雙歧桿菌活菌輔助治療對(duì)慢性腹瀉患兒腸屏障功能、炎性因子及細(xì)胞免疫的影響

方秋月，文多花，付玲

(桂林市婦幼保健院，1.兒科；2.產(chǎn)科，廣西 桂林 541000；3.湖南省婦幼保健院兒科，湖南 長(zhǎng)沙 410005)

小兒慢性腹瀉主要是因細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲感染所致的一種消化道疾病，以腹痛、嘔吐、發(fā)熱、大便次數(shù)增加及形狀改變?yōu)橹饕卣鳎冒l(fā)于嬰幼兒，一旦治療不及時(shí)可引發(fā)脫水、電解質(zhì)紊亂等，給患兒的生長(zhǎng)發(fā)育及免疫功能造成嚴(yán)重影響[1-2]。目前臨床治療小兒慢性腹瀉主要通過調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)、改善腸道內(nèi)環(huán)境、保護(hù)腸道黏膜來緩解腹瀉癥狀。蒙脫石散作為一種胃腸道保護(hù)劑，可有效預(yù)防病原因子入侵消化道，但對(duì)于部分病情較為嚴(yán)重的患兒治療效果常不理想[3]。雙歧桿菌活菌屬于一種腸道微生態(tài)制劑，可有效糾正失調(diào)的腸道菌群，修復(fù)免疫機(jī)制，重建腸道天然生物屏障，在小兒慢性腹瀉治療中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[4]。目前雙歧桿菌活菌輔助治療小兒腹瀉的臨床研究已屢見不鮮，但在聯(lián)合用藥作用機(jī)制對(duì)腸屏障功能及免疫功能方面的報(bào)道較少。本研究旨在探討雙歧桿菌活菌輔助治療對(duì)慢性腹瀉患兒腸屏障功能、炎性因子及細(xì)胞免疫的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年10月至2021年10月桂林市婦幼保健院收治的94例慢性腹瀉患兒為研究對(duì)象，根據(jù)治療方式不同分為研究組和對(duì)照組，每組各47例。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，患兒家長(zhǎng)充分知情后自愿簽訂同意書。兩組患兒年齡、性別、病程、腹瀉次數(shù)、腹瀉原因、脫水程度及腹瀉類型等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患兒均符合《諸福堂實(shí)用兒科學(xué))》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)經(jīng)臨床檢查為細(xì)菌或病毒感染及消化不良等原因所致的非感染性腹瀉；(3)年齡1～5歲；(4)腹瀉>4次/d。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)急性感染性腹瀉；(2)合并重大系統(tǒng)性疾??；(3)嚴(yán)重肝腎功能障礙；(4)造血系統(tǒng)疾?。?5)免疫缺陷性疾?。?6)胃腸道畸形；(7)重度營(yíng)養(yǎng)不良，重度脫水；(8)過敏體質(zhì)；(9)治療依從性差及資料不全者。

