載脂蛋白B100基因、低密度脂蛋白受體基因和枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶9基因多態(tài)性與急性缺血性腦卒中伴脂代謝異常人群的相關(guān)性研究

魏建剛，張倩，孫薇，楊建波，汪毅明，林曉靜，李慧萍，徐金鳳，王蓉，韓佳容，張小寧

急性缺血性腦卒中是神經(jīng)科常見的急性腦血管疾病，具有較高的致死率、致殘率，是一種嚴(yán)重危害我國(guó)中老年人群的高發(fā)疾病。血脂代謝異常是誘發(fā)和促使血管動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素。家族性高膽固醇血癥(FH)隊(duì)列研究[1]發(fā)現(xiàn)，其中載脂蛋白B100(ApoB100)基因、低密度脂蛋白受體(LDLR)基因和枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶9(PCSK9)基因SNP位點(diǎn)異常突變導(dǎo)致脂代謝異常，其參與動(dòng)脈粥樣硬化，最終導(dǎo)致腦梗死的發(fā)生。在非FH人群中，與脂代謝密切相關(guān)的基因不同單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)突變信息，是否在脂代謝異常中起到一定的作用，仍然未得到證實(shí)。本次研究對(duì)象選取非FH人群，試圖發(fā)現(xiàn)在急性缺血性腦卒中合并脂代謝的人群中，ApoB100、LDLR、PCSK9基因不同SNP位點(diǎn)基因型和等位基因的表達(dá)與其之間的相關(guān)性，現(xiàn)將研究結(jié)果展示如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 (1)病例組：選擇2018年7月至2020年4月在我院神經(jīng)內(nèi)科住院的急性缺血性腦卒中合并脂代謝異常的患者，共60例，均符合急性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱MRI/CT證實(shí)，病因分型依據(jù)TOAST分型[2]，均為大動(dòng)脈粥樣硬化型。診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2018年中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南[3]。脂代謝異常按照《中國(guó)成人血脂異常防治指南(2016年修訂版)》[4]。同時(shí)排除FH，成人FH診斷標(biāo)準(zhǔn)：推薦應(yīng)用Shi等[5]根據(jù)中國(guó)情況改良的荷蘭(DLCNC)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)排除自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病、腫瘤性疾病、嚴(yán)重的肝腎功能不全、近期發(fā)生的感染、輸血等。(2)對(duì)照組：選擇同期我院體檢中心健康體檢者，共60人，均排除既往腦卒中病史、心腦血管病史、自身免疫性疾病史、血液系統(tǒng)疾病、腫瘤性疾病、肝腎功能不全、6個(gè)月內(nèi)外傷手術(shù)史、3個(gè)月內(nèi)有感染性疾病史。兩組年齡、性別的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

1.2 方法

1.2.1 基因多態(tài)性檢測(cè) 所有患者于入院次日靜脈采血5 ml。采用溶液法DNA提取試劑盒(北京君諾得-2504B)提取DNA。用PCR擴(kuò)增法檢測(cè)ApoB100、LDLR、PCSK-9基因6個(gè)SNP位點(diǎn)信息，通過Pubmed、genebank、HapMap對(duì)比查詢，結(jié)合文獻(xiàn)尋找與腦卒中和脂代謝異常的高頻率SNP位點(diǎn)，選擇ApoB100基因SNP rs693，LDLR基因SNP rs1433099、rs5925，PCSK-9基因SNP rs2479408、rs17111503、rs529787。rs5925、rs1433099位點(diǎn)擴(kuò)增體系中PCR Mix使用的是2×EasyTaq PCR SuperMix (+dye)(北京全式金-AS111)；其他位點(diǎn)使用的是2×SanTaq PCR Mix預(yù)混液(上海生工-B532061)。PCR擴(kuò)增體系，DNA 1 μl，F(xiàn)orward Primer (10 μmol/L) 1 μl，Reverse Primer (10 μmol/L) 1 μl，PCR Mix 25 μl,ddH2O21 μl。PCR擴(kuò)增程序，第一步預(yù)變性，溫度94 ℃，時(shí)間3 min，循環(huán)1次；第二步變性，溫度94 ℃，時(shí)間30 s；第三步退火溫度見引物序列(表2)，30 s，循環(huán)35次；第四步延伸，溫度72 ℃，24 s，第五步大延伸，溫度72 ℃，時(shí)間5 min，循環(huán)1次。SNP位點(diǎn)的PCR鑒定電泳圖見圖1、圖2。SNP位點(diǎn)的測(cè)序峰值圖見圖3、圖4。

