人巨細(xì)胞病毒感染機(jī)體細(xì)胞免疫學(xué)機(jī)制的研究進(jìn)展

韋愛萍，宋雅琴，彭薇，謝政軍

(1.遵義醫(yī)科大學(xué)第五附屬(珠海)醫(yī)院血液內(nèi)科，廣東 珠海 519100； 2.遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)，廣東 珠海 519000)

人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)即人皰疹病毒5型，是β皰疹病毒家族的一員。雖然HCMV在人群中的感染率較高，但在健康人群中多表現(xiàn)為潛伏感染，當(dāng)機(jī)體免疫力下降時才會發(fā)生再激活引起病毒載量增加，從而播散演變成巨細(xì)胞病毒病。其受累人群主要是新生兒、老年人、器官移植及免疫缺陷者。HCMV感染機(jī)體往往較隱匿，在早期機(jī)體抗HCMV免疫反應(yīng)過程中自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK細(xì)胞)占優(yōu)勢，之后機(jī)體接觸來自HCMV抗原的持續(xù)性刺激導(dǎo)致T細(xì)胞活化[1]，隨后產(chǎn)生HCMV特異性T細(xì)胞[2]。HCMV在機(jī)體內(nèi)多以低病毒載量潛伏狀態(tài)存在，但在炎癥等誘因作用下，短期內(nèi)病毒載量增加，在NK細(xì)胞、HCMV特異性T細(xì)胞等免疫細(xì)胞作用下又會恢復(fù)至低病毒載量的潛伏狀態(tài)。在這種不定時、間歇性的病毒抗原長期刺激下，HCMV特異性T細(xì)胞增殖擴(kuò)張，從而導(dǎo)致T細(xì)胞亞群失衡，最終影響T細(xì)胞功能甚至出現(xiàn)T細(xì)胞衰竭[3-4]。機(jī)體感染HCMV后通過一系列復(fù)雜的免疫反應(yīng)限制和清除HCMV。反之，HCMV通過編碼大量干擾主要效應(yīng)機(jī)制的基因產(chǎn)物來逃避機(jī)體免疫攻擊[5]。機(jī)體對HCMV的免疫反應(yīng)包括體液免疫和細(xì)胞免疫，細(xì)胞免疫的機(jī)制更為復(fù)雜?，F(xiàn)就HCMV感染機(jī)體細(xì)胞免疫學(xué)機(jī)制的研究進(jìn)展予以綜述。

1 NK細(xì)胞對HCMV感染的細(xì)胞免疫的應(yīng)答過程

1.1NK細(xì)胞在HCMV感染過程中的作用及免疫過程 在固有免疫系統(tǒng)中，NK細(xì)胞充當(dāng)?shù)谝坏婪谰€。HCMV感染后NK細(xì)胞被激活，并在病毒感染早期、T細(xì)胞反應(yīng)產(chǎn)生前以及建立適應(yīng)性免疫反應(yīng)后發(fā)揮重要作用。NK細(xì)胞表面表達(dá)多種激活性和抑制性受體，受體均由生殖細(xì)胞編碼，通過整合其表面受體所接收的信號啟動機(jī)體免疫反應(yīng)，從而為機(jī)體提供病毒感染的防御反應(yīng)。NK細(xì)胞表達(dá)人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)Ⅰ類分子的抑制性受體，HCMV通過降低靶細(xì)胞的HLAⅠ類分子的表達(dá)水平從而逃避T細(xì)胞的識別，而HLAⅠ類分子低表達(dá)則導(dǎo)致活化信號產(chǎn)生，激活NK細(xì)胞，識別和消除病毒感染的靶細(xì)胞。NK細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞相互作用并產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子和趨化因子(如γ干擾素、腫瘤壞死因子-α、巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α、巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β和正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的活性調(diào)節(jié)蛋白)直接參與免疫防御，這些細(xì)胞因子和趨化因子可以招募和調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)，增強(qiáng)靶細(xì)胞的HLAⅠ類分子表達(dá)[6]。

