驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5的抑制劑及其抗腫瘤作用機(jī)制

林揚(yáng)， 楊宇豪， 蔣啟凌(綜述)， 魏雅嵐， 佘振宇(審校)

驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5(kinesin-5)，又名驅(qū)動(dòng)蛋白超家族成員11(kinesin family member 11，KIF11)，是一種廣泛表達(dá)于人體正常組織的蛋白，對紡錘體微管組裝、染色體排列和分離具有重要作用。在有絲分裂前期，Eg5蛋白定位于紡錘體微管和中心體，且沿微管正向運(yùn)動(dòng)。在有絲分裂的前中期，Eg5蛋白協(xié)同驅(qū)動(dòng)蛋白-14調(diào)控中心體分離，維持紡錘體結(jié)構(gòu)并促進(jìn)染色體排列。同時(shí)，周期蛋白依賴性激酶1(cyclin-dependent kinase 1，Cdk1)通過磷酸化激活Eg5蛋白，調(diào)控紡錘體微管組裝[1]。

據(jù)報(bào)道，Eg5蛋白在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)。因此，Eg5蛋白作為抗腫瘤藥物的作用靶點(diǎn)，其抑制劑在腫瘤化療過程的作用受到廣泛關(guān)注。從作用機(jī)制來看，相比于抗微管藥物或免疫抑制劑，Eg5抑制劑的抗腫瘤活性和特異性更強(qiáng)。Eg5抑制劑作為抗腫瘤藥物，其臨床前的基礎(chǔ)研究結(jié)果較有意義，但臨床上單藥治療效果不佳。基于藥物合成和用藥方案的進(jìn)一步研究，研究人員合成了更多種類的Eg5抑制劑，并且改進(jìn)了部分藥物的用藥方案。本綜述探討Eg5蛋白在細(xì)胞分裂過程中的功能及其抑制劑的抗腫瘤機(jī)制，并深入分析Eg5抑制劑在臨床應(yīng)用方面的潛力及其意義。

1 Eg5蛋白的結(jié)構(gòu)及其在細(xì)胞周期中的調(diào)控機(jī)制

Eg5蛋白由N端的馬達(dá)結(jié)構(gòu)域、螺旋卷曲結(jié)構(gòu)域和C端的尾部結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。在真核細(xì)胞中，Eg5蛋白利用ATP水解釋放的能量，沿微管正向運(yùn)動(dòng)。Eg5蛋白的尾部結(jié)構(gòu)域可抑制其與ATP的結(jié)合，減緩Eg5蛋白的運(yùn)動(dòng)速度，并與微管產(chǎn)生較強(qiáng)的作用力。Eg5蛋白協(xié)助紡錘體組裝和中心體分離，從而調(diào)控染色體排列和分離。

從G2期到M期，Eg5同源四聚體通過螺旋卷曲結(jié)構(gòu)域交聯(lián)反向平行微管。同時(shí)，Eg5蛋白拮抗平衡驅(qū)動(dòng)蛋白KIFC1和動(dòng)力蛋白(dynein)在微管上的作用力，共同調(diào)控雙極紡錘體的形成。在G2晚期，Eg5蛋白通過影響紡錘體的方向和長度，維持中心體在細(xì)胞核附近的定位。在有絲分裂前期，Eg5蛋白聚集于極間微管，產(chǎn)生作用于反向平行微管的向外作用力，最終促進(jìn)極體分離。Eg5蛋白缺失導(dǎo)致復(fù)制后的中心體分離異常，形成單極紡錘體，誘導(dǎo)有絲分裂停滯[2]。此外，Eg5蛋白促進(jìn)紡錘體微管的延伸、胞質(zhì)流動(dòng)和細(xì)胞遷移[3]。Eg5蛋白亦可協(xié)助驅(qū)動(dòng)蛋白KIF15向赤道板運(yùn)動(dòng)，調(diào)控動(dòng)粒微管組裝和染色體排列。