表1 病例組和對(duì)照組基線資料比較[ x±s,例(%),n=60]項(xiàng)目病例組對(duì)照組性別(男)38(63.3)35(58.3)年齡(歲)63.56±12.3262.28±11.72體重指數(shù)(BMI,kg/m2)24.89±3.4124.73±2.98高血壓47(78.3)0糖尿病19(31.7)0冠心病23(38.3)0吸煙27(45.0)△7(11.7)總?cè)８视?TG,mmol/l)1.802±1.1311.521±0.785總膽固醇(TC,mmol/l)4.653±0.904△4.207±0.733低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C,mmol/l)3.567±0.551△2.372±0.526高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C,mmol/l)1.192±0.2761.323±0.206 注:與對(duì)照組比較△P<0.05

表2 不同基因SNP位點(diǎn)引物序列引物名稱序列片段大小(bp)退火溫度(℃)延伸時(shí)間(s)rs5925-F2GATTTGTCATCTTCCTTGCTGCC28455.124rs5925-R2GGCAGGAACGAGATCATCAGCTrs693-F2AGGCTCTGGAACTACCACAAAAA30555.124rs693-R2CCACCAATCAGAAATGTAGGTGACrs1433099-F2AATGGAAGTGGGTAGGGGTCGG29255.124rs1433099-R2ATGACCCACCCAGTGTCTTTCGAGrs2479408-F1CAAAGGGGAGCAGCAGGGAA3346124rs2479408-R1CCTGCTCTGAATCTAGGTGCTGGArs529787-F2GGTGGCAGCAGCAGAAGTGA2496124rs529787-R2GCCTGGACTGGGGTCTCTGTrs17111503-F1GTCTATGAGGGGAAGGCAATGG29056.724rs17111503-R1CCACAAGTGCTTTCTGGGTCAA

圖1 SNP位點(diǎn)rs1433099 PCR鑒定電泳圖。圖中所有樣本的PCR產(chǎn)物條帶大小均符合，顯示亮帶，可以進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)

圖2 SNP位點(diǎn)rs17111503的PCR鑒定電泳圖。圖中所有樣本的PCR產(chǎn)物條帶大小均符合，顯示亮帶，可以進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)

圖3 SNP位點(diǎn)rs1433099的AA型測(cè)序峰值。圖中測(cè)序峰型單一整齊，測(cè)序結(jié)果真實(shí)準(zhǔn)確，樣本45號(hào)該位點(diǎn)為單峰純合子，基因型為AA

圖4 SNP位點(diǎn)rs17111503的AG型測(cè)序峰值。圖中測(cè)序峰型單一整齊，測(cè)序結(jié)果真實(shí)準(zhǔn)確，其中樣本25號(hào)在該位點(diǎn)為雙峰雜合子，基因型為AG

