海南檳榔致黃關(guān)鍵病害調(diào)查及為害特征分析

唐慶華 孟秀利 林兆威 黃山春 覃偉權(quán) 宋薇薇

摘要 近年來(lái)，隨著檳榔種植面積迅速擴(kuò)大，由檳榔黃化病等引起的“黃化災(zāi)害”問(wèn)題日趨嚴(yán)重，造成廣大種植戶喪失信心，嚴(yán)重制約了檳榔產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。為了準(zhǔn)確甄別不同病害，于2018—2020年在萬(wàn)寧、瓊海、文昌等市縣進(jìn)行了系統(tǒng)調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)檳榔病害16種，將其中7種病害（黃化病、隱癥病毒病、炭疽病、壞死環(huán)斑病毒病、壞死梭斑病毒病、細(xì)菌性葉斑病、根腐病）評(píng)價(jià)為致黃關(guān)鍵病害，分析了每種病害的病原菌、發(fā)生頻率、分布范圍、為害特征及防控難度。

關(guān)鍵詞 檳榔;致黃關(guān)鍵病害;分布范圍;為害特征;防控

中圖分類號(hào) S432???? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A????? DOI：10.12008/j.issn.1009-2196.2022.03.012

A Survey of Key Areca Palm Leaf Yellowing-related Diseases and Analysis of Their Infection Characteristics in Hainan Province

TANG Qinghua? MENGXiuli? LIN Zhaowei? HUANG Shanchun? QIN Weiquan? SONG Weiwei

（Coconut Research Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/ Hainan Engineering ResearchCenter of Arecanut Industry， Wenchang， Hainan 571339， China）

Abstract? In recent years with the expansion of planting area of areca palm， ‘yellowing disaster’ caused by yellowing dis- eases such as areca palm yellow leaf disease turns to be more serious， which has made the growers lose their confidence in? planting areca palm continuously and significantly restricted the development of areca palm industry. A systematical survey? was carried out in Wanning， Qionghai and Wenchang from 2018 to 2020 in order to identify the difference of the diseases. A? totalof 16 areca palm diseases were observed， of which 7 diseases （yellow leaf disease， leaf yellowing virus disease， anthrac- nose disease， necrotic spindle-spot virus disease， necrotic ringspot virus disease， bacterial leaf spot disease and root rot disease） were identified as key leaf yellowing-related diseases. These diseases were analyzed in terms of causal agent， occurrence fre- quency， distribution， infection characteristics and key control and prevention difficulties.

Keywords? areca palm; key leaf yellowing-related disease; distribution; infection characteristics; prevention and control

近20年來(lái)，海南省檳榔種植面積呈井噴式增長(zhǎng)，已由2000年的2.69萬(wàn) hm2增加至2018年的10.99萬(wàn) hm2（2019年海南省統(tǒng)計(jì)局?jǐn)?shù)據(jù)）。隨著檳榔種植面積的擴(kuò)大，由檳榔黃化病等引起的“黃化災(zāi)害”問(wèn)題日趨嚴(yán)重[1]，造成廣大種植戶“談黃色變”、喪失種植信心，對(duì)檳榔產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和農(nóng)民增收造成了嚴(yán)重影響，現(xiàn)已引起省、市（縣）各級(jí)政府的高度重視。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，海南檳榔有記錄的侵染性病害約20種[2-4]，包括檳榔黃化病[5-6]、隱癥病毒病[7]、細(xì)菌性葉斑病[8]、壞死梭斑病毒病[9]、壞死環(huán)斑病毒病[10]、炭疽病[11]等葉部病害及瀉血病、根腐病等根莖部病害。由于多種病害均可引起檳榔葉片變黃，且癥狀非常類似，大大增加了病害診斷和防控難度。因此，有必要對(duì)不同病害發(fā)病特征及引起的“黃化”癥狀進(jìn)行細(xì)致區(qū)分，從而準(zhǔn)確甄別不同病害。筆者于2018—2020年在萬(wàn)寧、瓊海、文昌等市縣進(jìn)行了系統(tǒng)調(diào)查，以期明確檳榔致黃關(guān)鍵病害及為害特征，為病害防控提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

枝剪、高枝剪、記號(hào)筆、中性筆、采樣袋、100%酒精等。儀器設(shè)備包括 GPS、數(shù)碼相機(jī)、 PCR 儀、凝膠成像系統(tǒng)、組織粉碎機(jī)、超凈工作臺(tái)。

1.2 方法

1.2.1 田間調(diào)查田間調(diào)查采用樣地詳細(xì)調(diào)查與隨機(jī)踏查相結(jié)合。標(biāo)準(zhǔn)樣地選擇面積超過(guò)

