桂蠶8號親本不同時間點交配產(chǎn)卵即浸試驗初探

韋紅群，蘭艷妮，于永霞，蒙雪姣，吳婧婧，歐冰冰，陸俁伽，賴艷梅，梁思思

（1.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術推廣站，南寧市 530007；2.廣西田園生化股份有限公司，南寧市 530007）

桂蠶8號是廣西蠶業(yè)技術推廣站育成的新品種，屬亞熱帶型夏秋用抗病四元雜交種，于2020 年6 月通過省級品種審定委員會審定［1］，是廣西計劃重點推廣的家蠶品種，具有抗血液型膿病強、繭質優(yōu)、產(chǎn)量高、強健好養(yǎng)的特點，深受蠶農喜愛。據(jù)統(tǒng)計，截至2021年6月底，廣西累計推廣該品種50萬張左右，售繭收入8.5億元［2］。廣西大力推廣和飼養(yǎng)桂蠶8號并產(chǎn)生了較高的經(jīng)濟收益，使得該品種的蠶種供不應求，蠶種生產(chǎn)企業(yè)經(jīng)常需要進行大批量的即時浸酸，以滿足市場的需求。

蠶種催青必須先經(jīng)過人工孵化處理技術，目前使用最廣泛的方法是鹽酸孵化法，也是最具實用性、效果最佳的人工孵化法［3］。浸酸中重要的3 個因素分別為鹽酸液溫、浸酸濃度和浸酸時長，據(jù)研究，這3個因素中，蠶種對鹽酸液溫的變化最為敏感，浸酸時長及浸酸濃度的安全使用范圍較寬［4］。在浸酸過程中，3個關鍵因素相互制約且各有其安全范圍［5］。而浸酸后蠶種孵化情況除了跟浸酸的3 個重要因素相關外，還受到浸酸適期的影響。宋仕琦［6］的研究表明，即時浸酸適期與蠶種的孵化及死卵的發(fā)生有密切的關系，在適期范圍內浸酸能獲得良好的孵化率。生產(chǎn)上通常以產(chǎn)卵后的保護溫度、經(jīng)過時間長短及卵色變化來確定品種的浸酸時期。即時浸酸是一項成熟的技術，主要是在蠶卵產(chǎn)下后一定時期，按照中系品種、日系品種的不同浸酸技術規(guī)程［7］進行浸酸處理，可以達到實用孵化率的要求。即時浸酸技術要求高，受蠶種產(chǎn)卵時長、保護條件及溫濕度等條件的影響制約，在生產(chǎn)上因即時浸酸處理不當導致蠶種孵化不齊甚至不孵化的事故時有發(fā)生，給蠶種企業(yè)造成巨大的損失。對于即時浸酸適期范圍，余武昌等［8］的研究表明浸酸適期范圍不僅與保護時間和保護溫度相關，還應結合卵色和積溫進行綜合考慮。桂蠶8號的即時浸酸處理，僅按照中系和日系品種的不同，設定不同時長的浸酸方法，對于單個品種的浸酸技術特點并無針對性的試驗，并且對于各個品種在實際生產(chǎn)上常出現(xiàn)不同保護時間或者不同冷藏時間等情況，而單一采用中系和日系品種的區(qū)分進行浸酸，所獲得的蠶種孵化效果并不理想，有時甚至會出現(xiàn)浸酸死卵多、蠶種孵化率低及孵化不齊等現(xiàn)象，嚴重影響了蠶種的出庫收蟻計劃。桂蠶8號是新品種，該品種的即時浸酸標準是否適用兩廣二號的標準，還需要進行試驗論證。本研究以兩廣二號原原種中系和日系的即時浸酸技術要求為參照，設計桂蠶8號不同交配時間點所產(chǎn)的蠶卵的即浸試驗，初步探索孵化桂蠶8號親本的原原種即時浸酸標準，以期更好地掌握桂蠶8 號親本原原種的即時浸酸特點，完善新品種良種擴繁配套技術，加快優(yōu)質新品種的示范應用。

1 試驗時間和地點

1.1 試驗時間

2020年7—8月。

1.2 試驗地點

廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術推廣站原種場及冷庫。

2 試驗材料與方法

2.1 試驗材料

桂蠶8號親本原原種錦、繡、壯、麗蠶蛾（錦、繡為中系品種，壯、麗為日系品種），由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術推廣站原種場提供。

2.2 試驗方法

2.2.1 制種處理 選取2020 年春制桂蠶8 號親本錦、繡、壯、麗4 個品種的即將羽化的蠶蛹，統(tǒng)一在早上5：00 進行感光，6：30 盛出蛾時選取新鮮羽化的蛾。共設6個處理，按照每個處理有21只蛾，每個處理設置3個重復的方法設計試驗，各樣本的處理方法如表1所示。