1.2.2 基因RNA表達(dá)水平檢測(cè) 采用熒光定量分析患者白細(xì)胞中各基因RNA表達(dá)情況。

1.2.2.1 RNA提取 用1 ml TRLZOL將細(xì)胞消化于離心管中，室溫放置15 min以上；加入200 μl的氯仿，顛倒混勻后室溫放置5 min；4 ℃，12 000 r/min離心15 min，吸取上清至另一個(gè)新的離心管中；加入等體積的異丙醇混勻，-20 ℃放置60 min；4 ℃，12 000 r/min離心15 min，小心倒掉上清液；加入75%的乙醇，使沉淀漂浮起來洗滌；4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，小心倒掉上清液。重復(fù)乙醇漂洗1次。空管離心，吸盡液體。用RNase free的水溶解沉淀，核酸蛋白定量?jī)x檢測(cè)RNA濃度，瓊脂糖電泳檢測(cè)RNA完整性，RNA反轉(zhuǎn)錄用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2.2 第一鏈cDNA反應(yīng) 反應(yīng)體系配制，Total RNA定量于800 ng Random Primer (0.1 μg/μl) 1 μl、2×TS Reaction Mix 10 μl,、TransScript@RT/RI Enzyme Mix 1 μl、gDNA Remover 1 μl、RNase-free Water Up to 20 μl，輕輕混勻，25 ℃反應(yīng)10 min，85 ℃反應(yīng)5 s取出，結(jié)束反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA置于-80 ℃保存，后續(xù)熒光定量檢測(cè)的樣本cDNA使用RNase-free Water按照1∶1的比例稀釋進(jìn)行反應(yīng)。然后進(jìn)行熒光定量實(shí)驗(yàn)，熒光定量PCR體系：Eva Green 2×qPCR MasterMix 10 μl、Forward Primer 0.6 μl、Reverse Primer 0.6 μl、cDNA 1 μl、RNase-free Water Up to 20 μl。熒光定量引物信息見表3，然后進(jìn)行熒光定量PCR程序，第一步：預(yù)變性，95 ℃，10 min，循環(huán)1次；第二步：變性，95 ℃，15 s，循環(huán)0次；第三步：退火/延伸，60 ℃，60 s。

表3 熒光定量引物信息引物名稱序列(5′-3′)片段大小LDLR-FCCTGACGAATTCCAGTGCTCT149bpLDLR-RCCGCTGTGACACTTGAACTTGApoB-FCCATCACTGCCAAAGGAGAGT154bpApoB-RATTTCACTCCCATGCTCCGTTPCSK9-FCCTCACCAAGATCCTGCATGT105bpPCSK9-RTAGTCGACATGGGGCAACTTChsaGAPDH_FTGTTGCCATCAATGACCCCTT202bphsaGAPDH_RCTCCACGACGTACTCAGCG

2 結(jié) 果

2.1 兩組人群基線資料的比較 見表1。病例組患者血清TC、LDL-C水平均明顯高于對(duì)照組(均P<0.05)。

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) 見表4。Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)顯示，本試驗(yàn)所選樣本與整體樣本無差異(P>0.05)，可代表整體樣本。

表4 不同基因SNP位點(diǎn)基因型分布Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)(n=60)SNP位點(diǎn)等位基因(1/2)組別基因型頻數(shù)observed(expected)1/11/22/2Hardy-WeinbergP值rs5925T/C病例組36(33.750)18(22.500)6(3.750)0.1213對(duì)照組41(39.200)15(18.600)4(2.200)0.1345rs1433099G/A病例組22(21.600)?28(28.800)?10(9.600)?0.8296對(duì)照組38(37.600)19(19.790)3(2.600)0.7567rs693C/T病例組56(56.070)4(3.860)0(0.070)0.7894對(duì)照組54(54.150)6(5.700)0(0.150)0.6835rs2479408C/G病例組58(58.020)2(1.970)0(0.017)0.8955對(duì)照組57(57.040)3(2.925)0(0.038)0.8426rs529787C/G病例組54(54.150)6(5.700)0(0.150)0.6835對(duì)照組57(57.040)3(2.925)0(0.038)0.8426rs17111503G/A病例組26(22.820)?22(28.370)?12(8.820)?0.0821對(duì)照組40(37.600)15(19.790)5(2.600)0.0607 注:與對(duì)照組比較?P<0.05;1代表常見等位基因;2代表少見等位基因

