牛病毒性腹瀉病毒在新疆褐牛不同飼養(yǎng)階段的感染情況調(diào)查

努爾賽力克·努素甫，阿斯哈提·哈山，王海軍，陳榮貴*

（1.新源縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，新疆 新源縣 835800；2.新疆伊犁州動(dòng)物疾病控制與診斷中心）

牛病毒性腹瀉?。˙ovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一種重要的牛傳染性疾病，臨床上發(fā)病率高，傳染性強(qiáng)，一般以發(fā)熱、白細(xì)胞減少、口腔等消化道黏膜糜爛、壞死和腹瀉為主要癥狀[1]。BVDV不僅可感染牛，也能感染山羊、綿羊、鹿等反當(dāng)動(dòng)物。同時(shí)也是生物制品血清、凍精的主要污染源。該病呈世界性區(qū)域分布，給全球畜牧業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布第96號(hào)公告（2008年），將BVD定為三類(lèi)疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）也將該病列為法定報(bào)告的動(dòng)物疫病及國(guó)際動(dòng)物胚胎交流病原名錄三類(lèi)疫病。

新疆牛存欄數(shù)一直居全國(guó)前列，不同地區(qū)也存在BVDV 感染。王龍[3]對(duì)新疆16 個(gè)不同牛場(chǎng)1 171份牛血清進(jìn)行抗原和抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，BVDV 抗體陽(yáng)性率高達(dá)90.0%～98.5%，抗原陽(yáng)性率為1.5%。王青青[4]對(duì)新疆南疆地區(qū)的14 個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)采集的1 555 份血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，BVDV平均抗體陽(yáng)性率為84.48%，抗原陽(yáng)性率為0.78%，可見(jiàn)BVDV 在新疆地區(qū)的感染率非常高。目前關(guān)于新疆伊犁哈薩克自治州褐牛BVDV感染的報(bào)道較少，為了解BVDV在伊犁哈薩克自治州褐牛規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)不同飼養(yǎng)階段的感染情況，我們進(jìn)行了BVDV抗原和抗體檢測(cè)，以為該病的疫苗免疫和凈化提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 血清樣品

在新疆伊犁哈薩克自治州某褐牛場(chǎng)針對(duì)哺乳期犢牛（0～3月齡）、斷奶期犢牛（4～6月齡）、育成牛（6～12月齡）、育肥牛（12～18月齡）、妊娠母牛和哺乳母牛分別采集2份血液樣品，一份分離血清，另一份加入肝素抗凝，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

微量移液器、伯樂(lè)酶標(biāo)儀、高速冷凍離心機(jī)（Thermo 公司）、PCR儀（Thermo 公司）、恒溫生化培養(yǎng)箱、生物安全柜、瓊脂糖凝膠電泳儀和伯樂(lè)凝膠成像系統(tǒng)（北京六一儀器廠）等。

1.1.3 主要試劑

牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測(cè)試劑盒、牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自IDEXX公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 抗原和抗體ELISA檢測(cè)

采用ELISA方法檢測(cè)BVDV抗體和抗原，具體步驟按照牛病毒性腹瀉病毒抗體/抗原檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)前將試劑盒從4 ℃冰箱中取出恢復(fù)至室溫。

1.2.2 結(jié)果判定

BVDV抗體ELISA結(jié)果判定：當(dāng)P-N ≥0.150且NC≤0.25時(shí)，檢測(cè)結(jié)果有效。腹瀉病毒抗體是否存在由S/P值決定：S/P ＜0.20，BVDV抗體陰性；0.2 ＜S/P ≤0.3，BVDV抗體可疑；S/P ≥0.30，BVDV抗體陽(yáng)性。

陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照平均值計(jì)算公式：

式中：NC為陰性對(duì)照OD值的平均值；PC為陽(yáng)性對(duì)照OD值的平均值；P-N為PC與NC之差。

BVDV抗原ELISA結(jié)果判定：被檢樣品OD值-陰性對(duì)照OD值≤0.300，判定為抗原陰性；＞0.300，判定為抗原陽(yáng)性。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

對(duì)所有檢測(cè)數(shù)據(jù)用Excel軟件進(jìn)行匯總分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清抗體檢測(cè)結(jié)果