在細(xì)胞分裂過程中，Src家族激酶通過磷酸化Eg5蛋白馬達(dá)結(jié)構(gòu)域的Tyr-125、Tyr-211和Tyr-231 位點(diǎn)，調(diào)控紡錘體兩極分離。在有絲分裂后期，Eg5蛋白的Cdk1磷酸化位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，促進(jìn)Eg5蛋白從紡錘體兩極遷移至紡錘體或中間體[4]。此外，Eg5蛋白通過磷酸化改變動(dòng)粒微管伸展方向，限制細(xì)胞分裂后期微管的過度延伸，從而調(diào)控紡錘體微管結(jié)構(gòu)[5]。

2 Eg5蛋白的抑制劑及其靶向Eg5蛋白的作用機(jī)制

研究表明，Eg5蛋白在肝細(xì)胞癌、膀胱癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤等實(shí)體瘤中高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞的遷移能力和腫瘤預(yù)后密切相關(guān)[6-8]。Eg5蛋白可通過調(diào)控紡錘體長度參與結(jié)腸癌的病灶轉(zhuǎn)移[9]。在細(xì)胞間期，胞質(zhì)內(nèi)Eg5蛋白的分布與激素單純性前列腺癌的發(fā)生相關(guān)，而細(xì)胞核內(nèi)Eg5蛋白上調(diào)導(dǎo)致腫瘤加速轉(zhuǎn)變?yōu)檗D(zhuǎn)移性前列腺癌[10]。近年來，有關(guān)Eg5抑制劑在腫瘤治療的研究進(jìn)展較多，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

根據(jù)作用靶點(diǎn)的不同，Eg5蛋白的特異性抑制劑分為兩類：(1)一類是以早先發(fā)現(xiàn)的Monastrol及其喹唑啉酮同源物S-三苯-甲基-L-半胱氨酸(S-trityl-L-cysteine，STLC)和Ispinesib為代表。此類藥物通過結(jié)合并誘導(dǎo)Eg5蛋白的helix(螺旋)α2/loop L5(插入環(huán)可變區(qū)5)和helix α3的構(gòu)象變化，使微管誘導(dǎo)的ATP酶活性降低。(2)另一類是ATP競爭性結(jié)合抑制劑，可特異性作用于Eg5蛋白的helix α4/α6位點(diǎn)，通過影響Eg5蛋白運(yùn)動(dòng)過程的構(gòu)象轉(zhuǎn)換，使ATP無法結(jié)合和水解。這兩類變構(gòu)競爭性抑制劑主要是限制Eg5蛋白沿著微管的運(yùn)動(dòng)功能。

2.1 helix α2/loop L5和helix α3靶向抑制劑

2.1.1 Monastrol 通過表型篩查發(fā)現(xiàn)的小分子抑制劑Monastrol，可特異性結(jié)合至Eg5蛋白的馬達(dá)結(jié)構(gòu)域并誘導(dǎo)其發(fā)生變構(gòu)，從而抑制Eg5蛋白與微管結(jié)合所引起的ADP釋放[11]。同時(shí)，Monastrol誘導(dǎo)的Eg5蛋白構(gòu)象變化，使得Eg5蛋白與微管緊密結(jié)合，抑制了Eg5蛋白沿微管的正向運(yùn)動(dòng)[12]。此外，特定催化狀態(tài)下形成的Eg5-ADP-Monastrol復(fù)合體，以極弱的分子摩擦阻力沿著反向平行微管緩慢滑行，破壞了Eg5蛋白與驅(qū)動(dòng)蛋白14的平衡，導(dǎo)致反向平行微管分離異常[13]。