2.3 不同基因SNP位點(diǎn)不同人群的等位基因的分布 見表4。SNP rs5925位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組TT型出現(xiàn)比例低于對(duì)照組，而CC、CT型高于對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SNP rs1433099位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組GG型出現(xiàn)比例低于對(duì)照組，而GA、AA型高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。SNP rs693位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組CC型出現(xiàn)比例高于對(duì)照組，而CT型低于對(duì)照組，TT型出現(xiàn)率為0，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SNP rs2479408位點(diǎn)等位基因型分布上，兩組人群等位基因基因型都以CC型為主，GG型在兩組出現(xiàn)率為0。SNP rs529787位點(diǎn)等位基因型分布上，兩組人群等位基因基因型都以CC型為主，GG型出現(xiàn)率為0。SNP rs17111503位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組GG型出現(xiàn)比例低于對(duì)照組，而GA、AA型高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表5 不同基因SNP位點(diǎn)等位基因在病例組與對(duì)照組中的分布及優(yōu)勢(shì)比估計(jì)(n=60)SNP位點(diǎn)等位基因病例組對(duì)照組χ2值P值OR值95%CIrs5925T90(0.750)97(0.808)0.6850.4081.5000.577～3.931C30(0.250)23(0.192)rs1433099A43(0.358)29(0.242)5.7140.0172.6671.178～6.034G77(0.642)91(0.758)rs693C116(0.967)114(0.950)0.2880.5921.6420.268～10.20T4(0.033)6(0.050)rs2479408C118(0.983)117(0.975)0.3420.5592.0360.178～23.09G2(0.017)3(0.025)rs529787C114(0.950)117(0.975)0.3780.5392.1070.182～23.89G6(0.050)3(0.025)rs17111503A46(0.383)25(0.208)4.8810.0272.4861.096～5.641G74(0.617)95(0.792)

2.4 不同基因SNP位點(diǎn)不同人群的等位基因的分布的優(yōu)勢(shì)比 見表5。SNP rs1433099位點(diǎn)等位基因型分布，等位基因A是AIS患病的危險(xiǎn)因素(OR=2.677，P<0.05)。SNP rs17111503位點(diǎn)等位基因型分布，等位基因A是AIS患病的危險(xiǎn)因素(OR=2.486，P<0.05)。

2.5 兩組患者白細(xì)胞中各基因RNA表達(dá)量的比較 見表6。病例組ApoB100、PCSK9基因RNA表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組(均P<0.05)。

表6 兩組白細(xì)胞中各基因RNA表達(dá)量的比較( x±s,n=60)組別LDLRApoB100PCSK9病例組1.877±0.9582.030±1.2773.126±1.207對(duì)照組1.344±1.1991.257±0.9541.255±0.895t值-1.900-2.657-6.819P值0.0620.0100.000

2.6 病例組SNP rs1433099和SNP rs17111503不同基因型間血脂代謝水平的比較 見表7。病例組SNP rs1433099的基因型GA+AA型LDL-C水平明顯高于GG型(P<0.05)。SNP rs17111503的基因型GA+AA型LDL-C水平明顯高于GG型(P<0.05)。

表7 病例組SNPrs1433099和SNPrs17111503不同基因型間血脂代謝水平的比較( x±s)基因型例數(shù)TCTGHDL-CLDL-Crs1433099 GG384.592±1.0951.981±1.1591.203±0.3023.443±0.510 GA+AA224.714±0.5521.621±1.0161.181±0.3163.691±0.314?rs17111503 GG404.504±0.9461.587±1.0921.216±0.3223.341±0.491 GA+AA204.802±0.7542.017±1.1271.168±0.3073.794±0.279? 注:與GG型比較?P<0.05

3 討 論

腦卒中是世界上第二大死亡原因(僅次于缺血性心臟病)，約占所有死亡人數(shù)的9%。急性缺血性卒中是最常見的類型，約占所有腦卒中的80%～90%[6]。近年來我國(guó)的流行病學(xué)資料[7]表明，腦血管疾病在人口死因順序中位居首位。與其他發(fā)達(dá)國(guó)家相比，我國(guó)腦卒中的發(fā)病率和死亡率明顯高于心血管疾病。臨床診斷FH的患者進(jìn)行ApoB100、LDLR和PCSK9基因檢測(cè)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)超過1 700個(gè)變異，但只有少數(shù)在功能上被證實(shí)可引起FH，提示FH診斷困難。有研究[8]顯示，F(xiàn)H患者中已被發(fā)現(xiàn)的變異數(shù)為L(zhǎng)DLR-1915，ApoB-107，PCSK9-139。本研究的對(duì)象排除了FH患者，研究在急性缺血性腦卒中合并脂代謝異常的人群中，是否也存在類似FH患者ApoB100、LDLR、PCSK9基因SNP多態(tài)性表現(xiàn)。