NK細(xì)胞活化包括以下步驟。①接觸：HCMV顆?；虮籋CMV感染的靶細(xì)胞與NK細(xì)胞表面受體結(jié)合，觸發(fā)下游的轉(zhuǎn)導(dǎo)信號。②黏附：被認(rèn)為是NK細(xì)胞效應(yīng)功能的先決條件，并在NK細(xì)胞和靶細(xì)胞之間形成“免疫突觸”，為釋放細(xì)胞毒性顆粒提供一個封閉的微環(huán)境。當(dāng)NK細(xì)胞與靶細(xì)胞之間的信號傳遞表現(xiàn)為抑制性信號，則NK細(xì)胞不被活化；相反，則形成穩(wěn)定的激活突觸，NK細(xì)胞發(fā)生活化。③極化：NK細(xì)胞與靶細(xì)胞發(fā)生黏附后，NK細(xì)胞分泌性溶酶體(也稱為細(xì)胞毒性顆粒)即刻出現(xiàn)極化。磷脂酰肌醇-3-激酶在NK細(xì)胞細(xì)胞毒性中起關(guān)鍵作用，是第二信使形成的關(guān)鍵，顆粒極化由磷脂酰肌醇-3-激酶→鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子→Ras相關(guān)C3肉毒桿菌毒素底物1→p21激活激酶→促分裂原活化的蛋白激酶激酶→胞外信號調(diào)節(jié)激酶途徑所觸發(fā)[7]。④脫顆粒：依賴于線粒體凋亡抑制因子vMIA-m38.5的表達(dá)，vMIA-m38.5是HCMV基因UL37.1編碼HCMV vMIA-UL37.1的同源基因。

1.2HCMV感染狀態(tài)下影響NK細(xì)胞功能的受體及相關(guān)分子通路變化 NK細(xì)胞通過其表面激活性和抑制性受體之間傳遞的信號來調(diào)節(jié)其功能，HLAⅠ類分子是NK細(xì)胞受體識別的主要分子家族，NK細(xì)胞功能的發(fā)揮取決于NK細(xì)胞抑制性受體與靶細(xì)胞表面HLAⅠ類分子的選擇性結(jié)合[8]。HLAⅠ類分子通常與抑制性受體[如Ly49A和CD94/NK細(xì)胞凝集素樣受體亞家族C成員1(NK cell lectin-like receptor subfamily C member 1，NKG2A)]結(jié)合而抑制NK細(xì)胞的功能，抑制性受體通過位于受體胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的一個或多個免疫受體酪氨酸抑制基序介導(dǎo)其作用。NK細(xì)胞表面受體與配體結(jié)合后，免疫受體酪氨酸抑制基序激活胞內(nèi)含SH2結(jié)構(gòu)域蛋白酪氨酸磷酸酶1，導(dǎo)致含SH2結(jié)構(gòu)域蛋白酪氨酸磷酸酶1磷酸化和募集，從而使下游的刺激信號去磷酸化，為NK細(xì)胞提供阻斷激活信號的物理環(huán)境。

NK細(xì)胞利用其表面受體來識別靶細(xì)胞，這些NK細(xì)胞表面的受體需要靶細(xì)胞表面的HLAⅠ類分子的協(xié)助才能發(fā)揮作用，又稱為HLAⅠ類分子依賴性受體。HLAⅠ類分子依賴性受體有3個不同的家族：C型凝集素樣受體(如CD94/NKG2A或CD94/NKG2C)、白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1(leukocyte associated immunoglobulin-like receptor-1，LIR-1)和殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immnoglobulin-like receptor,KIR)[9]。CD94/NKG2受體可以激活激活性受體(如CD94/NKG2C)或抑制性受體(如CD94/NKG2A)，但只識別HLA-E。LIR-1可識別所有的HLAⅠ類分子，并具有不同的特異性。而激活性和抑制性KIR則識別所有經(jīng)典的HLAⅠ類分子(HLA-A、HLA-B和HLA-C)，但具有等位基因特異性，在某些情況下以肽選擇的方式識別[10]。這些受體監(jiān)測HLAⅠ類分子表達(dá)的變化，以誘導(dǎo)靶細(xì)胞溶解。NK細(xì)胞激活性受體與配體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)功能，激活NK細(xì)胞受體的配體，包括HLAⅠ類分子結(jié)合肽、受體誘導(dǎo)的自配體、外源的病毒編碼分子以及免疫復(fù)合物(免疫球蛋白Fc段與CD16結(jié)合)[11]。