表1 兩組患兒一般資料比較

1.2 方法

所有患兒入院后均完成血常規(guī)、病原菌等常規(guī)檢查，同時(shí)給予補(bǔ)液、糾正水電解質(zhì)紊亂、退熱、營(yíng)養(yǎng)支持等，感染性腹瀉者將0.08～0.1 g/kg頭孢西丁(深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司)采用0.9%生理鹽水150 mL稀釋后靜脈滴注進(jìn)行抗感染治療，連續(xù)治療4～5 d。對(duì)照組患兒在此基礎(chǔ)上口服蒙脫石散(北京萬輝雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司)治療，1～2歲1.0 g/次，2～3歲1.5 g/次，>3歲2.0 g/次；3次/d。研究組患兒在對(duì)照組的基礎(chǔ)上口服雙歧桿菌三聯(lián)活菌散(上海信誼藥廠有限公司)治療，給藥劑量及次數(shù)與對(duì)照組相同。兩組患兒療程均為7 d。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)臨床療效[6]：顯效為腹瀉相關(guān)癥狀完全消除，大便次數(shù)及性狀恢復(fù)正常；有效為腹瀉相關(guān)癥狀顯著緩解，大便次數(shù)明顯減少，性狀基本恢復(fù)；無效為腹瀉相關(guān)癥狀、大便次數(shù)及性狀均無明顯改善?？傆行?(顯效例數(shù)+有效例數(shù)) /總例數(shù)×100%。(2)腸屏障功能： 治療前及治療結(jié)束前1 d囑患者持續(xù)空腹>8 h，分別采集次日晨起外周靜脈血5 mL，3 000 rpm離心10 min，采用分光光度法測(cè)定二胺氧化酶、D-乳酸及內(nèi)毒素水平；采集患兒新鮮糞便1 g，稀釋、勻漿后于培養(yǎng)基上接種、培養(yǎng)，采用API20E型菌群檢測(cè)系統(tǒng)使用活菌平板計(jì)數(shù)法測(cè)定乳酸菌、雙歧桿菌及球菌數(shù)量。(3)炎性因子水平：按照(2)的方法收集分離出的血清，將10 μL血清+150 μL的氨基乙酸緩沖液+150 μL的0.2%w/v免疫復(fù)合物制成乳膠顆粒超敏化C反應(yīng)蛋白抗體液，選擇PA120特定蛋白儀(深圳市錦瑞電子有限公司)及CRP配套試劑盒(貨號(hào)：32-65432)根據(jù)說明采用速率散射比濁法測(cè)C反應(yīng)蛋白(CRP)水平；將50 μL血清樣本加入樣板條空中，在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1 h，在對(duì)照孔內(nèi)加入酶標(biāo)記物，混勻震蕩，37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)0.5 h，洗板后在對(duì)照組空中加50 μL底物緩沖液混勻震蕩，室溫下培養(yǎng)0.5 h，最后在樣板孔中加50 μL終止液混勻后使用酶標(biāo)儀讀數(shù)。利用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定 IL-6(貨號(hào)：69-87588)、IL-10(貨號(hào)：69-32166)、TNF-α(貨號(hào):69-88631)、IFN-γ(貨號(hào)：69-89573)水平[7]。所有試劑盒均購(gòu)自由武漢默沙克生物科技有限公司。(4)檢測(cè)免疫指標(biāo)水平：按照(2)的方法收集分離出的血清，采用免疫比濁法測(cè)定免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)水平，利用免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)CD4+/CD8+水平[8]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒臨床療效比較

研究組患兒治療總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.045,P=0.025)。見表2。

表2 兩組患兒臨床療效比較[n(%)]

2.2 兩組患兒腸屏障功能指標(biāo)水平比較

治療前，兩組患兒各腸屏障功能指標(biāo)水平無顯著差異(P>0.05)。治療后，兩組患兒二胺氧化酶、D-乳酸、內(nèi)毒素及腸球菌水平均降低，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)；乳桿菌與雙歧桿菌均升高，且觀察組高于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患兒腸屏障功能指標(biāo)水平比較

2.3 兩組患兒炎性因子水平比較

治療前，兩組患者各炎性細(xì)胞因子水平比較，無顯著差異(P>0.05)。治療后，兩組患兒IL-6、CRP及TNF-α水平均降低(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)；IFN-γ及IL-10水平升高(P<0.05)，且觀察組高于對(duì)照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組患兒炎性因子水平比較

2.4 兩組患兒免疫指標(biāo)水平比較

治療前，兩組患兒IgM、IgA、IgG及CD4+/CD8+免疫指標(biāo)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組患兒上述免疫指標(biāo)水平均升高，且觀察組高于對(duì)照組(P<0.05)。見表5。

表5 兩組患兒免疫指標(biāo)水平比較

3 討論

兒童腸道屏障功能較弱，消化系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)尚不健全，當(dāng)遭受病原體侵襲時(shí)則易破壞腸道內(nèi)微循環(huán)，使菌群失調(diào)而誘發(fā)腹瀉[9]。針對(duì)小兒腹瀉臨床上常給予補(bǔ)液、糾正水電解質(zhì)紊亂、退熱、抗病毒、止瀉等常規(guī)治療，但治療周期較長(zhǎng)，且無法改善腸道內(nèi)環(huán)境。

腸道微生態(tài)紊亂則會(huì)誘發(fā)局部炎癥反應(yīng)，破壞腸道黏膜屏障功能，當(dāng)腸黏膜通透性異常時(shí)則會(huì)導(dǎo)致腸道細(xì)菌產(chǎn)生大量D-乳酸并由門靜脈進(jìn)入血液循環(huán)，另外當(dāng)腸粘膜上皮細(xì)胞受損則會(huì)促進(jìn)二胺氧化酶合成及釋放并進(jìn)入血液，當(dāng)腸道菌群是挑食還可導(dǎo)致腸道內(nèi)致病菌大量增殖而釋放內(nèi)毒素，進(jìn)一步破壞腸道黏膜屏障[10]。IL-6、TNF-α及CRP均為促炎因子，其水平與炎性反應(yīng)程度呈正相關(guān)[11]。IL-10為抗炎因子，可抑制促炎因子的產(chǎn)生及釋放。IFN-γ屬于一種抗炎因子，具有抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)控的作用。當(dāng)腸黏膜損傷后則會(huì)促進(jìn)局部大量炎性促炎因子的釋放，引發(fā)炎性反應(yīng)[12]。