國(guó)內(nèi)外大量基礎(chǔ)和臨床研究已經(jīng)證實(shí)，ApoB作為載脂蛋白家族中的重要成員是引起ASCVD的重要病理生理基礎(chǔ)。2019年歐洲心臟病學(xué)會(huì)(ESC)和歐洲動(dòng)脈粥樣硬化學(xué)會(huì)(EAS)血脂異常管理指南[9]已經(jīng)推薦ApoB作為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方式，特別是在高TG水平的受試者中，可能有助于分類高TG血癥表型及作為其相關(guān)心血管風(fēng)險(xiǎn)的診斷指標(biāo)。ApoB是異源代謝物中作為血糖體的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白，VLDL和LDL作為肝LDL受體的主要配體，位于2p23-24的ApoB基因(ENSG00000084674)的顯著寬位點(diǎn)包含幾個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，這些位點(diǎn)被描述為心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的修改劑[10-11]。

LDLR是一種細(xì)胞表面的糖蛋白，負(fù)責(zé)結(jié)合和攝取血漿低密度脂蛋白顆粒，并發(fā)揮維持細(xì)胞膽固醇穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵作用[12]。Lee等[13]研究分析了rs688和rs5925多態(tài)性的LDLR，在中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)人口提供初步證據(jù)表明遺傳多態(tài)性LDLR與腦梗死相關(guān)。LDLR介導(dǎo)的LDL內(nèi)吞途徑被認(rèn)為是機(jī)體清除血漿LDL最為重要和高效的方式[14]。LDLR與血液中的LDL在膜上結(jié)合成LDL/LDLR復(fù)合物，后被合并到包合網(wǎng)格蛋白的囊泡中，囊泡在核內(nèi)體內(nèi)解離，LDLR自由地返回到細(xì)胞表面(循環(huán))，而LDL則被運(yùn)送到溶酶體，在溶酶體中被降解。LDLR被認(rèn)為在膽固醇體內(nèi)平衡方面發(fā)揮重要作用。LDLR基因突變可能減少LDLR的表達(dá)水平，導(dǎo)致LDL-C水平的升高，引起受體功能障礙和FH，最終誘發(fā)腦梗死的發(fā)展[15]。

PCSK9作為一種進(jìn)一步降低LDL-C水平新的治療靶點(diǎn)，它是一種強(qiáng)烈參與LDL-C代謝的蛋白[16-18]。PCSK9已被證實(shí)在調(diào)節(jié)血漿LDL-C水平中起關(guān)鍵作用，PCSK9似乎通過將受體靶向到溶酶體降解來干擾LDLR循環(huán)，導(dǎo)致LDL-C從循環(huán)中清除減少[19-21]。PCSK9基因的某些突變可以改變蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)構(gòu)，從而改變其酶活性、功能和對(duì)LDLR的親和力。根據(jù)PCSK9基因突變對(duì)血漿膽固醇水平的影響，將其分為功能獲得型突變和功能缺失型突變。功能獲得型突變的PCSK9與高膽固醇血癥密切相關(guān)，會(huì)引起動(dòng)脈粥樣硬化[22]。功能缺失型突變的PCSK9能減少LDLR的內(nèi)吞，使LDLR不容易被清除，從而降低血液膽固醇[23-24]。