原發(fā)性HCMV感染產(chǎn)生強(qiáng)烈的NK細(xì)胞反應(yīng)與激活性受體NKG2C的過表達(dá)有關(guān)[12]。HCMV感染會觸發(fā)NKG2C+NK細(xì)胞的擴(kuò)增，這些細(xì)胞同時高表達(dá)LIR-1和KIR[13]。NKG2C是C型凝集素樣受體家族成員之一，其與CD94形成異二聚體，能夠與HLA-E分子相互作用。NKG2C表達(dá)的NK細(xì)胞選擇性擴(kuò)增依賴于某些細(xì)胞因子的存在以及NKG2C和HLA-E與特定肽的相互作用[14]。另外，HCMV提供UL40衍生的肽，其在感染的靶細(xì)胞中維持HLA-E的表達(dá)，從而通過NKG2A抑制NK細(xì)胞活化。以NKG2C為特征的特定NK細(xì)胞群中，NKG2CbrightNK細(xì)胞被認(rèn)為是一群HCMV特異性記憶性NK細(xì)胞，能夠識別特定的病毒蛋白，且NKG2Cbright細(xì)胞是一種長壽命的細(xì)胞，在初次感染后數(shù)量不斷增加，抗HCMV水平與NKG2C的擴(kuò)增有直接關(guān)系[12]。HCMV能維持NKG2A的配體HLA-E表達(dá)，提供一種抑制肽負(fù)載的模擬肽[15]。HCMV感染的靶細(xì)胞的HLA-E也能被激活性受體CD94/NKG2C所識別，但抑制性受體CD94/NKG2A與HLA-E結(jié)合的親和力高，即抑制性受體的負(fù)性信號占主導(dǎo)地位，作用結(jié)果則傾向于抑制靶細(xì)胞HLA-E表達(dá)，故NKG2A與NKG2C協(xié)同作用可抑制NK細(xì)胞反應(yīng)[16]。

LIR-1是一種抑制性受體，可與經(jīng)典(HLA-A、HLA-B、HLA-C)和非經(jīng)典(HLA-G)等HLAⅠ類分子結(jié)合。LIR-1可作為病毒復(fù)制的生物標(biāo)志物，反映HCMV病毒載量變化。LIR-1與HCMV UL18結(jié)合的親和力遠(yuǎn)高于其天然配體HLA-G，表達(dá)UL18的HCMV感染細(xì)胞能抑制LIR-1+NK細(xì)胞，UL18可以增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷力。因此，在HCMV間歇性再激活過程中，UL18上調(diào)可誘導(dǎo)LIR-1表達(dá)[17]。HCMV感染能增加NK細(xì)胞LIR-1的表達(dá)，HCMV抗體水平與NK細(xì)胞中LIR-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，HCMV抗體在高表達(dá)LIR-1+NK細(xì)胞的機(jī)體中表達(dá)水平降低[18]。

KIR屬于免疫球蛋白樣超家族成員，具有以下特點：①KIR是包含抑制性和激活性受體的配對受體家族；②HCMV感染后抑制性KIR配體的表達(dá)被下調(diào)；③KIR是高度多態(tài)的，許多多態(tài)性位于HLAⅠ類分子結(jié)合位點外；④許多活化的KIR不與宿主配體結(jié)合[19]。NK細(xì)胞通過其膜上的KIR識別HLAⅠ類分子，引起胞質(zhì)免疫受體酪氨酸抑制基序發(fā)生磷酸化，募集Src同源區(qū)2蛋白酪氨酸磷酸酶1，產(chǎn)生抑制性或激活性信號，從而調(diào)節(jié)NK細(xì)胞和部分T細(xì)胞的免疫應(yīng)答[20]。NK細(xì)胞通過KIR等受體的表達(dá)，區(qū)分健康的“自我”和多種被HCMV感染的靶細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)揮免疫功能[21]。在NK細(xì)胞中有兩種類型的KIR分子(激活分子和抑制分子)，長胞質(zhì)尾的KIR(KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DL5、KIR3DL1、KIR3DL2、KIR3DL3)具有抑制淋巴細(xì)胞效應(yīng)功能，而短胞質(zhì)尾的KIR(KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DS1)通過相關(guān)的DNA X激活蛋白12分子激活淋巴細(xì)胞，KIR-L由于帶有免疫受體酪氨酸抑制基序的細(xì)胞質(zhì)尾具有受體抑制作用，而KIR-S受體具有短細(xì)胞質(zhì)尾且有跨膜正電荷，從而與帶有免疫受體酪氨酸激活基序的適配器分子(如DNA X激活蛋白12)關(guān)聯(lián)[22]。一般情況下，KIR2D受體結(jié)合HLA-C配體，KIR3D受體結(jié)合HLA-A和HLA-B配體。當(dāng)靶細(xì)胞表面表達(dá)HLAⅠ類分子，通過NK細(xì)胞上KIR抑制性受體與HLAⅠ類分子結(jié)合并釋放抑制信號，阻斷NK細(xì)胞的殺傷活性，保護(hù)靶細(xì)胞不被NK細(xì)胞消滅，而激活的KIR-S數(shù)量對HCMV感染有潛在保護(hù)效應(yīng)，對HCMV的保護(hù)程度也隨著KIR-S激活數(shù)目的增多而增加[23]。