1.33 hm2的檳榔園，采用5點(diǎn)法調(diào)查，每個(gè)檳榔園選5個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)調(diào)查20株檳榔。調(diào)查時(shí)用 GPS 定位確定發(fā)生地點(diǎn)、面積等。以萬(wàn)寧、瓊海、屯昌等檳榔主產(chǎn)區(qū)為調(diào)查重點(diǎn)，每市縣選擇代表性檳榔園5～8個(gè)。

1.2.2 樣品處理采集疑似檳榔黃化病和黃葉病毒病病株樣品，在實(shí)驗(yàn)室用引物對(duì) F4/R1、F2/R2[11]和引物 YLDV4-F/YLDV4-R[7]分別進(jìn)行植原體巢式 PCR、病毒 RT-PCR 擴(kuò)增。采集的細(xì)菌病害樣品分離后采用 16S? rRNA 基因通用引物 F27/1492R[8]進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。 PCR 產(chǎn)物直接寄送生工生物公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.3 病害確認(rèn)采用田間癥狀與病原分子檢測(cè)、序列比對(duì)結(jié)果相結(jié)合的方法進(jìn)行病害確認(rèn)。

2 結(jié)果與分析

本次調(diào)查共發(fā)現(xiàn)檳榔病害16種，分別為黃化病、黃葉病毒病、炭疽病、壞死環(huán)斑病毒病、壞死梭斑病毒病、細(xì)菌性葉斑病、瀉血病、根腐病、芽腐病、擬莖點(diǎn)霉葉斑病、莖基腐病、果腐病、煤煙病、藻斑病、日灼、寒害，其中日灼、寒害為非侵染性病害。根據(jù)發(fā)生頻率、分布范圍、為害特征及防控難度，將黃化病、黃葉病毒病、炭疽病、壞死環(huán)斑病毒病、壞死梭斑病毒病、細(xì)菌性葉斑病、根腐病確定為致黃關(guān)鍵病害（表1）。

2.1 檳榔黃化病

檳榔黃化病病原為檳榔黃化植原體[6]。調(diào)查采樣、分子鑒定結(jié)果表明，該病在?？?、文昌、瓊海、萬(wàn)寧、陵水、三亞、樂(lè)東、保亭、五指山、瓊中、屯昌、定安、澄邁等13市縣均有發(fā)生。黃化病被稱為檳榔“葉瘟”“艾滋病”。該病在萬(wàn)寧、陵水、屯昌、定安多個(gè)鎮(zhèn)的發(fā)病率高達(dá) 80%～90%，造成檳榔減產(chǎn)70%～85%，一些重病檳榔園已完全棄管、絕產(chǎn)甚至遭砍伐。該病癥狀表現(xiàn)為初期植株樹(shù)冠下層2、3片葉片的葉尖先出現(xiàn)黃化癥狀（圖1），隨后黃化癥狀逐步擴(kuò)展到全株葉片，發(fā)病后期樹(shù)冠縮小呈束頂型癥狀，最后植株死亡。該病歷史悠久（1981年在屯昌縣首次發(fā)現(xiàn)[1-6]）、防控難度極大，是制約海南檳榔產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的一個(gè)痼疾和瓶頸。

2.2 檳榔黃葉病毒病

該病是2020年報(bào)道的一種新病害，病原為檳榔隱癥病毒1[7]（Arecapalmvelarivirus 1， APV1，現(xiàn)更名為檳榔黃葉病毒1，Areca palmyellow leaf? virus 1， APYLV1）。盡管是一種新報(bào)道的病害，但調(diào)查、病原檢測(cè)結(jié)果顯示，該病比檳榔黃化病分布范圍更廣，發(fā)病率更高。分子檢測(cè)結(jié)果顯示，除了上述13市縣外儋州市亦有發(fā)生。在定安、瓊海、瓊中、萬(wàn)寧、保亭和陵水6個(gè)主產(chǎn)區(qū)，其發(fā)病率均超過(guò)50%，在部分檳榔黃化高發(fā)區(qū)的發(fā)病率高達(dá)90%以上。該病癥狀與檳榔黃化病非常相似;其癥狀主要表現(xiàn)為同一片羽狀復(fù)葉只有部分小葉黃化，同一小葉僅葉尖黃化，葉基部保持綠色，或者葉肉組織黃化而葉脈為綠色（圖2）。

目前，該病與檳榔黃化病較明顯的癥狀區(qū)別在于后者的部分病株腋芽呈水浸狀，基部有淺褐色夾心。該病傳染性強(qiáng)、為害嚴(yán)重，可導(dǎo)致檳榔產(chǎn)量顯著下降、絕收，甚至植株死亡，現(xiàn)已成為檳榔產(chǎn)業(yè)發(fā)展中的又一個(gè)瓶頸。