蒙脫石散是治療小兒腹瀉的首選藥物，口服后可快速分布與消化道黏膜，同時(shí)通過靜電作用吸附致病菌及其毒素，并與消化道黏液糖蛋白結(jié)合來修復(fù)及增強(qiáng)腸黏膜屏障，且不影響腸胃的正常蠕動(dòng)[13]。雙歧桿菌三聯(lián)活菌散則可有效補(bǔ)充腸道缺失的生理菌群，糾正菌群紊亂，恢復(fù)腸道內(nèi)微環(huán)境穩(wěn)態(tài)，同時(shí)在腸道黏膜表現(xiàn)形成生物屏障，地址病原體的繼續(xù)入侵，修復(fù)受損的腸黏膜組織，抑制炎性反應(yīng)，從而恢復(fù)腸道固有的健康狀態(tài)，與蒙脫石散聯(lián)用具有協(xié)同增效的作用[14]。

本研究結(jié)果表明，研究組患兒治療總有效率較對(duì)照組高(P<0.05)，原因可能為蒙脫石散進(jìn)入機(jī)體后可降低腸道所吸收的毒素，增強(qiáng)腸道屏障功能，輔助雙歧桿菌三聯(lián)活菌散則可促進(jìn)腸道內(nèi)菌群平衡的恢復(fù)，腸道易于吸收，恢復(fù)腸道固有的健康狀態(tài)，從而緩解腹瀉癥狀。治療后，研究組患兒二胺氧化酶、D-乳酸、內(nèi)毒素及腸球菌水平低于對(duì)照組(P<0.05)，乳桿菌與雙歧桿菌水平高于對(duì)照組(P<0.05)。當(dāng)患兒腸道遭受病原微生物侵襲時(shí)則可引發(fā)炎性反應(yīng)，從而損傷腸道上皮細(xì)胞，使腸道菌群紊亂，內(nèi)毒素、二胺氧化酶、D-乳酸水平持續(xù)升高，進(jìn)而引起腸道黏膜屏障功能損傷，這進(jìn)一步闡明了蒙脫石散可降低腸道所吸收的毒素，增強(qiáng)腸道屏障功能的作用機(jī)制，而雙歧桿菌活菌通過增加腸道有益菌菌落數(shù)量、糾正腸道菌群的失調(diào)而抑制腸道內(nèi)有害細(xì)菌，保護(hù)腸道黏膜上皮功能，與蒙脫石散聯(lián)合應(yīng)用可協(xié)同性的抑制消化道內(nèi)病毒及細(xì)菌產(chǎn)生的毒素，控制病情進(jìn)展。治療前兩組患兒各炎性細(xì)胞因子水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，研究組患者IL-6、CRP及TNF-α水平低于對(duì)照組(P<0.05)，IFN-γ及IL-10水平高于對(duì)照組(P<0.05)，原因可能為炎性細(xì)胞因子的高表達(dá)是導(dǎo)致腸黏膜損傷的重要因素，雙歧桿菌活菌可通過修復(fù)受損的腸黏膜、破壞病原體的生長(zhǎng)環(huán)境而抑制炎性反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)憑借其黏膜作用可拮抗病原體侵襲，促進(jìn)抗炎因子的釋放，抑制內(nèi)毒素的釋放而誘發(fā)炎性反應(yīng)，有效避免炎性反應(yīng)擴(kuò)大而加重腸黏膜損傷，有利于臨床癥狀的改善。另外，治療后研究組患者各免疫指標(biāo)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，原因可能為雙歧桿菌活菌可通過分解腸道內(nèi)容物產(chǎn)生促進(jìn)腸道蠕動(dòng)的代謝物質(zhì)，增強(qiáng)腸道的屏障功能，從而對(duì)機(jī)體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)可促進(jìn)年末局部及免疫功能發(fā)育，定制與胃腸道內(nèi)部促進(jìn)各類細(xì)胞因子抗體的產(chǎn)生而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，蒙脫石散具有緩解免疫功能紊亂的作用，與雙歧桿菌活菌聯(lián)合應(yīng)用時(shí)可發(fā)揮協(xié)同增效的作用。

綜上所述，雙歧桿菌活菌輔助治療可有效抑制炎癥反應(yīng)，提高腸屏障功能及免疫功能，療效確切，對(duì)促進(jìn)腹瀉患兒病情康復(fù)有重要意義。