2 T細(xì)胞對HCMV感染的細(xì)胞反應(yīng)的應(yīng)答過程

2.1HCMV感染后機(jī)體T細(xì)胞反應(yīng)的特點及輔助參與細(xì)胞 一定數(shù)量的HCMV抗原暴露后，單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及B細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞參與啟動機(jī)體適應(yīng)性免疫反應(yīng)，促使T細(xì)胞識別特定的病毒抗原(磷酸化蛋白65、包膜糖蛋白B等)，隨后產(chǎn)生HCMV抗原特異性T細(xì)胞。T細(xì)胞受體通過識別其靶表位產(chǎn)生HCMV表位特異性T細(xì)胞，該亞群細(xì)胞為單克隆性，從而決定HCMV抗原表位特異性T細(xì)胞抗病毒的精確性。HCMV表位特異性T細(xì)胞的產(chǎn)生來自幼稚的T細(xì)胞受體記憶庫，該記憶庫具有多樣性，可以針對不同的抗原表位刺激提供有效的免疫反應(yīng)，并維持免疫效應(yīng)所需的免疫表型。記憶性T細(xì)胞再次接受抗原表位刺激后，表位特異性T細(xì)胞增殖分化，從而以定量和定性的方式影響隨后的T細(xì)胞亞群。T細(xì)胞受體的多樣性反映了針對 HCMV抗原表位有效免疫力的強(qiáng)弱。理論上T細(xì)胞受體具有多樣性，但胸腺選擇限制了這一多樣性，使相應(yīng)的抗原特異性前體數(shù)量也受到限制，經(jīng)過一系列細(xì)胞免疫過程最終形成針對不同表位的單克隆特異性T細(xì)胞。針對HCMV抗原表位特異性T細(xì)胞免疫形成過程見圖1。

有數(shù)據(jù)表明，在首次檢測到HCMV-DNA后，機(jī)體對HCMV的早期T細(xì)胞反應(yīng)平均在第7天達(dá)到峰值，T細(xì)胞反應(yīng)最初以CD4+T細(xì)胞為主，具有輔助性T細(xì)胞1細(xì)胞因子特征，CD4+T細(xì)胞分泌γ干擾素和腫瘤壞死因子-α等細(xì)胞因子，CD4+T細(xì)胞反應(yīng)數(shù)天后，HCMV患者外周血中可檢出具有HCMV特異性的CD8+T細(xì)胞[24]。HCMV特異性CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞分別識別HLAⅡ類分子和HLAⅠ類分子所表達(dá)的病毒肽，CD8+T細(xì)胞能產(chǎn)生高水平效應(yīng)分子[如白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-2、γ干擾素、腫瘤壞死因子-α、穿孔素和顆粒酶]，CD4+T細(xì)胞分泌大量的細(xì)胞因子輔助CD8+T細(xì)胞對HCMV產(chǎn)生反應(yīng)[25]。

2.2HCMV感染后CD4+T細(xì)胞應(yīng)答的主要分子變化 CD4+T細(xì)胞是HCMV感染的適應(yīng)性免疫反應(yīng)的重要效應(yīng)因子，在機(jī)體初次感染后，HCMV特異性CD4+T細(xì)胞群持續(xù)存在于機(jī)體的T細(xì)胞庫中，以控制病毒在宿主生命周期內(nèi)的再激活。CD4+T細(xì)胞在抗病毒免疫應(yīng)答中的作用大致可分為3類：淋巴細(xì)胞向感染部位募集；介導(dǎo)其他效應(yīng)細(xì)胞的擴(kuò)張；通過細(xì)胞因子的產(chǎn)生或細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性發(fā)揮抗病毒作用。T細(xì)胞表達(dá)CD28和CD40配體等共刺激分子，這些共刺激分子聚集是引起CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)信號傳遞和隨后激活所必需[26]。

