分子病理技術(shù)在臨床診療中的應(yīng)用進展

鄧俊輝

【摘要】本次研究主要分析分子病理技術(shù)在臨床診療中的應(yīng)用現(xiàn)狀，在于準(zhǔn)確把握該項技術(shù)在臨床中的應(yīng)用價值，使其成為推動臨床診療水平增長的重要技術(shù)，準(zhǔn)確把握分子病理技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢，從而在臨床診療中進行充分利用，這將成為我國臨床醫(yī)療水平發(fā)展不可或缺的支撐。

【關(guān)鍵詞】分子病理診斷;精準(zhǔn)醫(yī)學(xué);個體化醫(yī)療

在科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展的今天，精準(zhǔn)醫(yī)療理念逐漸興起，關(guān)于精準(zhǔn)醫(yī)療的概念理解是指在基因組測序、生物信息、大數(shù)據(jù)科學(xué)等多學(xué)科交叉應(yīng)用，確保為患者提供的醫(yī)療服務(wù)具有個性化，且更加精準(zhǔn)和精細?？梢哉f，精準(zhǔn)醫(yī)療的出現(xiàn)，對于病理學(xué)的發(fā)展帶來了一定的挑戰(zhàn)，同時也是良好的發(fā)展機遇。該學(xué)科的主要內(nèi)容是借助分子以及遺傳學(xué)方法，實施腫瘤的分子病理診斷和分類，從而設(shè)計或者是驗證得出能夠針對疾病發(fā)生進行預(yù)測或者是反應(yīng)的生物標(biāo)志物，屬于臨床疾病診斷中不可或缺的患者個體化資料支持，是保證個體化綜合治療具有針對性的關(guān)鍵，符合精準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展需求。

1 分子病理技術(shù)

將分子病理技術(shù)用于感染標(biāo)本的病原微生物DNA或者RNA的提取，借助高通量測序，完成生物信息比對以及大數(shù)據(jù)科學(xué)分析，從而獲得關(guān)于病原微生物的各種屬性信息，將其用于感染的快速，精準(zhǔn)預(yù)防和治療，為臨床抗生素的合理使用提供可靠的數(shù)據(jù)支持?？梢允褂梅肿硬±砑夹g(shù)實現(xiàn)感染源的測定，相較于傳統(tǒng)的培養(yǎng)或者是血清學(xué)以及組織學(xué)檢測，不僅表現(xiàn)出更高的靈敏度，并且在特異性和準(zhǔn)確性方面也更勝一籌。現(xiàn)階段在感染性疾病診斷以及療效判斷中，關(guān)于分子病理技術(shù)的應(yīng)用效果良好，常用的技術(shù)手段包括采用原位雜交檢測EB病毒編碼的小RNA，PCR和反向點雜交法檢測乳頭狀瘤病毒DNA，熒光定量PCR技術(shù)檢測各型肝炎病毒DNA和RNA、人類單純皰疹病毒DNA、結(jié)核桿菌DNA、肺SARS病毒RNA等，這些檢測取得了很好的效果。

2在遺傳性疾病上的應(yīng)用

目前在遺傳性疾病的臨床治療過程中，涉及到的分子病理技術(shù)應(yīng)用也越發(fā)的常見，例如，使用原位雜交對染色體和DNA的水平實施病理診斷檢測能夠達到組織定位的效果，由此支持臨床病理醫(yī)生通過研究患者染色體以及基因檢測的方式，完成遺傳病的篩查和診斷，在預(yù)防家族遺傳病發(fā)生方面，有著極大的應(yīng)用價值。另外一方面，分子病理學(xué)在輔助生殖領(lǐng)域也得到了不錯的應(yīng)用，例如在胚胎植入之前，使用分子病理技術(shù)實現(xiàn)遺傳學(xué)的診斷和篩查，對胚胎的染色體正常情況進行判斷十分關(guān)鍵，保證速移植的胚胎的健康，相應(yīng)的工作流程如下：①取3～5個發(fā)育第3天的卵裂球單細胞或發(fā)育第5天的囊胚滋養(yǎng)層細胞進行DNA提取與單細胞擴增;②對質(zhì)檢達到標(biāo)準(zhǔn)的擴增產(chǎn)物進行文庫制備后再進行高通量測序;③生物信息學(xué)對結(jié)果進行分析和判讀，判斷胚胎是否正常，為胚胎移植提供參考。目前國內(nèi)遺傳性疾病的檢測中，所使用到的分子病理技術(shù)主要有高通量測序儀、熒光定量PCR技術(shù)、染色體核型分析、免疫組織化學(xué)技術(shù)、熒光原位雜交技術(shù)等，能夠針對胚胎移植前和產(chǎn)前遺傳性疾病進行有效篩查，覆蓋范圍涉及神經(jīng)系統(tǒng)、遺傳性耳聾基因、生殖系統(tǒng)等多個領(lǐng)域?？梢哉f，現(xiàn)階段的分子病理技術(shù)，在遺傳性疾病領(lǐng)域的應(yīng)用十分成熟，伴隨著該項技術(shù)的不斷發(fā)展，必然能夠發(fā)現(xiàn)更多新的致病基因以及遺傳病類別，甚至逐漸應(yīng)用于產(chǎn)前診斷以及基因治療中。但是不可否認(rèn)的是，受到現(xiàn)實條件的限制，大多數(shù)先進的分子病理技術(shù)只停留在實驗室領(lǐng)域，想要在臨床中進行大范圍的應(yīng)用仍然有很長的路要走。