2.1.2 STLC 大蒜中提取的STLC是一種與Eg5蛋白緊密結(jié)合的選擇性變構(gòu)抑制劑。STLC通過降低Eg5-ADP與磷酸基團(tuán)結(jié)合的緊密程度，抑制中心體分離，誘導(dǎo)單極紡錘體形成，導(dǎo)致有絲分裂停滯和細(xì)胞凋亡。此外，STLC誘導(dǎo)loop L5向下擺動(dòng)，關(guān)閉抑制物結(jié)合袋的入口，穩(wěn)定Eg5蛋白與STLC的結(jié)合[14]。STLC的作用機(jī)制與Monastrol類似，但前者與Eg5蛋白的結(jié)合更緊密。同時(shí)，STLC通過抑制loop L5的結(jié)構(gòu)變化，使Eg5蛋白無法以運(yùn)動(dòng)狀態(tài)結(jié)合至微管，達(dá)到更強(qiáng)抑制效果。另外，STLC對Eg5蛋白微管扭轉(zhuǎn)力的抑制擾亂了紡錘體微管的順時(shí)螺旋結(jié)構(gòu)，破壞了紡錘體的手性結(jié)構(gòu)[15]。

2.1.3 藤黃雙黃酮(Morelloflavone) 植物中提取的Morelloflavone通過緊密結(jié)合Eg5蛋白抑制Eg5蛋白的紡錘體組裝功能。與STLC不同，Morelloflavone使Eg5蛋白與ADP形成更為穩(wěn)定的構(gòu)象，抑制了Eg5-ADP和Eg5-ATP的構(gòu)象轉(zhuǎn)化，降低了Eg5蛋白與ATP和微管的親和力。同時(shí)，Morelloflavone抑制了ATP酶活性，影響Eg5蛋白沿微管運(yùn)動(dòng)的功能[16]。

2.1.4 伊斯平斯(Ispinesib) 作為第一個(gè)進(jìn)入臨床化療的小分子Eg5抑制劑，Ispinesib與STLC類似，通過誘導(dǎo)Eg5蛋白構(gòu)象變化而降低Eg5-ADP與磷酸基團(tuán)結(jié)合的緊密程度。Ispinesib不受限于Eg5蛋白的催化位點(diǎn)狀態(tài)及與微管的結(jié)合狀態(tài)，可結(jié)合到loop L5，并提前誘導(dǎo)連接結(jié)構(gòu)域(neck linker)的結(jié)合[17]，通過阻止ADP的釋放而抑制Eg5蛋白的微管運(yùn)動(dòng)。

2.1.5 非蘭尼塞(Filanesib，Arry-520) Filanesib是目前處于臨床開發(fā)階段、高選擇性的小分子Eg5抑制劑。Filanesib通過結(jié)合到Eg5蛋白的馬達(dá)結(jié)構(gòu)域達(dá)到抑制效果。同時(shí)，在Eg5高表達(dá)的血液瘤細(xì)胞中，survivin的表達(dá)使Filanesib的抑制活性增強(qiáng)[18]。免疫缺陷小鼠模型及血液瘤患者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，機(jī)體對Filanesib的合理用藥較Ispinesib具備更良好的耐受性[19-20]。

2.1.6 K858 K858是基于表型篩查的小分子Eg5抑制劑，抑制Eg5蛋白的作用，使得細(xì)胞形成四倍體。K858是在癌癥治療中較常用的Eg5抑制劑，能夠降低胃腺癌細(xì)胞的侵襲性。與其他抑制劑一致，K858不抑制微管聚合，因此并不具備明顯的細(xì)胞神經(jīng)毒性[21]。

2.1.7 Dimethylenastron 相較于二氫嘧啶同源物，Dimethylenastron具備與Eg5蛋白變構(gòu)位點(diǎn)更高的親和力，使Eg5-ADP構(gòu)象更為穩(wěn)定，可有效抑制Eg5蛋白的作用活性，并上調(diào)熱休克蛋白70的表達(dá)。作為化療藥物，Dimethylenastron的副作用相對較小，且不影響Eg5蛋白與微管的相互作用[22]。