本次研究對(duì)象為急性缺血性腦卒中合并脂代謝異常的人群，臨床依據(jù)TOAST分型，病因分型為大動(dòng)脈粥樣硬化型。通過研究分析ApoB100、LDLR、PCSK-9基因不同SNP位點(diǎn)信息在兩組人群的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)rs5925位點(diǎn)等位基因型分布上，TT型在兩組均占優(yōu)勢(shì)，T等位基因在病例組占比75%，對(duì)照組占比80.8%，其中CT、TT型病例組高于對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。rs1433099位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組以GG型占優(yōu)勢(shì)，G等位基因在病例組和對(duì)照組占比分別為64.2%、75.8%，A等位基因在病例組和對(duì)照組占比分別為35.8%、24.2%，而GA、AA型高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。rs693位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組以CC型為主，C等位基因在病例組占比96.7%，而CT型低于對(duì)照組，兩組均未見TT型變異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Alves等[25]在巴西老年人群中的研究發(fā)現(xiàn)，SNP rs693分型結(jié)果顯示37.6%的C等位基因?yàn)榧兒献樱?9.2%為雜合子，13.2%為T純合子。當(dāng)單獨(dú)考慮時(shí)，T等位基因的純合子的平均血清LDL和TC水平比C等位基因的雜合子和純合子的各自水平高約10 mg/dl。rs2479408位點(diǎn)等位基因型分布上，兩組人群等位基因的基因型都以CC型占優(yōu)勢(shì)，C等位基因占比98.3%，GG型在兩組變異率為0%。rs529787位點(diǎn)等位基因型分布上，兩組人群等位基因基因型都以CC型占優(yōu)勢(shì)，C等位基因占比95.0%，GG型在兩組變異率為0%。rs17111503位點(diǎn)等位基因型分布上，病例組GG型占優(yōu)勢(shì)，G等位基因在病例組和對(duì)照組占比分別為61.7%、79.2%，A等位基因在病例組和對(duì)照組占比分別為38.3%、20.8%，而GA、AA型高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過對(duì)不同SNP位點(diǎn)人群的等位基因的分布的優(yōu)勢(shì)比發(fā)現(xiàn)，rs1433099位點(diǎn)等位基因基因型，GA+AA與GG比較，等位基因A為AIS發(fā)病的危險(xiǎn)因素(OR=2.677,P=0.017)。

Yan等[26]研究發(fā)現(xiàn)LDLR基因多態(tài)性可能與腦梗死的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，其中rs11669576 A/T、rs1433099 C/T、rs5925 C/T基因多態(tài)性可能與腦梗死的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。rs17111503位點(diǎn)等位基因基因型分布，GA+AA與GG比較，等位基因A為AIS發(fā)病的危險(xiǎn)因素(OR=2.486，P=0.027)。Han等[27]發(fā)現(xiàn)PCSK9基因SNP rs17111503 AA基因型與腔隙性腦梗死的發(fā)病率之間存在顯著的強(qiáng)相關(guān)性，提示AA基因型可能在腔隙性腦梗死中起重要的致病作用，該位點(diǎn)的A等位基因通過影響中國(guó)漢族人群的低密度脂蛋白膽固醇水平和其他血清成分，增加缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)，從而導(dǎo)致腔隙性梗死的發(fā)生，與本次研究結(jié)果一致。同時(shí)還對(duì)rs1433099和rs17111503與血脂代謝水平進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)rs1433099、rs17111503的基因型GA+AA型與GG型比較，攜帶A等位基因的病例組和對(duì)照組比較，具有較高的血清LDL-C水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。Polisecki等[28]研究發(fā)現(xiàn)PCSK9基因SNP R46L(rs11591147)攜帶GT基因型與GG型相比，男性和女性的血清LDL-C水平顯著降低(P<0.001)，男性降低7.5%或10.1 mg/dl，女性降低11.9%或17.3 mg/dl，同時(shí)在TC和ApoB水平的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.001)。

通過研究與脂代謝異常密切相關(guān)的ApoB100、LDLR、PCSK9三個(gè)基因6個(gè)SNP位點(diǎn)信息，發(fā)現(xiàn)SNP等位基因位點(diǎn)發(fā)生突變的情況下，血脂代謝異常與其攜帶的等位基因和基因類型存在相關(guān)性，本次研究發(fā)現(xiàn)rs1433099(LDLR)和rs17111503(PCSK9)攜帶的等位基因A與急性缺血性腦卒中發(fā)病的危險(xiǎn)因素，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其與血清LDL-C的水平存在相關(guān)性。本次研究尚存在不足之處，納入樣本量較少，結(jié)果仍需大樣本的人群驗(yàn)證。SNP位點(diǎn)的多態(tài)性和ApoB100、LDLR、PCSK9血清水平之間的相關(guān)性值，血清PCSK9的高低和PCSK9抑制劑使用的個(gè)體差異，在基因分子水平是否存在藥物代謝的差異性等，均有待進(jìn)一步研究。