地平組大鼠灌胃給藥,每天給藥1次,連續(xù)7 d。末次給藥1 h后,大鼠禁食不禁水12 h,采用線栓法建立ISPBS模型[10]。具體造模方法為:將大鼠麻醉,然后將其仰臥固定,從頸正中切口,繼而分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(common carotid artery,CCA)、頸外動(dòng)脈(external carotid artery,ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery,ICA),結(jié)扎CCA近心端以及ECA,在CCA距離ICA和ECA分叉口4 mm處剪小口;將魚(yú)線插入ICA,缺血2 h后,將魚(yú)線輕輕拔至分叉口,再灌注24 h。正常組大鼠不進(jìn)行任何處理;假手術(shù)組大鼠僅分離血管,不插入魚(yú)線及結(jié)扎,其余操作與各造模大鼠相同。在ISPBS模型制備過(guò)程中,有部分組別的少數(shù)大鼠造模不成功,故本研究最終每組篩選12只大鼠進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。

    2.2 神經(jīng)功能評(píng)分

    大鼠再灌注24 h后,采用Berderson評(píng)分法對(duì)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分:0分為正常,表示無(wú)神經(jīng)功能缺陷;1分為提尾時(shí)左前肢彎曲;2分為向左側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分為向左側(cè)傾倒;4分為不能行走,即在無(wú)意識(shí)但疼痛刺激下會(huì)出現(xiàn)肢體活動(dòng)。若評(píng)分為1~3分,則表示造模成功[11]。

    2.3 腦組織含水量檢測(cè)

    大鼠再灌注24 h后,每組隨機(jī)取6只大鼠,處死后,立即取出其腦組織,精密稱定腦組織濕質(zhì)量,然后置于105 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干,待干燥至恒重后再稱定腦組織質(zhì)量,并按公式計(jì)算腦組織含水量:腦組織含水量(%)=(腦組織濕質(zhì)量-腦組織干質(zhì)量)/腦組織濕質(zhì)量×100%。

    2.4 血清中血脂四項(xiàng)、炎癥因子和血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)

    大鼠再灌注24 h后,各組取剩余6只大鼠,麻醉后自眼眶取血2 mL,4 ℃靜置30 min,以3 000 r/min離心10 min,分離血清。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定血清中血脂四項(xiàng)(TC、TG、LDL-C、HDL-C)和炎癥因子(IL-1β、IL-10、TNF-α)水平。另外,于大鼠腹主動(dòng)脈取血5 mL,4 h內(nèi)用血液黏度儀進(jìn)行血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)。

    2.5 腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)水平檢測(cè)

    采用ELISA法進(jìn)行測(cè)定。取“2.4”項(xiàng)下取血后的大鼠,處死后,立即取出其缺血側(cè)腦組織,一部分保存于 ?-80 ℃冰箱中,待用;另一部分于冰浴下制成10%腦組織勻漿,在4 ℃下以3 000 r/min離心10 min,取上清液,根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定缺血側(cè)腦組織中MDA、NO含量及SOD活性。

    2.6 腦組織病理形態(tài)學(xué)變化觀察

    采用蘇木精-伊紅(HE)染色法進(jìn)行觀察。取“2.5”項(xiàng)下冷凍的腦組織適量,固定于4%多聚甲醛中,常規(guī)制備石蠟切片(4~6 μm)并行常規(guī)HE染色,然后將切片置于顯微鏡下觀察腦組織的病理形態(tài)學(xué)變化。

    2.7 腦組織中Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表達(dá)檢測(cè)