由表1可知，6個(gè)不同飼養(yǎng)階段牛群血清中和試驗(yàn)檢測(cè)的BVDV陽(yáng)性率分別為85.0%、38.7%、85.2%、87.0%、82.5%和89.8%，其中斷奶期犢牛（4～6月齡）抗體陽(yáng)性率最低，哺乳母牛抗體陽(yáng)性率最高。621份樣品中，總抗體陽(yáng)性率為80.2%。牛BVDV抗體陽(yáng)性率所反映的是牛以往感染BVDV的情況以及母源抗體或疫苗免疫狀況，說(shuō)明80.2%的牛具備抵抗BVDV感染的能力。通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)BVDV抗體陽(yáng)性率，對(duì)伊犁地區(qū)褐牛牛病毒性腹瀉的防治有一定的參考價(jià)值。

表1 不同飼養(yǎng)階段褐牛牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 抗原檢測(cè)結(jié)果

表2 不同飼養(yǎng)階段褐牛牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測(cè)結(jié)果

6個(gè)不同飼養(yǎng)階段牛群的樣品抗原檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為0%、0%、0%、0.8%、0%和0.9%。在育肥牛和哺乳母牛牛群中各檢測(cè)出1頭抗原陽(yáng)性牛，可能為持續(xù)感染牛（persistentlyinfected，PI），并在2周后對(duì)這2頭陽(yáng)性牛進(jìn)行復(fù)檢，檢測(cè)結(jié)果仍為陽(yáng)性，因此，判定這2頭陽(yáng)性牛為PI牛，建議牛場(chǎng)進(jìn)行隔離清除。

3 結(jié)論與討論

BVD一直以來(lái)都是威脅牛群健康的重要傳染性疾病之一，會(huì)對(duì)牛群生育力、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、產(chǎn)奶量等產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，進(jìn)而影響中國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展。根據(jù)歐洲國(guó)家的BVD防控經(jīng)驗(yàn)，我們應(yīng)在以下方面做好相關(guān)工作：（1）快速識(shí)別和剔除持續(xù)感染牛；（2）密切監(jiān)測(cè)牛場(chǎng)的BVD感染狀況；（3）嚴(yán)格限制妊娠動(dòng)物移動(dòng)；（4）嚴(yán)格落實(shí)養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全措施，高效保護(hù)易感動(dòng)物。在牛養(yǎng)殖密度高的地區(qū)，BVD只能通過(guò)預(yù)防與接種疫苗相結(jié)合來(lái)控制。在以往的BVD流行病學(xué)調(diào)查中，主要調(diào)查整個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)牛血清的陽(yáng)性率，很少報(bào)道和分析不同飼養(yǎng)階段牛的血清陽(yáng)性率。本研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)，3～6月齡斷奶犢牛血清抗體陽(yáng)性率為38.7%，遠(yuǎn)低于平均抗體陽(yáng)性率（80.2%），感染風(fēng)險(xiǎn)最高，其他飼養(yǎng)階段血清陽(yáng)性率都在80%以上，推測(cè)3～6月齡犢牛血清抗體陽(yáng)性率較低的主要原因可能是母源抗體消減導(dǎo)致。因此，建議在進(jìn)行疫苗免疫時(shí)，重點(diǎn)對(duì)3～6月齡斷奶犢牛進(jìn)行免疫防控。

依據(jù)BVDV血清抗體陽(yáng)性率超過(guò)80%的牛場(chǎng)判定為高風(fēng)險(xiǎn)牛場(chǎng)的標(biāo)準(zhǔn)[5]，本研究中該牛場(chǎng)總抗體陽(yáng)性率為80.2%，超過(guò)80%，因此，有可能存在PI牛。通過(guò)進(jìn)一步進(jìn)行PI牛的篩查，檢測(cè)篩查到2頭PI牛。隨著診斷技術(shù)的發(fā)展，運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)BVDV抗原和抗BVDV特異性抗體的技術(shù)在不斷改進(jìn)，使得低成本實(shí)現(xiàn)大規(guī)模篩選成為可能。通過(guò)病毒學(xué)篩查，可以識(shí)別并消除持續(xù)感染的動(dòng)物，從而達(dá)到對(duì)牛場(chǎng)BVDV的凈化。