2.1.8 AZD4877 AZD4877作為化學(xué)合成的Eg5選擇性抑制劑，可作用于變構(gòu)位點(diǎn)，抑制Eg5蛋白的微管運(yùn)動(dòng)。因其具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)特性和活性，在腫瘤疾病治療中具有潛在價(jià)值[23]。

2.1.9 YL001 YL001是計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)出的STLC類似物，其結(jié)構(gòu)異于其他Eg5抑制劑。YL001不僅抑制Eg5蛋白的ATP酶活性，而且可使Eg5蛋白過度磷酸化，從而抑制Eg5蛋白沿微管運(yùn)動(dòng)。YL001在黑色素瘤細(xì)胞及耐藥株中抑制活性明顯[24]。

2.2 helix α4/α6靶向抑制劑

2.2.1 GSK-1和GSK-2 雙芳基化合物GSK-1和GSK-2靶向定位于helix α4/α6位點(diǎn)之間，抑制了Eg5蛋白沿微管運(yùn)動(dòng)時(shí)連接結(jié)構(gòu)域的構(gòu)象變化，從而影響ATP的水解及循環(huán)。因此，可誘導(dǎo)單極紡錘體的形成和細(xì)胞周期停滯，并可對Ispinesib耐藥細(xì)胞株產(chǎn)生抑制效用[25]。

2.2.2 噠嗪類藥物(Pyridazine analogs) 高通量虛擬篩選出的Pyridazine類藥物，對Eg5蛋白具有良好的親和力，與ATP競爭性結(jié)合Eg5蛋白的helix α4/α6 位點(diǎn)，從而有效抑制Eg5蛋白[26]。同時(shí)，機(jī)體對Pyridazine類藥物具有良好的吸收、代謝和排泄能力[26]。

3 Eg5抑制劑的抗腫瘤活性與機(jī)制

基于Eg5抑制劑的作用機(jī)制，以及Eg5蛋白在腫瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)，關(guān)于Eg5抑制劑的亞臨床研究有一定進(jìn)展。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，K858通過抑制紡錘體微管組裝和激活紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)，長期給藥誘導(dǎo)有絲分裂細(xì)胞死亡、多倍體形成和細(xì)胞衰老，實(shí)現(xiàn)抗腫瘤作用[21]。體外研究發(fā)現(xiàn)，AZD4877具備良好的藥代動(dòng)力學(xué)特性，且對胃腸道、膀胱及血液等組織器官的腫瘤細(xì)胞系的增殖有抑制效果。在黑色素瘤異種移植的小鼠模型中，YL001的腫瘤抑制效果使小鼠生存率提高至60%[24]。以上研究表明了Eg5抑制劑的抗腫瘤活性，相關(guān)作用機(jī)制值得進(jìn)一步探討。

3.1 抗腫瘤細(xì)胞增殖活性 Eg5蛋白通過調(diào)控細(xì)胞分裂紡錘體組裝在細(xì)胞周期中發(fā)揮重要作用。Eg5抑制劑AZD4877能有效誘導(dǎo)晚期人結(jié)腸癌等實(shí)體瘤細(xì)胞單極紡錘體的形成[23,27]，激活紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)，從而活化泛素連接酶APC/C，使細(xì)胞停滯在G2/M期。另外，Eg5抑制劑可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞躲避有絲分裂的阻滯作用，沉默紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)，發(fā)生有絲分裂逃逸，使細(xì)胞停止在G1期或形成多倍體[21-22]，從而達(dá)到廣泛的抗腫瘤增殖活性。在此基礎(chǔ)上，Eg5抑制劑對腫瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)了其抗腫瘤活性。