表1 各樣本的不同處理方法

2.2.2 即浸處理 收種后蠶種統(tǒng)一放入溫度為25 ℃、濕度為75%～85%的保護室中進行保護，直至收種當日下午15：00 進行即時浸酸處理。統(tǒng)一按照鹽酸濃度4.54 mol/L、溫度46.0～46.5 ℃的條件進行浸酸處理。其中，中系品種浸酸時長分別設為270 s、330 s、390 s，日系品種浸酸時長分別設為300 s、360 s、420 s。

2.2.3 調查方法 浸酸后的蠶種放入溫度25 ℃、濕度80%～85%的環(huán)境中進行催青，調查各個處理的蠶種發(fā)育情況以及孵化成績。

2.2.4 分析方法 通過SPSS 25.0 軟件對各品種交配至浸酸的時長（因素A）和浸酸時長（因素B）作雙因素方差分析，并進行多重比較。因素A（各梯度用A1～A6表示）和因素B（各梯度用B1～B6表示）對應的時間如表2 所示，中系品種浸酸時長對應的梯度為B1～B3，日系品種浸酸時長對應的梯度為B4～B6。

表2 雙因素所對應的時長

3 結果與分析

3.1 錦的孵化成績統(tǒng)計與分析

3.1.1 錦的孵化成績調查結果 從表3 可看出，各處理中錦的兩日孵化率成績都很高，均超過90%，除了處理4和處理5的浸酸時長為270 s的蠶種孵化率未達到實用孵化率標準（92%）以外，其他處理的蠶種孵化率都高于92%；未孵化的蠶種除了不良卵之外，浸酸死卵也較少。處理3 組合為9：00 進行交配產(chǎn)卵，蠶種孵化率成績最高，3個浸酸時長（270 s、330 s、390 s）的蠶種孵化率分別為98.65%、99.30%、98.62%。從催青調查情況來看，未孵化的蠶種中，浸酸時長為270 s的蠶種未見有浸酸死卵現(xiàn)象，孵化后第4 d 觀察還可看到轉青蠶卵，證明蠶種還能孵化，只是浸酸刺激還不夠，時長稍不足；浸酸時長為360 s的條件下，蠶種死卵現(xiàn)象增加，特別是孵化后第3 d出現(xiàn)扁死、癟死、黑死現(xiàn)象，證明浸酸時間偏長刺激稍微偏大。

表3 錦的孵化率調查結果

3.1.2 兩日孵化率的雙因素方差分析和多重比較結果 對錦的兩日孵化率的數(shù)據(jù)進行方差分析，從表4 可知，因素A 存在極顯著差異，因素B 存在顯著差異，即錦在交配至浸酸時長不同以及浸酸時長不同條件下的孵化率成績均存在顯著差異。再對兩個因素開展多重比較分析，由表5 可知，交配至浸酸時長不同的蠶種孵化率成績由高至低排序為A3＞A6＞A2＞A1＞A4＞A5，其中，A3的蠶種孵化率平均值高達98.86%；浸酸時長不同的蠶種孵化率成績排序為浸酸330 s＞390 s＞270 s，其中浸酸330 s 的蠶種孵化率平均值達96.38%。綜合以上結果，錦的最佳處理組合為A3+B2，即早上9：00交配，即時浸酸時長為330 s。

表4 錦的兩日孵化率雙因素方差分析

表5 錦的兩日孵化率多重比較

3.2 繡的孵化成績統(tǒng)計結果與分析

3.2.1 繡的孵化成績調查結果 孵化成績見表6，從繡在浸酸時長不同條件之間的孵化成績比較可知，每組處理均發(fā)現(xiàn)浸酸330 s的蠶種孵化率成績最高，當浸酸時長延長到390 s 時，孵化率成績下降明顯，通過催青調查發(fā)現(xiàn)未孵化的蠶種中部分存在浸酸死卵現(xiàn)象。通過試驗觀察產(chǎn)卵過程，發(fā)現(xiàn)繡的產(chǎn)卵高峰在晚上19：30～22：30，至24：00 產(chǎn)卵基本結束，因此繡的各個處理樣本浸酸時的卵齡約為16～20 h，蠶種卵齡偏小，浸酸時容易發(fā)生扁死卵。從各個樣本間的數(shù)值觀察可知，繡在處理3的3個不同浸酸時長條件下的蠶種孵化率都超過90%，孵化成績最好。

表6 繡的孵化率調查結果

3.2.2 雙因素方差分析和多重比較結果 對繡的兩日孵化率進行方差分析的結果見表7。浸酸時長不同的蠶種孵化率有顯著差異，交配至浸酸時長不同的蠶種孵化率無顯著差異。雙因素多重比較結果見表8，孵化率由高到低依次為A3＞A5＞A4＞A6＞A1＞A2，其中A3的蠶種孵化率平均值達到94.39%，其他處理的蠶種孵化率都低于90%；不同浸酸時長條件下的蠶種孵化率由高至低為浸酸330 s＞浸酸270 s＞浸酸390 s。綜上可知，繡的最佳處理組合為A3+B2，即早上9：00交配，即時浸酸時長330 s。