    采用免疫組化法進(jìn)行測(cè)定。取“2.5”項(xiàng)下冷凍的腦組織適量,固定于4%多聚甲醛中,經(jīng)脫水、修剪、包埋、切片(4~6 μm)及二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后,以過(guò)氧化氫浸泡;濕盒中加入Bax、Bcl-2、caspase-3一抗(稀釋比例均為1 ∶ 200),4 ℃孵育過(guò)夜;加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔/小鼠IgG二抗(稀釋比例均為1 ∶ 200),37 ℃孵育20 min;PBS沖洗,二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蒸餾水洗滌,蘇木精復(fù)染,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。最后采用顯微攝像系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行圖片采集,通過(guò)Image J 1.42軟件分析樣本的平均光密度值(平均光密度值越高表示蛋白表達(dá)越強(qiáng))。

    2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01。

    3 結(jié)果

    3.1 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01),模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分顯著升高(P<0.01);與模型組比較,尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    3.2 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織含水量的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠腦組織含水量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01),模型組大鼠腦組織含水量顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組大鼠腦組織含水量均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    3.3 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血脂四項(xiàng)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組和模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著升高(P<0.01),HDL-C水平均顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著降低(P<0.01),HDL-C水平均顯著升高(P<0.01);豬牙皂皂苷中劑量組大鼠血清中TG、LDL-C水平均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。

    3.4 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血液流變學(xué)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組和模型組大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和卡松黏度均顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(除豬牙皂皂苷低劑量組外)、卡松黏度均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表3。

    3.5 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血清中炎癥因子的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠血清中TNF-α、IL-10、IL-1β含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量顯著升高(P<0.01),IL-10含量顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠血清中TNF-α含量均顯著降低(P<0.01),IL-10含量均顯著增加(P<0.01);各給藥組大鼠血清中IL-1β含量均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表4。

    3.6 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠腦組織中MDA、NO含量和SOD活性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);模型組大鼠腦組織中MDA、NO含量顯著增加(P<0.01),SOD活性顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,各給藥組大鼠腦組織中MDA、NO(除豬牙皂皂苷低劑量組外)含量均顯著降低(P<0.01),尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織中SOD活性均顯著升高(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表5。

    3.7 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)變化的影響

    正常組、假手術(shù)組大鼠腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則、核輪廓清晰,神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整、排列緊密。模型組大鼠腦組織形態(tài)不完整,細(xì)胞核固縮或溶解消失,胞膜碎裂,神經(jīng)纖維松散、排列雜亂,腦組織病變較嚴(yán)重。豬牙皂皂苷低、中劑量組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞,部分細(xì)胞核固縮或溶解消失,神經(jīng)纖維較松散。尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織病理改變較模型組均明顯減輕,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)較為完整,神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整、排列緊密,僅可見(jiàn)少量被不同程度破壞的細(xì)胞。結(jié)果見(jiàn)圖1。

    3.8 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)的影響

    與正常組比較,假手術(shù)組大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);模型組大鼠腦組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,各給藥組大鼠腦組織中Bax蛋白表達(dá)水平(除豬牙皂皂苷低劑量組外)均顯著降低(P<0.01);尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織中Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表6、圖2。

    4 討論

    尼莫地平是一種選擇性較強(qiáng)的二氫毗陡類有機(jī)鈣拮抗劑,易于透過(guò)血腦屏障,臨床上主要用于腦血管灌流不足、腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血等腦血管疾病的治療[12-14],目前被認(rèn)為是預(yù)防和治療腦血管疾病的首選藥物[15],因此本研究將其作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,ISPBS的發(fā)生發(fā)展和血脂代謝、血液流變學(xué)異常密切相關(guān)。血脂代謝異常主要表現(xiàn)為TG、TC、LDL-C水平異常升高和HDL-C水平異常降低,可引發(fā)血液流動(dòng)性、血液黏度、紅細(xì)胞膜滲透性等異常改變,出現(xiàn)中醫(yī)理論上“痰瘀致病”的病理變化,進(jìn)而誘發(fā)中風(fēng)[16-17]。在本研究中,ISPBS模型大鼠的血脂和血液流變學(xué)指標(biāo)異常,符合痰瘀互結(jié)證的病理特征;豬牙皂皂苷能降低模型大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、卡松黏度以及血清中TG、TC、LDL-C水平,升高血清中HDL-C水平。這提示豬牙皂皂苷具有改善ISPBS模型大鼠血液流變學(xué)、調(diào)節(jié)其血脂代謝的作用。

