葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78、可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1、STOX1在子癇前期患者血清中表達(dá)及相關(guān)性研究

黃莉莉，黃秀敏，杜 瑜，馬玉平

廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院1.婦產(chǎn)科；2.藥學(xué)部，福建 廈門 361004

子癇作為孕婦在圍產(chǎn)期的特發(fā)性疾病，常會伴隨水腫、頭痛、惡心、嘔吐等臨床癥狀。子癇前期(preeclampsia，PE)會對孕婦器官功能甚至大腦功能造成損傷，同時威脅孕婦以及胎兒的生命健康[1]。有研究顯示，我國PE發(fā)病率高達(dá)10%左右，且呈不斷升高趨勢[2]。目前，PE的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，臨床預(yù)防及治療難度較大[3]。有研究指出，血清中細(xì)胞因子水平變化與PE發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)能夠與蛋白質(zhì)進(jìn)行折疊甚至組裝，從而維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[5]?？扇苄匝軆?nèi)皮生長因子受體1(soluble fms-like tyrosine kinase-1，sFlt-1)水平出現(xiàn)異常時，能夠間接影響到滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖，促進(jìn)疾病的發(fā)展[6]。STOX1作為易感基因，能夠隨著孕周的增長而增長，進(jìn)而參與到PE的發(fā)生、發(fā)展之中[7]。本研究旨在探討GRP78、sFlt-1、STOX1在PE患者血清中的表達(dá)及相關(guān)性?，F(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院自2020年4月至2021年4月收治的77例PE患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[8]中PE診斷標(biāo)準(zhǔn)；孕周≥20周；單胎妊娠；存在高血壓、尿蛋白癥狀；經(jīng)血壓、心電圖、24 h尿蛋白等檢查確診；妊娠前無高血壓病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤；合并其他妊娠相關(guān)疾?。恍哪I功能障礙；凝血功能障礙、免疫功能障礙；妊娠前存在糖尿病、高血壓史；合并肝炎、結(jié)核等傳染疾病。根據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)》[8]中病情嚴(yán)重程度將其分為輕度PE組(n=42)與重度PE組(n=35)。另選取50例同期于我院孕檢的健康妊娠女性為健康組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。所有孕婦均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 收集3組研究對象24 h尿液，準(zhǔn)確量取后送檢，采用全自動生化分析儀及配套試劑盒(利德曼生化股份有限公司)測定24 h尿蛋白定量。嚴(yán)格遵循試劑說明書進(jìn)行操作。計算并比較3組研究對象的平均動脈壓。體檢當(dāng)天，分別采集3組空腹外周靜脈血5 ml。常溫靜置，以3 000 r/min離心10 min，分離上清。采用雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法測定血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平。設(shè)置酶標(biāo)板為空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，每孔內(nèi)均加入50 μl稀釋液，空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔內(nèi)依次加入樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣片各50 μl，輕晃均勻，酶標(biāo)板覆膜，室溫孵育2 h。棄孔內(nèi)液體，甩干，清洗反應(yīng)板。分別加入GRP78、sFlt-1、STOX1檢測液，100 μl/孔，覆膜，常溫孵育1.0 h，棄液體，甩干、洗滌反應(yīng)板，加入100 μl/孔底物溶液，遮光顯色0.5 h，加入終止液，輕彈酶標(biāo)板終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀(型號iMark，Bio-RAD公司)450 nm處測定吸光值。嚴(yán)格遵循試劑說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對象一般資料比較 3組研究對象年齡、孕次、孕周、體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。輕度PE組、重度PE組24 h尿蛋白定量、平均動脈壓均高于健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；重度PE組24h尿蛋白定量、平均動脈壓均高于輕度PE組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組研究對象一般資料比較

2.2 3組研究對象血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平比較 輕度PE組、重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于輕度PE組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組研究對象血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平比較

2.3 血清GRP78、sFlt-1、STOX1與PE發(fā)生相關(guān)性分析 血清GRP78、sFlt-1、STOX1與PE發(fā)生呈正相關(guān)性(r=0.671、0.594、0.714，P<0.05)。