表7 繡的兩日孵化率方差分析

表8 繡的兩日孵化率多重比較

3.3 壯的孵化成績統(tǒng)計結果與分析

3.3.1 壯的孵化率調查結果分析 表9 的結果顯示，壯的兩日孵化率除了處理4 的浸酸時長為360 s條件下的蠶種孵化率超過92%外，其他處理的蠶種孵化率都未達到實用孵化率標準（92%）。催青后，通過對未孵化的蠶種進行調查，發(fā)現(xiàn)死卵率隨著浸酸時長的增加而增大，即死卵率表現(xiàn)為浸酸420 s＞360 s＞300 s。試驗中觀察壯的產(chǎn)卵時期的特點，發(fā)現(xiàn)壯的產(chǎn)卵高峰時間為晚上19：30～22：30，至24：00產(chǎn)卵基本結束，即時浸酸時間點為收種當日15：00，壯的即時浸酸的卵齡約為16～20 h，大部分蠶種卵齡偏小，當浸酸時間延長后，發(fā)育晚的卵齡小的蠶種出現(xiàn)浸死的現(xiàn)象比較明顯；此外，試驗中通過對蠶蛾產(chǎn)卵狀態(tài)的觀察，發(fā)現(xiàn)其交配時容易出現(xiàn)散對現(xiàn)象，交配時間長短不一，易導致蠶種卵齡開差過大，蠶卵種齡不齊，使浸酸處理難度增大，浸酸后期死卵增多。

表9 壯的孵化率調查結果

續(xù)表9

3.3.2 兩日孵化率雙因素的方差分析及多重比較 結果由表10 可知，浸酸時長不同的蠶種兩日孵化率有極顯著差異，交配至浸酸時長不同的蠶種孵化率則無顯著差異，即壯在不同的時間點進行交配產(chǎn)卵的孵化成績結果不顯著，原因在于不論什么時間點交配，所有處理的蠶種都會待到下午17：00才開始產(chǎn)卵，跟交配時間點無顯著相關性；由表11 可知，交配至浸酸時長不同的蠶種孵化率進行比較，A4的孵化率平均值最高，達到96.98%，A1最低，僅為72.66%，孵化 率由高至低為A4＞A2＞A3＞A6＞A5＞A1；對浸酸時長不同的蠶種孵化率進行比較，孵化率由高至低為浸酸360 s＞浸酸300 s＞浸酸420 s。綜合以上結果，壯的最佳組合為A4+B5，即早上10：00 交配，浸酸時長360 s。

表10 壯的兩日孵化率方差分析

表11 壯兩日孵化率多重比較

3.4 麗的孵化成績統(tǒng)計結果與分析

3.4.1 麗的孵化成績調查結果 通過試驗結果顯示，麗不論是在產(chǎn)卵表現(xiàn)還是浸酸孵化成績上都表現(xiàn)很好，具體為產(chǎn)卵齊一、卵面整齊、卵質均勻、很少出現(xiàn)卵齡開差等情況；浸酸的范圍也比較寬松，浸酸死卵現(xiàn)象較少，孵化率高。由表12可知，試驗中所有處理的兩日孵化率都超過92%。其中處理3 的蠶種孵化率最高，3 個不同浸酸時長（300 s、360 s、420 s）條件下的蠶種孵化率分別達到96.45%、98.28%、96.12%。浸酸時長為420 s 的條件對麗的孵化影響也比較小，最低的孵化率達到94.57%，證明適宜浸酸的時間范圍較廣。

表12 麗的孵化率調查結果

3.4.2 雙因素方差分析及多重比較結果 麗的兩日孵化率的方差分析結果和多重比較結果見表13及表14，浸酸時長不同的蠶種的兩日孵化率有極顯著差異，交配至浸酸時長不同的蠶種的兩日孵化率有顯著差異；比較交配至浸酸不同時長的蠶種孵化率，由高至低排序 為A3＞A1＞A2＞A4＞A5＞A6，最低的兩日孵化率達到95.05%，最高的兩日孵化率達到96.95%；比較浸酸不同時長的兩日孵化率，從高到低排序為浸酸360 s＞浸酸300 s＞浸酸420 s，浸酸360 s的蠶種兩日孵化率平均值高達97.54%，浸酸300 s的蠶種孵化率為95.29%，浸酸時長為420 s條件下的蠶種孵化率為95.22%。綜合以上結果，麗的最佳組合為A3+B5，即早上9：00交配，浸酸時長360 s。