    腦中風(fēng)患者的腦損傷是一個(gè)快速級(jí)聯(lián)反應(yīng),包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、凋亡基因激活、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、興奮性氨基酸毒性增加等[18]。炎癥反應(yīng)是腦缺血再灌注后繼發(fā)性損傷的重要誘因和發(fā)病機(jī)制[19-20]。腦缺血發(fā)生后會(huì)引起炎癥細(xì)胞活化和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌,進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)和神經(jīng)細(xì)胞損傷[21]。IL-10作為一種多功能炎癥負(fù)調(diào)控因子,可抑制炎癥反應(yīng)的擴(kuò)散,能一定程度保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受傷害,具有神經(jīng)保護(hù)作用[22]。本研究結(jié)果顯示,豬牙皂皂苷能降低ISPBS模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平,升高血清中IL-10水平。這提示豬牙皂皂苷可以通過(guò)抑制IL-1β、TNF-α分泌和促進(jìn)IL-10釋放,進(jìn)而起到抗炎的作用。

    氧化應(yīng)激是腦缺血再灌注后繼發(fā)性損傷的主要發(fā)病機(jī)制,也是該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)之一[23-24]。在腦缺血的不同時(shí)期,NO以不同的方式改善腦組織損傷及神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[25]。腦缺血發(fā)生后,缺血區(qū)域產(chǎn)生大量自由基,自由基攻擊細(xì)胞膜引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),從而產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物(如MDA)。因此,測(cè)定腦組織中MDA含量可間接反映腦組織損傷程度[26]。SOD是重要的過(guò)氧化物分解酶,可有效清除氧自由基,從而抑制腦組織的過(guò)氧化反應(yīng),保護(hù)腦組織[25]。本研究結(jié)果顯示,豬牙皂皂苷能降低ISPBS模型大鼠腦組織中MDA、NO含量,升高其腦組織中SOD活性。這提示豬牙皂皂苷可通過(guò)抑制MDA、NO生成和促進(jìn)SOD產(chǎn)生,從而減少過(guò)氧化反應(yīng)引發(fā)的腦組織損傷。

    在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的14種caspase中,有8種被認(rèn)為參與了細(xì)胞的凋亡過(guò)程,其中caspase-3被認(rèn)為在凋亡過(guò)程中占主導(dǎo)地位,是最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶[27]。Bcl-2和Bax蛋白是具有調(diào)控細(xì)胞凋亡作用的一對(duì)重要的內(nèi)源性蛋白,Bax作為一種轉(zhuǎn)錄因子參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程,Bcl-2則可抑制Bax的作用,二者共同決定細(xì)胞的生存情況[28]。這提示豬牙皂皂苷能下調(diào)ISPBS模型大鼠腦組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)并上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)。上述結(jié)果提示,豬牙皂皂苷可以抑制神經(jīng)元凋亡從而改善腦組織損傷。

    5 結(jié)語(yǔ)

    豬牙皂皂苷對(duì)ISPBS模型大鼠具有一定的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與減少氧化損傷、減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。但是,本研究?jī)H初步探討了豬牙皂皂苷抗ISPBS的作用及可能機(jī)制,其更多的作用機(jī)制以及具體是哪種成分起作用等問(wèn)題均需要進(jìn)一步深入研究。

    參考文獻(xiàn)

    [ 1 ] GBD 2017 Causes of Death Collaborators. Global,regional,and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories,1980-2017:a syste- matic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017[J]. Lancet,2018,392(10159):1736-1788.

    [ 2 ] 《中國(guó)腦卒中防治報(bào)告》編寫(xiě)組.《中國(guó)腦卒中防治報(bào)告2019》概要[J].中國(guó)腦血管病雜志,2020,17(5):272-281.