3在腫瘤診斷與精準(zhǔn)治療中的應(yīng)用

將分子病理學(xué)技術(shù)應(yīng)用于惡性腫瘤的靶向基因檢測中效果顯著。現(xiàn)階段常用的基因靶向檢測技術(shù)類別主要包含以下三種：熒光原位雜交方法、實時熒光定量PCR方法和測序法。其中ARMS實時熒光定量PCR，又稱等位基因特異性PCR，采用突變擴增阻滯系統(tǒng)，與雙環(huán)探針和特異引物兩種技術(shù)結(jié)合，從而對含有突變基因的DNA樣品進行檢測。石蠟包埋組織標(biāo)本提取的DNA大部分被片段化，導(dǎo)致檢測結(jié)果缺乏準(zhǔn)確性，ARMS法在設(shè)計上能夠最大限度地縮短目標(biāo)產(chǎn)物的長度，從而解決了這一難點?？紤]到可能出現(xiàn)的擴增產(chǎn)物污染情況，在實踐中通常會運用實時PCR平臺與ARMS結(jié)合，做到擴增的閉館操作效果，就不需要產(chǎn)物的后續(xù)處理環(huán)節(jié)，整體操作更為簡便。由于靶向基因檢測在腫瘤病理診斷中的占比重大，且意義深遠，這是因為其定位準(zhǔn)確，有著較強的特異性，包括極高的敏感性及形態(tài)與功能結(jié)合等特點。

分子標(biāo)志物在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用主要有以下幾點：（1）提高病理診斷的準(zhǔn)確性;（2）有助于確定腫瘤分期及判斷患者預(yù)后;（3）有助于發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶;（4）有助于指導(dǎo)腫瘤患者的治療;（5）有助于遺傳性腫瘤易感家族的輔助診斷;（6）有助于腫瘤相關(guān)致病性微生物的發(fā)現(xiàn)。腫瘤的診斷與治療是分子病理在臨床應(yīng)用上最為廣泛的領(lǐng)域，分子病理技術(shù)可以檢測基因表達和基因突變，從而評價個體患腫瘤風(fēng)險，篩選出易感人群，實現(xiàn)腫瘤的早期預(yù)防、早期診斷、判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療，還可對疑難腫瘤進行診斷和分類、個體化診治和預(yù)后評估等[14]。ARMS是依據(jù)不同的已知突變來設(shè)計出對應(yīng)的引物，進而檢測出有突變基因。根據(jù)分子病理診斷技術(shù)檢測出某種基因的表達，了解腫瘤是否存在該基因的分子異常，以選擇和確定合適的分子靶向治療，腫瘤基因檢測在一定程度上對臨床診療方案的選擇具有極其重要的決定性以及指導(dǎo)作用，醫(yī)生依據(jù)每個肺癌患者腫瘤的個體特征進行個體化治療。準(zhǔn)確的病理診斷是正確靶向治療的前提，基于分子病理的腫瘤多基因檢測的臨床應(yīng)用，可以輔助醫(yī)生靶向用藥并判斷療效。

綜上所述，在精準(zhǔn)醫(yī)療快速發(fā)展的背景之下，基于分子水平視角，對疾病的病變性質(zhì)和生物學(xué)特性進行探究，并融入基因視角展開關(guān)于疾病的發(fā)生，發(fā)展以及轉(zhuǎn)歸的高特異和敏感性分子病理診斷必然是今后臨床關(guān)于疾病診斷的主流發(fā)展趨勢，分子病理技術(shù)部的優(yōu)勢在于能夠?qū)崿F(xiàn)分子分型，對于疾病的危險因素探索更加全面，無論是在腫瘤的早期預(yù)防，精準(zhǔn)診斷，或者是靶向治療，包括預(yù)后判斷方面，都有著良好的應(yīng)用優(yōu)勢，是提高臨床治療個體化的重要動力。

參考文獻：

[1] 劉智賢，劉漢忠. 精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)時代下臨床病理發(fā)展趨勢[J]. 科技經(jīng)濟導(dǎo)刊，2018，26（13）：127.

[2] 張波. 病理學(xué)在精準(zhǔn)醫(yī)療時代的發(fā)展[J]. 精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)雜志，2018，33（2）：98-101.