2.3 檳榔壞死環(huán)斑病毒病和壞死梭斑病毒病

兩者均為新報(bào)道的病毒病害，病原分別為檳榔壞死環(huán)斑病毒（Arecapalm necrotic spindle-spot? virus）[9]和檳榔壞死梭斑病毒（Arecapalm necrotic? ringspot? virus）[10]。檳榔壞死環(huán)斑病毒在定安、瓊海、瓊中、萬(wàn)寧、保亭和陵水6個(gè)檳榔主產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，其中萬(wàn)寧、定安和瓊海局部分布較廣，一些重病園發(fā)病率達(dá)45%。癥狀表現(xiàn)為發(fā)病檳榔植株中部及下部葉片出現(xiàn)大小為1.5～4.0 cm 的典型黃色至褐色壞死環(huán)狀病斑（圖3），病斑周圍有一圈黃色暈圈，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)葉片上病斑成片出現(xiàn)。檳榔壞死梭斑病毒在保亭有發(fā)生，發(fā)病初期，檳榔葉片沿著葉脈出現(xiàn)條形褪綠斑，病斑逐漸擴(kuò)展形成褐色壞死條狀病斑，后期病斑融合出現(xiàn)大小為（1.20～2.0） cm （2.8～5.4） cm 的紡錘狀壞死斑（圖4）。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2種新病害（尤其是檳榔壞死環(huán)斑病毒病）呈逐步擴(kuò)散趨勢(shì)，對(duì)檳榔產(chǎn)量的影響及其傳播方式、防控技術(shù)等尚需進(jìn)一步研究。

2.4 檳榔炭疽病

該病是檳榔上的主要病害之一，其病原為炭疽菌。據(jù)報(bào)道，檳榔炭疽病菌有多種[12]，分屬于 Colletotrichum gloeosporioides species complex 和 C. boninense species complex。該病在海南各市縣均有發(fā)生，但瓊中、五指山、陵水、萬(wàn)寧等中部山區(qū)發(fā)病較重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，瓊中黎母山鎮(zhèn)等重病園發(fā)病率可達(dá)70%以上。病害初期在葉片上形成圓形水漬狀小斑點(diǎn)，病斑深綠色至淡褐色，病斑逐漸擴(kuò)大，形成帶有黃暈的暗綠色病斑（圖5），直徑0.2～21.0 cm;隨后病斑可匯合成形狀不規(guī)則的大小為（0.2～21）cm （30～42）cm 的大斑塊。重病株的葉片病斑累累，外層葉片易枯死，對(duì)檳榔生長(zhǎng)和產(chǎn)量影響較嚴(yán)重。該病防治較易。

2.5 檳榔細(xì)菌性葉斑病

對(duì)本次調(diào)查采集的細(xì)菌性病害樣品進(jìn)行病原分離，對(duì)分離純化得到的細(xì)菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增測(cè)序、比對(duì)后，系統(tǒng)發(fā)育分析表明，全部細(xì)菌為須芒草伯克霍爾德氏菌Burkholderiaandropogonis（syn： Robbsiaandropogonis[13]），故發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌性病害均為檳榔細(xì)菌性葉斑病。該病也是為害檳榔的一種主要病害[8]。該病曾于2012年在文昌大爆發(fā)，發(fā)病率高達(dá)90%以上。2021年10月18號(hào)臺(tái)風(fēng)“圓規(guī)”過(guò)境后，該病在定安、文昌等市縣再度爆發(fā)，部分檳榔園發(fā)病率達(dá)100%。本課題組近10年的調(diào)查、病原分離數(shù)據(jù)顯示，該病是檳榔上的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌性病害。主要為害葉片，形成褐色壞死斑，病斑周圍有黃暈，隨著葉脈呈不規(guī)則擴(kuò)展，整張羽狀復(fù)葉布滿大小為（0.5～1.1）cm （1.1～11.9）cm 的圓形至長(zhǎng)條形病斑，嚴(yán)重的病斑匯成一片（圖 6），導(dǎo)致整葉干枯死亡，嚴(yán)重影響檳榔生長(zhǎng)和產(chǎn)量。該病易在臺(tái)風(fēng)后或雨季大面積爆發(fā)，但防治難度不大。