    [ 3 ] 萬(wàn)維海,宋宏姝.從純內(nèi)傷和內(nèi)傷兼外風(fēng)論治中風(fēng)[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(15):66-67.

    [ 4 ] 劉抒雯,劉敬霞,劉超,等. 扎里奴思方對(duì)痰瘀互結(jié)型腦缺血再灌注大鼠血液流變學(xué)、血脂及自由基代謝的影響

    [J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,32(5):884-890,895,974.

    [ 5 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S]. 2020年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2020:331,1567.

    [ 6 ] ALAVIAN F,SHAMS N. Oral and intra-nasal administration of nanoparticles in the cerebral ischemia treatment in animal experiments:considering its advantages and disadvantages[J]. Curr Clin Pharmacol,2020,15(1):20-29.

    [ 7 ] 楊敬鴻,陳曉蘭,楊曉梅,等.基于信息熵理論和方差分析比較豬牙皂不同組分對(duì)小鼠缺血缺氧及血腦屏障通透性影響[J].中藥藥理與臨床,2018,34(6):83-86.

    [ 8 ] 黃繼漢,黃曉暉,陳志揚(yáng),等.藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004,9(9):1069-1072.

    [ 9 ] 張令霖,方格,連新福,等.痰瘀互結(jié)證局部腦缺血再灌注動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2018,38(12):1479-1483.

    [10] 田芳,張昊,莫燦龍,等.線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注模型的改進(jìn)及評(píng)價(jià)[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2015,31(5):665-669.

    [11] BEDERSON J B,PITTS L H,TSUJI M,et al. Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and ? ?development of a neurologic examination[J]. Stroke,1986,17(3):472-476.

    [12] 水海峰,王風(fēng),刁鐵梅,等.尼莫地平及參麥注射液對(duì)腦復(fù)蘇效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].急診醫(yī)學(xué),1996,5(3):131-134.

    [13] 賽雙橋,余海鵬,梁婉如,等.尼莫地平對(duì)腦卒中后認(rèn)知功能障礙的影響[J].中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理,2021,12(17):101-104.

    [14] 劉顯國(guó),李勝利,黃國(guó)祥,等.尼莫地平片治療急性腦出血患者的臨床研究分析[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2022,38(4):296-299.

    [15] 謝志勇,何文. N-三甲基殼聚糖對(duì)尼莫地平凝膠透皮吸收促進(jìn)作用的體外研究[J].中國(guó)藥師,2011,14(10):1420-1422.

    [16] 陳文華,饒李亮,尹晟.銀杏達(dá)莫注射液治療急性腦梗死的療效及其對(duì)血液流變學(xué)的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,12(6):788-789,792.

    [17] 王冬梅,胡俊,傅冬梅.血漿中血脂類生化指標(biāo)與腦血管病的相關(guān)性研究[J].中華老年心腦血管病雜志,2015,17(3):315-316.

    [18] 蔡友德,何前松,樊梓媛,等.基于抗氧化作用探討大黃游離蒽醌類成分對(duì)腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)機(jī)制[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2019,41(4):5-10.

    [19] BURROWS F,HALEY M J,SCOTT E,et al. Systemic inflammation affects reperfusion following transient cerebral ischaemia[J]. Exp Neurol,2016,277:252-260.

    [20] 武曉偉,劉聰,李佳,等.芪蛭通絡(luò)膠囊及其9味活血化瘀藥拆方對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥房,2019,30(19):2674-2678.

    [21] ANRATHER J,IADECOLA C. Inflammation and stroke:an overview[J]. Neurotherapeutics,2016,13(4):661-670.

    [22] 楊曉煒,姚立巖,李海紅,等.阿托伐他汀對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及炎癥機(jī)制[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2021,42(2):6-10.