3.2 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡活性 Eg5抑制劑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡主要通過激活細(xì)胞內(nèi)源性凋亡通路完成，并依賴紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)抑制異常的細(xì)胞增殖并引發(fā)凋亡。細(xì)胞周期檢查點(diǎn)激酶1(cell cycle checkpoint kinase，CHK1)和Eg5蛋白的靶向抑制可影響ER+/PR+/HER2-乳腺癌腫瘤細(xì)胞的存活[27]。在檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白BubR1/Mad2缺失的情況下，Monastrol并沒有達(dá)到抑制腫瘤生長的作用[28]。在紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)完全缺失的情況下，Eg5抑制劑誘導(dǎo)的非整倍體細(xì)胞的形成反而促進(jìn)腫瘤發(fā)生。同時(shí)，抑制劑YL001及K858可激活凋亡相關(guān)蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase 3/9)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[21,24]，而STLC的衍生物則通過使聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)裂解而誘發(fā)細(xì)胞凋亡[29]。此外，Eg5抑制劑更易誘導(dǎo)血液惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡[18]。

腫瘤細(xì)胞的凋亡與腫瘤的發(fā)生進(jìn)程息息相關(guān)，并與腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性有關(guān)。凋亡依賴抑癌基因p63在浸潤性膀胱癌而非早期膀胱癌中高表達(dá)。AZD4877可誘導(dǎo)浸潤性膀胱癌細(xì)胞的p63基因及其下游靶點(diǎn)c-myc基因的表達(dá)[30]。通過c-myc、周期蛋白等S期促進(jìn)因子上調(diào)Eg5蛋白的表達(dá)水平，提高腫瘤細(xì)胞對Eg5抑制劑的敏感性。另外，乳腺癌細(xì)胞中蛋白酶B(AKT)的抑制顯著下調(diào)了凋亡抑制基因survivin，使K858達(dá)到更強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡效果[21]。綜上所述，Eg5抑制劑的腫瘤殺傷作用與PI3K/AKT信號通路密切相關(guān)。此外，Monastrol作為實(shí)體瘤中高表達(dá)的NAD(P)H脫氫酶1的結(jié)合底物，可激活氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡[7-8]?；诓糠諩g5抑制劑的抗氧化性，探究其在含大量自由基的腫瘤細(xì)胞中的應(yīng)用具有較好的研究前景。因此，深入探究腫瘤細(xì)胞的凋亡機(jī)制及其與Eg5抑制劑的聯(lián)系，對腫瘤的臨床治療具有指導(dǎo)意義。

3.3 腫瘤細(xì)胞耐藥性 獲得性耐藥常見于轉(zhuǎn)運(yùn)體活性改變或藥物靶點(diǎn)突變的腫瘤細(xì)胞。最早發(fā)現(xiàn)的Eg5天然抑制劑Terpendole E及其生物制劑僅影響Eg5蛋白與微管的連接[31]。而以Monastrol為代表的藥物則靶向作用于Eg5蛋白馬達(dá)結(jié)構(gòu)域的helix α2/loop L5和helix α3區(qū)域。因?yàn)镋g5蛋白的N端結(jié)構(gòu)域是抑制劑的作用靶點(diǎn)，其突變將導(dǎo)致細(xì)胞耐藥。loop L5調(diào)控Eg5蛋白與Monastrol/STLC等抑制劑的變構(gòu)結(jié)合，抑制劑易誘導(dǎo)Eg5蛋白loop L5(D130A/A133D)位點(diǎn)突變，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥且不喪失酶活性，而helix α3(L214A)位點(diǎn)的突變卻使腫瘤細(xì)胞對Ispinesib更為敏感[32-33]。另一靶點(diǎn)helix α4/α6的突變可抵抗Pyridazine類藥物或GSK-1對Eg5蛋白的抑制作用[25-26]。不同靶點(diǎn)藥物的聯(lián)用可較好抑制Eg5蛋白的紡錘體組裝功能。同時(shí)，變構(gòu)競爭性抑制劑與活性中心競爭性酶抑制劑的組合可有效避免靶點(diǎn)突變導(dǎo)致的細(xì)胞耐藥性。進(jìn)一步探究核苷酸位點(diǎn)結(jié)合抑制劑(如噻唑類藥物)，對Eg5抑制劑的臨床應(yīng)用也有一定意義。