2.6 檳榔根腐病

檳榔根腐病是一類病害，包括紅根病、褐根病、黑紋根病、齒毛菌根腐病，病原分別為靈芝菌 Ganoderma? lucidum、有害木層孔菌 Phellinus noxius、炭色焦菌Ustulinadeusta和一色齒毛菌Cerrena unicolor[2-3]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病雖不普遍，但個(gè)別地區(qū)病情較嚴(yán)重。屯昌、瓊海、萬(wàn)寧及三亞均有零星發(fā)生。該病引起根莖和根部腐爛，造成整株枯死，對(duì)檳榔生產(chǎn)影響較大;其地上部分主要癥狀表現(xiàn)為植株外層葉片褪綠、黃化，并逐漸向里層葉片發(fā)展，隨后葉片脫落，整株死亡。該病屬根莖土傳病害，其發(fā)生與土壤水分、氣候條件相關(guān)，相對(duì)于炭疽病和細(xì)菌性葉斑病等葉斑類病害防控難度較大。

2.7 其他病害

除了上述7種致黃關(guān)鍵病害外，檳榔芽腐病也是零星發(fā)生的一種黃化相關(guān)病害。其癥狀表現(xiàn)為染病心葉首先變黃，后變褐下垂，隨后外圍葉片變黃下垂，嚴(yán)重時(shí)樹(shù)冠腐爛脫落、植株死亡。該病由疫霉菌引起，在瓊中縣有發(fā)生。因病原疫霉菌不同于普通真菌，常規(guī)殺菌劑防效有限，故防治難度較大。其他非常見(jiàn)病害，如擬莖點(diǎn)霉屬葉斑病、藻斑病，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)也可引起植株一至多片羽狀復(fù)葉整葉變黃、枯死，但防治難度不大。

3 討論

本次調(diào)查共發(fā)現(xiàn)16種檳榔病害，根據(jù)發(fā)生頻率、分布范圍、為害特征及防控難度，確定了7 種致黃關(guān)鍵病害。其中，黃化病、細(xì)菌性葉斑病為細(xì)菌性病害，黃葉病毒病、壞死環(huán)斑病毒病、壞死梭斑病毒病為病毒病害，炭疽病和根腐病為真菌性病害。從黃化癥狀特點(diǎn)及防控難易度來(lái)看，壞死環(huán)斑病毒病、壞死梭斑病毒病、炭疽病、細(xì)

菌性葉斑病均為葉斑類病害，除前2種病害尚未進(jìn)行防控相關(guān)研究外，其他2種防治較容易;根腐病發(fā)病部位為根莖處，氣候、土壤濕度對(duì)其發(fā)生為害影響較大，防治較難。檳榔黃化病和檳榔黃葉病毒病分布范圍廣、為害嚴(yán)重、防控難度大，在7種檳榔致黃關(guān)鍵病害中處于核心地位。檳榔黃化病在印度[14]和斯里蘭卡[15]也有發(fā)生，尤其給印度檳榔產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重威脅。由于檳榔黃葉病毒病是2020年才報(bào)道的一種新病害，該病與檳榔黃化病田間葉部癥狀非常相似，目前本課題組主要通過(guò)分子檢測(cè)手段[16]對(duì)2 種病害進(jìn)行區(qū)分。2 種病害詳細(xì)的癥狀異同尚待進(jìn)一步研究。需要指出的是，根據(jù)文獻(xiàn)記錄20世紀(jì)八九十年代海南細(xì)菌性條斑病發(fā)生較重[17]，但本課題組近10年連續(xù)調(diào)查、病害監(jiān)測(cè)未能分離到該病病菌 Xanthomonas campestris pv.arecae （Rao & Mohan） Dye。文獻(xiàn)記錄定安縣龍河鎮(zhèn)以及瓊海白石嶺曾發(fā)生檳榔細(xì)菌性條斑?。ㄔA南熱帶作物學(xué)院文衍堂教授，私人請(qǐng)教），本課題組于2012年9月到 2地采集樣品，分離的細(xì)菌 PCR 擴(kuò)增16S rDNA 基因序列、比對(duì)后均被鑒定為 B. andropogonis（ syn： R. andropogonis）。檳榔細(xì)菌性條斑病是現(xiàn)已極少發(fā)生甚至完全消失，還是已被細(xì)菌性葉斑病完全取代亦或是其他，其原因有待進(jìn)一步分析。

調(diào)查分析病害為害特征，有助于化繁為簡(jiǎn)、準(zhǔn)確診斷不同黃化相關(guān)病害，為病害防控提供診斷依據(jù)和理論基礎(chǔ)。本課題組調(diào)查發(fā)現(xiàn)，黃化病和檳榔黃葉病毒病在海南省14市縣有發(fā)生（全省共19個(gè)市縣，三沙市未做調(diào)查，昌江縣未發(fā)現(xiàn);臨高縣、白沙縣、東方市亦有疑似病害），且依然呈加速擴(kuò)散蔓延趨勢(shì)，建議省市各級(jí)政府高度重視，加強(qiáng)防控，從而確保檳榔產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，保障海南鄉(xiāng)村振興工作的順利推進(jìn)。

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（責(zé)任編輯 龍婭麗）