    [23] SANDERSON T H,REYNOLDS C A,KUMAR R,et al. Molecular mechanisms of ischemia-reperfusion injury in brain:pivotal role of the mitochondrial membrane potential in reactive oxygen species generation[J]. Mol Neurobiol,2013,47(1):9-23.

    [24] 胡躍強(qiáng),秦紅玲,唐農(nóng),等.基于Nrf2/ARE信號(hào)通路探討清熱化瘀方對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2018,24(14):128-133.

    [25] WU L Q,XIONG X X,WU X M,et al. Targeting oxidative stress and inflammation to prevent ischemia-reperfusion injury[J]. Front Mol Neurosci,2020,13:28.

    [26] 吳桂甫,王柳萍,凌蘭,等.莪術(shù)對(duì)大鼠缺血性腦中風(fēng)的治療作用及其機(jī)制研究[J].中藥與臨床,2013,4(6):34-36.

    [27] 劉春華,劉捷.神經(jīng)元凋亡與Caspase家族及細(xì)胞周期研究進(jìn)展[J].人民軍醫(yī),2018,61(7):641-644.

    [28] YU S J,CHO I A,KANG K R,et al. Licochalcone-E induces caspase-dependent death of human pharyngeal squamous carcinoma cells through the extrinsic and intrinsic apoptotic signaling pathways[J]. Oncol Lett,2017,13(5):3662-3668.

    (收稿日期:2021-10-26 修回日期:2022-04-02)

    (編輯:林 靜)