有趣的是，Eg5蛋白的C端結(jié)構(gòu)域截?cái)嗤蛔兡軌蚴鼓[瘤細(xì)胞對STLC耐藥，并通過促進(jìn)自身磷酸化維持極間微管的交聯(lián)和KIF15的正確定位[34]。此外，K858導(dǎo)致的survivin表達(dá)上調(diào)[21]，以及Dimethylenastron導(dǎo)致的熱休克蛋白70表達(dá)上調(diào)[22]，使得腫瘤細(xì)胞對化療敏感性下降。而在Monastrol耐藥細(xì)胞中表達(dá)升高的circRNAs-MTO1，通過抑制Eg5蛋白的翻譯殺傷乳腺癌細(xì)胞，同時(shí)改善了腫瘤細(xì)胞對Monastrol的耐藥性[35]。一般來說，除了微管蛋白的突變和微管動(dòng)力學(xué)改變，紫杉醇(Taxol)耐藥細(xì)胞的形成還與P-糖蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)。然而，小分子Eg5抑制劑對細(xì)胞的作用并不依賴P-糖蛋白。因此，探究腫瘤細(xì)胞對Eg5抑制劑的耐藥性形成機(jī)制可為臨床化療方案提供參考。

4 Eg5抑制劑的臨床應(yīng)用及其進(jìn)展

4.1 單藥的臨床應(yīng)用進(jìn)展 在Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)中，AZD4877雖然對晚期實(shí)體瘤和難治性血液瘤表現(xiàn)出較好的Eg5蛋白抑制效果，但療效欠佳[36]。同時(shí)，Ispinesib在復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤和頭頸部鱗狀細(xì)胞癌無明顯療效[37-38]。然而，腫瘤細(xì)胞內(nèi)Eg5蛋白的高表達(dá)仍是治療靶點(diǎn)的有利支持?；贓g5抑制劑良好的體外抗腫瘤活性，以及Ispinesib和AZD4877等良好的機(jī)體耐受性，研究人員進(jìn)一步探究了Eg5抑制劑對腫瘤患者的療效。超過閾值劑量的Filanesib與地塞米松及蛋白酶體抑制劑聯(lián)用，對難治性惡性血液腫瘤具有效用[19-20]。因此，進(jìn)一步研究Eg5抑制劑與其他藥物的聯(lián)用以及用藥劑量和用藥時(shí)效等具有一定臨床價(jià)值。

4.2 Eg5抑制劑與抗微管活性藥物的聯(lián)用 抗微管活性藥物影響間期囊泡運(yùn)輸而產(chǎn)生神經(jīng)毒性，所以機(jī)體耐受性相對較差。與常規(guī)抗微管活性藥物相比，Eg5抑制劑Monastrol對腫瘤具有更好的特異性[39]，并且STLC對紫杉醇或吉西他濱耐藥腫瘤細(xì)胞依舊有效[40]。長春堿協(xié)同Monastrol或Ispinesib在ER-/PR-/HER2-乳腺癌細(xì)胞系表現(xiàn)出更高效的選擇性[41]。因此，Eg5抑制劑能夠補(bǔ)充抗微管活性藥物的抗腫瘤活性。

另外，Ispinesib與多烯紫杉醇聯(lián)用對晚期實(shí)體瘤患者產(chǎn)生可耐受的細(xì)胞毒性和非積累性的中性粒細(xì)胞減少[42]，表明二者聯(lián)用存在一定可行性。然而，紫杉醇反而降低Eg5抑制劑對卵巢癌及乳腺癌的效用[43]。沙戈匹隆(Sagopilone)對廣泛的異質(zhì)性乳腺癌具備較紫杉醇更好的效果，但其與Eg5抑制劑并無抗腫瘤的協(xié)同效應(yīng)[44]。此外，藥物使用導(dǎo)致survivin表達(dá)的上調(diào)和凋亡信號的分子改變等亦影響二者的聯(lián)用效果[21]。進(jìn)一步探究Eg5抑制劑與抗微管活性藥物的組合，可為Eg5抑制劑的臨床用藥提供更多元化的方案。