表13 麗的兩日孵化率的方差分析

表14 麗的兩日孵化率的多重比較

4 小結

本次試驗中通過觀察記錄各品種的產(chǎn)卵特點規(guī)律，結果如表15所示，錦和麗在投蛾后10 min左右開始產(chǎn)卵，繡和壯則待到下午17：00后開始產(chǎn)卵，4個品種的產(chǎn)卵開始時間表現(xiàn)差別大；錦和麗的快速產(chǎn)卵期為14：00～18：00，繡和壯稍晚。4個品種的產(chǎn)卵結束時間情況為，錦和麗一致，繡和壯一致。錦和麗的產(chǎn)卵時長為8～11 h，繡和壯的產(chǎn)卵時長較短，為6～7 h。

表15 各品種的產(chǎn)卵規(guī)律特點

各品種的產(chǎn)卵特性差異主要表現(xiàn)在：繡和壯兩個品種不論在哪個時間點交配，都會待到下午17：00后才開始產(chǎn)卵，19：00 左右進入高峰期；錦和麗兩個品種在投蛾后不久即產(chǎn)卵。繡和壯的產(chǎn)卵時間相對短而密集，盛產(chǎn)卵的速度快，24：00基本產(chǎn)卵結束，產(chǎn)卵時長6～7 h；錦和麗有兩個時間段的產(chǎn)卵高峰期，投蛾后集中產(chǎn)卵1.0～1.5 h后產(chǎn)卵速度放慢，再經(jīng)過1 h左右進入第二次快速產(chǎn)卵時期；產(chǎn)卵跨時相對長，不論是11：00 投蛾還是16：00 投蛾，至晚上22：00 產(chǎn)卵基本結束，產(chǎn)卵時長為8～11 h。各品種產(chǎn)卵的速度由高至低排序為麗＞錦＞繡＞壯，蠶種的產(chǎn)附情況表現(xiàn)為麗和繡卵量足，卵面平整，錦次之。壯則蛾圈不完整，卵面不齊，蠶種排列較散，卵量少，可能與交配時散對現(xiàn)象嚴重有關。

浸酸結果顯示，錦和麗的整體表現(xiàn)比較穩(wěn)定，設置的3 個不同浸酸時長條件下的蠶卵孵化成績都很理想，死卵情況較少，浸酸適宜時間范圍比較廣，浸酸時長為270～420 s，催青時的孵化率都超過90%，繡和壯的孵化率遠遠低于錦和麗。根據(jù)各處理的孵化成績，本次試驗中在不同交配時間點對產(chǎn)卵效果、孵化成績的影響下，各品種表現(xiàn)最優(yōu)的組合為：錦于早上9：00 交配，浸酸時長為330 s；繡于早上9：00 交配，浸酸時長為330 s；壯于早上10：00 交配，浸酸時長為360 s；麗于早上9：00 交配，浸酸時長為360 s。

5 討論

本次試驗中，錦和麗的孵化成績最好，基本能達到蠶種生產(chǎn)上要求的實用孵化率標準92%以上，繡和壯的孵化率大部分都低于92%，原因可能為這兩個品種不論什么時間點交配，母蛾都待到當天17：00左右開始產(chǎn)卵，產(chǎn)卵時間短而集中，產(chǎn)卵后到即浸所經(jīng)過的時間較短，導致卵齡偏小。浸酸時難以把握標準，當浸酸時間過長，浸酸死卵就增多明顯，與試驗結果表現(xiàn)一致。方差分析結果顯示，這兩個品種的兩日孵化率跟交配時間點差異不顯著，表示蠶種孵化率跟交配時間點沒有關系，跟產(chǎn)卵后至浸酸的時間段即蠶種的卵齡有關，證明即時浸酸的蠶種孵化效果受產(chǎn)卵時間的先后、浸酸時間的長短等因素的影響，因此生產(chǎn)上應當注重制種關鍵技術，在種繭保護時期注意保護室的光線晝夜分明，促使發(fā)蛾統(tǒng)一集中，盛產(chǎn)期一致，縮小卵齡開差。即時浸酸時根據(jù)各個品種的產(chǎn)卵習性結合蠶種的保護時間及卵色判定浸酸適期，方可達到理想的孵化效果。

本次試驗存在一定的局限性，在統(tǒng)計未孵化率時，對死卵率沒有做具體的數(shù)值統(tǒng)計。試驗參考因素比較單一，孵化后的蟻蠶24 h 疏毛率及72 h 絕食生命力等強健性還有待進一步的試驗研究。此外，試驗的樣本數(shù)量相對少，得出的試驗結果僅代表本次試驗的結果，可能與實際生產(chǎn)有差異，是否具有代表性需要更多批次更多樣本的試驗數(shù)據(jù)進行論證。