    猜你喜歡
    機(jī)制
    構(gòu)建“不敢腐、不能腐、不想腐”機(jī)制的思考
    創(chuàng)新完善機(jī)制 做實(shí)做優(yōu)考核
    自制力是一種很好的篩選機(jī)制
    文苑(2018年21期)2018-11-09 01:23:06
    建立激勵(lì)相容機(jī)制保護(hù)數(shù)據(jù)安全
    保留和突破:TPP協(xié)定ISDS機(jī)制中的平衡
    定向培養(yǎng) 還需完善安置機(jī)制
    破除舊機(jī)制要分步推進(jìn)
    氫氣對(duì)缺血再灌注損傷保護(hù)的可能機(jī)制
    注重機(jī)制的相互配合
    打基礎(chǔ) 抓機(jī)制 顯成效
    欧美高清成人免费视频www| 一级爰片在线观看| 色5月婷婷丁香| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品成人在线| 国产精品欧美亚洲77777| 嫩草影院入口| 免费看日本二区| 在线观看一区二区三区激情| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 女性被躁到高潮视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久热这里只有精品99| 日本免费在线观看一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 日韩成人av中文字幕在线观看| 少妇 在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 美女福利国产在线 | 赤兔流量卡办理| 三级国产精品欧美在线观看| 中国三级夫妇交换| 欧美成人一区二区免费高清观看| 又爽又黄a免费视频| 国产av一区二区精品久久 | 久久6这里有精品| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品一二三| 国产乱人视频| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 午夜视频国产福利| 国产精品偷伦视频观看了| 久久ye,这里只有精品| 在线 av 中文字幕| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 搡老乐熟女国产| 乱系列少妇在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品午夜福利在线看| 秋霞伦理黄片| 亚洲av中文av极速乱| 精品久久国产蜜桃| 亚洲国产色片| 免费看不卡的av| 国产永久视频网站| 精品久久国产蜜桃| 一级黄片播放器| 18+在线观看网站| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产成人免费观看mmmm| 一级毛片电影观看| 波野结衣二区三区在线| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 婷婷色综合大香蕉| 大香蕉久久网| 中文资源天堂在线| 国产午夜精品一二区理论片| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲人成网站在线播| 国产爽快片一区二区三区| 人妻 亚洲 视频| 亚洲性久久影院| 亚洲欧美日韩东京热| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲最大av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 在线天堂最新版资源| 婷婷色综合大香蕉| 激情 狠狠 欧美| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲国产色片| 久久久久久久国产电影| 国产色爽女视频免费观看| 99re6热这里在线精品视频| 国产av码专区亚洲av| 美女主播在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 99久久精品一区二区三区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲国产欧美人成| 国产精品久久久久久精品古装| 蜜桃在线观看..| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久 成人 亚洲| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 大陆偷拍与自拍| 亚洲综合色惰| 国产片特级美女逼逼视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 男女国产视频网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品久久久久久久电影| 九色成人免费人妻av| 国产美女午夜福利| 亚洲性久久影院| 最黄视频免费看| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品一区蜜桃| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 欧美日韩在线观看h| 亚洲真实伦在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 久热久热在线精品观看| 直男gayav资源| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | av专区在线播放| 久久精品人妻少妇| 男男h啪啪无遮挡| 伊人久久国产一区二区| 两个人的视频大全免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美极品一区二区三区四区| 高清午夜精品一区二区三区| 日韩强制内射视频| 国产v大片淫在线免费观看| av福利片在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 一区二区三区乱码不卡18| 观看免费一级毛片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 偷拍熟女少妇极品色| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产免费福利视频在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 精品久久国产蜜桃| 亚洲美女搞黄在线观看| 在线天堂最新版资源| 精品久久国产蜜桃| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 永久网站在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 99久久人妻综合| 寂寞人妻少妇视频99o| 黑人猛操日本美女一级片| 91精品国产九色| 欧美最新免费一区二区三区| 97在线视频观看| 热re99久久精品国产66热6| 国产一区二区三区综合在线观看 | 熟女av电影| 看非洲黑人一级黄片| videossex国产| 亚洲国产精品国产精品| 国产成人freesex在线| 中文欧美无线码| 午夜福利视频精品| 97超碰精品成人国产| 国产一区二区三区av在线| 午夜免费鲁丝| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩av不卡免费在线播放| 久久97久久精品| 少妇精品久久久久久久| av在线观看视频网站免费| 欧美zozozo另类| 成人一区二区视频在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人免费观看mmmm| 久久国内精品自在自线图片| 观看免费一级毛片| 日韩av不卡免费在线播放| 男女国产视频网站| 日韩一区二区三区影片| 亚洲性久久影院| 日本午夜av视频| 嫩草影院新地址| 内地一区二区视频在线| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| av国产免费在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 免费看av在线观看网站| 国产探花极品一区二区| 只有这里有精品99| 免费观看的影片在线观看| 少妇的逼水好多| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本黄色日本黄色录像| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 