4.3 Eg5抑制劑與免疫抑制劑的聯(lián)用 通過聯(lián)用免疫抑制劑，機(jī)體對藥物表現(xiàn)出良好的耐受性。臨床試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)了Ispinesib增強(qiáng)曲妥珠單抗、拉帕替尼的抗腫瘤活性[45]。臨床Ⅰ/Ⅱ期實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)ilanesib與地塞米松及泊馬度胺、卡非佐米(Carfilzomib)等蛋白酶體抑制劑聯(lián)用表現(xiàn)出對難治性多發(fā)性骨髓瘤更好的效用[19-20]。通過延長超過閾值濃度Ispinesib及Filanesib等藥物的暴露時(shí)間，使更多的細(xì)胞進(jìn)入藥物敏感期，可優(yōu)化抑制劑的療效[38]。此外，低劑量的紫杉醇與免疫抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用足以支持抗腫瘤的免疫檢測[46]。未來的研究重點(diǎn)不僅是調(diào)整Eg5抑制劑與免疫抑制劑的化療方案，更重要的是通過免疫檢測判斷藥物效用和機(jī)體免疫應(yīng)答能力。

4.4 Eg5抑制劑對不同種類腫瘤的療效差異 雌激素受體陽性的乳腺癌細(xì)胞對STLC和Monastrol的腫瘤抑制效果更為敏感[47]，但雌激素并不會(huì)強(qiáng)化其他腫瘤細(xì)胞對Eg5抑制劑的敏感性。相反，MTO1的上調(diào)會(huì)抑制癌癥細(xì)胞中Eg5蛋白的表達(dá)水平[35]。這說明不同種類的腫瘤細(xì)胞可通過不同因素調(diào)節(jié)Eg5蛋白水平。因此，臨床療效欠佳理應(yīng)考慮到協(xié)作Eg5蛋白功能的因子，以及機(jī)體長期用藥而導(dǎo)致此類因子的表達(dá)異常而導(dǎo)致耐藥。這不僅可解釋臨床上Eg5抑制劑對不同分化及不同種系的腫瘤細(xì)胞的差異性效用，還為Eg5蛋白作為癌癥臨床治療靶點(diǎn)提供新的研究思路。

5 展 望

驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5在有絲分裂中的重要性使其成為腫瘤化療藥物的研究熱點(diǎn)。Eg5抑制劑通過誘導(dǎo)Eg5蛋白運(yùn)動(dòng)域構(gòu)象變化，從而表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制效果。Eg5抑制劑通過激活紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在體外表現(xiàn)出高效的抗腫瘤活性。但是，Eg5抑制劑在臨床現(xiàn)有的試驗(yàn)數(shù)據(jù)中并未表現(xiàn)出良好的腫瘤療效，有待進(jìn)一步研究。

細(xì)胞耐藥性形成與Eg5蛋白結(jié)構(gòu)突變或其他相關(guān)蛋白異常表達(dá)有關(guān)。進(jìn)一步探究Eg5抑制劑與其他抗腫瘤藥物的聯(lián)系，或研究相關(guān)分子對腫瘤細(xì)胞Eg5蛋白功能的影響，對優(yōu)化藥物抗癌效用有積極的臨床意義。同時(shí)，抑制劑誘導(dǎo)變構(gòu)的兩個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)，對臨床聯(lián)合用藥提高Eg5抑制劑的抗腫瘤的有效性和患者生存率提供了新的可能。以上思路可以為未來優(yōu)化Eg5抑制劑在腫瘤治療中提供借鑒和參考。