2.4 GRP78、sFlt-1、STOX1對PE的診斷價值 與GRP78、sFlt-1、STOX1單項診斷相比，三項聯(lián)合對PE的診斷價值較高(P<0.05)。見表3。血清GRP78、sFlt-1、STOX1診斷PE的ROC曲線見圖1。

圖1 血清GRP78、sFlt-1、STOX1診斷PE的ROC曲線

表3 GRP78、sFlt-1、STOX1對PE診斷指標(biāo)比較

3 討論

有學(xué)者指出，PE的發(fā)生發(fā)展與免疫調(diào)節(jié)功能、血管內(nèi)皮損傷、遺傳等因素密切相關(guān)[9]。以上原因雖然與PE的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但單獨(dú)任一因素均不能夠?qū)е翽E的發(fā)生，所以,PE的發(fā)生發(fā)展受多因素共同影響[10-11]。因此，及早有效地對PE病情作出判斷，能夠為PE的預(yù)防以及治療起到積極作用。有研究發(fā)現(xiàn)，GRP78在真核生物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上以非共價鍵形式短暫的結(jié)合新生多肽，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)的正確折疊以及裝配，并且協(xié)助其運(yùn)送[12-13]。有研究顯示，對PE胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行檢測，GRP78蛋白在各種子癇中均呈現(xiàn)高表達(dá)[14]。GRP78與PE密切相關(guān)，可能參與了PE的發(fā)生發(fā)展。sFlt-1可抑制胎盤生長因子，對滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖及血管生成產(chǎn)生影響，進(jìn)而引發(fā)妊娠期高血壓[15-16]。sFlt-1在機(jī)體中能夠與血管內(nèi)皮生長因子相結(jié)合，進(jìn)而阻斷血管內(nèi)皮生長因子的生物學(xué)反應(yīng)，促使胎盤局部出現(xiàn)缺氧的狀態(tài)，加重PE發(fā)展[17]。當(dāng)STOX1出現(xiàn)異常上升時，會導(dǎo)致細(xì)胞間的α-T-鏈接蛋白表達(dá)上調(diào)，對滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行負(fù)性的調(diào)節(jié)，進(jìn)而導(dǎo)致胎盤的前置、早剝等情況發(fā)生，嚴(yán)重威脅孕婦以及胎兒的身心健康[18-19]。有研究顯示，當(dāng)STOX1蛋白呈現(xiàn)出異常表達(dá)時，會在一定程度上抑制細(xì)胞的增殖，促進(jìn)PE進(jìn)展[20]。

本研究結(jié)果顯示，輕度PE組、重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于輕度PE組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這表明，GRP78、sFlt-1、STOX1均與PE病情嚴(yán)重程度相關(guān)，推測可能通過影響子宮螺旋動脈重鑄，滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖與分化等機(jī)制參與PE病情的發(fā)生與發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，血清GRP78、sFlt-1、STOX1與PE發(fā)生呈正相關(guān)性(r=0.671、0.594、0.714，P<0.05)。這表明，GRP78、sFlt-1、STOX1的高水平表達(dá)可能嚴(yán)重影響滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲，導(dǎo)致螺旋動脈重鑄障礙，從而在PE的發(fā)生發(fā)展中起到作用。此外，與GRP78、sFlt-1、STOX1單項診斷相比，三項聯(lián)合對PE的預(yù)測價值較高(P<0.05)。這表明，PE的發(fā)生發(fā)展為多因素共同影響，GRP78、sFlt-1、STOX1的高水平表達(dá)，通過多方面的機(jī)制導(dǎo)致胎盤供血困難，從而引發(fā)PE。因此，3個指標(biāo)聯(lián)合檢測能夠避免單個指標(biāo)檢測診斷PE的不足，有望對PE病因?qū)W研究及早期干預(yù)提供一個全新的平臺。

綜上所述，血清GRP78、sFlt-1、STOX1在PE中異常表達(dá)，并與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，測定GRP78、sFlt-1、STOX1表達(dá)水平可輔助診斷孕婦PE及病情嚴(yán)重程度。