高清午夜精品一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 成人综合一区亚洲| 少妇人妻久久综合中文| 国产69精品久久久久777片| 成人亚洲欧美一区二区av| 色哟哟·www| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 天美传媒精品一区二区| 日本欧美视频一区| 最黄视频免费看| 久久久久精品性色| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久ye,这里只有精品| 欧美高清性xxxxhd video| 在线观看av片永久免费下载| 最后的刺客免费高清国语| 国产成人a区在线观看| 日本免费在线观看一区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 在线观看人妻少妇| 男女边摸边吃奶| 大片免费播放器 马上看| 精品亚洲成国产av| 制服丝袜香蕉在线| 好男人视频免费观看在线| 亚洲欧美成人精品一区二区| 在线观看三级黄色| 老熟女久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 九色成人免费人妻av| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品视频女| 美女内射精品一级片tv| 蜜桃在线观看..| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 天美传媒精品一区二区| 国产午夜精品一二区理论片| 久久久国产一区二区| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美日韩在线观看h| 国产淫片久久久久久久久| 女性生殖器流出的白浆| 男女国产视频网站| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲国产av新网站| 久热久热在线精品观看| 久久99蜜桃精品久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲无线观看免费| 97在线视频观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 一区在线观看完整版| 亚洲四区av| 久久久精品免费免费高清| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美bdsm另类| 一级片'在线观看视频| 日韩亚洲欧美综合| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久欧美国产精品| 国产极品天堂在线| 青春草亚洲视频在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品酒店卫生间| 99热网站在线观看| 久久99热6这里只有精品| 国产成人精品久久久久久| 黄色怎么调成土黄色| 青春草国产在线视频| 亚洲成人av在线免费| 老司机影院毛片| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲怡红院男人天堂| 最近手机中文字幕大全| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 视频区图区小说| 成人特级av手机在线观看| 干丝袜人妻中文字幕| 三级经典国产精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产人妻一区二区三区在| 久久久欧美国产精品| 精品久久久久久久久亚洲| 2018国产大陆天天弄谢| 婷婷色综合大香蕉| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产一级毛片在线| 亚洲最大成人中文| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美成人一区二区免费高清观看| av在线老鸭窝| 边亲边吃奶的免费视频| 舔av片在线| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 嫩草影院入口| 精品亚洲成国产av| 我的老师免费观看完整版| 我的女老师完整版在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲精品一区蜜桃| 成人毛片60女人毛片免费| av一本久久久久| 亚洲av综合色区一区| 国产精品.久久久| 精品午夜福利在线看| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品福利在线免费观看| 韩国高清视频一区二区三区| 午夜日本视频在线| 国产美女午夜福利| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 99久国产av精品国产电影| 一个人看的www免费观看视频| 偷拍熟女少妇极品色| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲内射少妇av| 国产 精品1| 久久国产精品大桥未久av | 国产精品蜜桃在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产一区二区三区av在线| 免费在线观看成人毛片| 男的添女的下面高潮视频| 热99国产精品久久久久久7| 色网站视频免费| 91精品国产国语对白视频| 人妻 亚洲 视频| 2018国产大陆天天弄谢| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲成人av在线免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 激情五月婷婷亚洲| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美日韩在线观看h| 人妻系列 视频| 中文天堂在线官网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av网站免费在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线| 大话2 男鬼变身卡| 2021少妇久久久久久久久久久| 九九在线视频观看精品| 久久午夜福利片| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩人妻高清精品专区| 国产高清国产精品国产三级 | 国产精品成人在线| 男女国产视频网站| 国产深夜福利视频在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 深夜a级毛片| 亚洲自偷自拍三级| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一边亲一边摸免费视频| 成年免费大片在线观看| 欧美三级亚洲精品| 久久97久久精品| 免费人成在线观看视频色| 日日啪夜夜撸| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲丝袜综合中文字幕| 日本av免费视频播放| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 我的女老师完整版在线观看| 一级黄片播放器| 亚洲电影在线观看av| 欧美一区二区亚洲| 内射极品少妇av片p| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 欧美成人精品欧美一级黄| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美 日韩 精品 国产| 国产一区二区在线观看日韩| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩中文字幕视频在线看片 | 成人影院久久| 欧美日本视频| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 舔av片在线| 麻豆成人av视频| 久久99热这里只频精品6学生| 久久久久国产网址| 国产精品久久久久久av不卡| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| a 毛片基地| 在线看a的网站| 国产免费视频播放在线视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 一本久久精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产有黄有色有爽视频| 黄色怎么调成土黄色| 免费人成在线观看视频色| 草草在线视频免费看| 水蜜桃什么品种好| 欧美区成人在线视频| 深爱激情五月婷婷| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲欧洲国产日韩| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品色激情综合| 免费人成在线观看视频色| 亚洲综合色惰| 极品教师在线视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久ye,这里只有精品| 欧美高清性xxxxhd video| 欧美三级亚洲精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 欧美最新免费一区二区三区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产乱人偷精品视频| 日日撸夜夜添| 国产欧美日韩精品一区二区| 中国国产av一级| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 六月丁香七月| 永久免费av网站大全| 麻豆乱淫一区二区| 成人国产麻豆网| av在线老鸭窝| 成人影院久久| 看十八女毛片水多多多| 在现免费观看毛片| 国产黄频视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 日韩三级伦理在线观看| 久热这里只有精品99| 青青草视频在线视频观看| 女人久久www免费人成看片| av国产久精品久网站免费入址| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品久久久久久久久亚洲| 国产日韩欧美亚洲二区| 九色成人免费人妻av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费观看在线日韩| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩伦理黄色片| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美精品国产亚洲| 久久久久久久久久成人| 美女内射精品一级片tv| 欧美精品一区二区大全| 嘟嘟电影网在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 七月丁香在线播放| 国产成人午夜福利电影在线观看| 在线观看免费高清a一片| 制服丝袜香蕉在线| 欧美3d第一页| 日韩大片免费观看网站| 一级爰片在线观看| 深爱激情五月婷婷| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品一区www在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 韩国高清视频一区二区三区| a级一级毛片免费在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产av国产精品国产| 国产av码专区亚洲av| 97精品久久久久久久久久精品| 国产真实伦视频高清在线观看| av黄色大香蕉| 搡老乐熟女国产| 网址你懂的国产日韩在线| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲天堂av无毛| 亚洲国产精品国产精品| 男女国产视频网站| 成人亚洲精品一区在线观看 | 女人久久www免费人成看片| 国内精品宾馆在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品三级大全| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产深夜福利视频在线观看| 97在线视频观看| 伦理电影大哥的女人| av女优亚洲男人天堂| 亚洲美女黄色视频免费看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 777米奇影视久久| 欧美日本视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩av不卡免费在线播放| 特大巨黑吊av在线直播| 视频区图区小说| av线在线观看网站| 少妇的逼好多水| 亚洲久久久国产精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产黄片美女视频| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品成人在线| 亚洲人成网站高清观看| 久久久久久久精品精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 极品教师在线视频| 大片电影免费在线观看免费| 久久久久国产网址| 国产人妻一区二区三区在| 日韩伦理黄色片| 国产欧美日韩精品一区二区| 午夜福利视频精品| 亚洲精品自拍成人| 老熟女久久久| 舔av片在线| 九九在线视频观看精品| 成年免费大片在线观看| 亚洲精品色激情综合| 99re6热这里在线精品视频| 99久国产av精品国产电影| 成人黄色视频免费在线看| 国产色爽女视频免费观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 在线天堂最新版资源| 美女高潮的动态| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久av网站| 午夜福利影视在线免费观看| 精品人妻视频免费看| 国产高清三级在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 永久免费av网站大全| 免费看av在线观看网站| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲av在线观看美女高潮| 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久 成人 亚洲| 伊人久久精品亚洲午夜| 天堂8中文在线网| 免费大片黄手机在线观看| 国精品久久久久久国模美| 波野结衣二区三区在线| 日本欧美国产在线视频| 久久久亚洲精品成人影院| 三级国产精品片| 少妇被粗大猛烈的视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久久久久久久大av| 国产免费又黄又爽又色| 国国产精品蜜臀av免费| 国产免费又黄又爽又色| 黑人猛操日本美女一级片| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产精品三级大全| 久久久欧美国产精品| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲最大成人中文| 97热精品久久久久久| 亚洲av日韩在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲欧美精品专区久久| 晚上一个人看的免费电影| 成人国产麻豆网| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产av码专区亚洲av| 嘟嘟电影网在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲色图av天堂| 国产乱来视频区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日本黄色日本黄色录像| 国产成人aa在线观看| 日本av免费视频播放| 内地一区二区视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 好男人视频免费观看在线| 国产毛片在线视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产在线视频一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产淫片久久久久久久久| 免费高清在线观看视频在线观看| 婷婷色av中文字幕| 亚洲综合色惰| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 色综合色国产| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| tube8黄色片| av在线播放精品| 三级国产精品欧美在线观看| av线在线观看网站| 日本av手机在线免费观看| 国产爱豆传媒在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 国产成人免费无遮挡视频|