HCMV特異性CD4+T細(xì)胞的表型在感染的不同階段具有不同的表型特征，在HCMV感染高峰期，HCMV特異性CD4+T細(xì)胞表型為CD45RA/CD45RO雙陽性細(xì)胞，表達(dá)CD27、CD28、CD38和CD40配體。而潛伏期，HCMV特異性CD4+T細(xì)胞表型為CD27/CD28雙陰性細(xì)胞。HCMV特異性CD4+T細(xì)胞在感染高峰期和潛伏期均能產(chǎn)生經(jīng)典的輔助性T細(xì)胞1細(xì)胞因子(如IL-2、γ干擾素和腫瘤壞死因子-α)。Roquin是一種細(xì)胞因子，在穩(wěn)定狀態(tài)下控制各種抗病毒基因的表達(dá)，以調(diào)節(jié)免疫穩(wěn)態(tài)，其功能在感染早期和晚期保持不變。Roquin是HCMV誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在HCMV感染過程中被誘導(dǎo)表達(dá)，HCMV積極利用Roquin進(jìn)行高效的病毒合成。干擾素調(diào)節(jié)因子1是一種轉(zhuǎn)錄因子，主要通過誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子和促進(jìn)抗病毒免疫反應(yīng)來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，而Roquin抑制干擾素調(diào)節(jié)因子1的表達(dá)則可促進(jìn)HCMV的高效復(fù)制[27]。如能尋找到抑制這兩個分子的靶點可能抑制HCMV復(fù)制，從而達(dá)到治療目的。HCMV可編碼免疫抑制IL-10同源基因，IL-10是輔助性T細(xì)胞1細(xì)胞因子的一種強(qiáng)有力的抑制劑，也能抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子，從而導(dǎo)致表面HLAⅡ類分子表達(dá)減少，并降低CD4+T細(xì)胞抗原的表達(dá)。IL-10能明顯抑制MCMV感染慢性期T細(xì)胞的增殖[28]。

注：TCR為T細(xì)胞受體，HCMV為人巨細(xì)胞病毒，pp為磷酸化蛋白，IE1為立刻早期蛋白1，gB為包膜糖蛋白B

2.3HCMV感染后CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的主要分子變化 HCMV已被證明可誘導(dǎo)抗原特異性CD8+T細(xì)胞克隆擴(kuò)增，HCMV感染能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生大量效應(yīng)記憶CD8+T細(xì)胞[29]。CD8+T細(xì)胞能限制HCMV復(fù)制，但不能消除或抑制其傳播。HCMV多輪抗原刺激導(dǎo)致機(jī)體HCMV特異性CD8+T細(xì)胞的克隆性擴(kuò)增，隨著年齡的增長HCMV特異性CD8+T細(xì)胞不斷累積，增加的CD8+T細(xì)胞數(shù)量能有效控制HCMV潛伏感染再激活。因此，在活躍的免疫反應(yīng)中，CD8+T細(xì)胞快速克隆擴(kuò)增可作為免疫介導(dǎo)疾病持續(xù)感染的標(biāo)志。T細(xì)胞受體識別細(xì)胞表面HLAⅠ類分子所表達(dá)的同源抗原肽，介導(dǎo)HCMV表位特異性CD8+T細(xì)胞的產(chǎn)生。HCMV特異性CD8+T細(xì)胞通過釋放γ干擾素和顆粒酶(中性粒細(xì)胞、生長因子受體結(jié)合蛋白、G蛋白偶聯(lián)受體激酶、代謝型谷氨酸受體)來控制HCMV感染，這些細(xì)胞因子水平在受刺激后數(shù)小時內(nèi)升高[30]。HCMV特異性CD8+T細(xì)胞可產(chǎn)生趨化因子，將免疫細(xì)胞(如CC趨化因子配體4、CC趨化因子配體5)吸引到感染部位，上述免疫細(xì)胞可趨化NK細(xì)胞、單核細(xì)胞以及活化的T細(xì)胞。因此，HCMV特異性CD8+T細(xì)胞是具有強(qiáng)大效應(yīng)功能的多功能細(xì)胞，能誘導(dǎo)和維持免疫反應(yīng)。已有多項臨床試驗證實HCMV特異性T細(xì)胞的過繼細(xì)胞免疫治療具有抗HCMV作用(表1)，HCMV特異性T細(xì)胞過繼細(xì)胞免疫治療在造血干細(xì)胞移植后100 d內(nèi)防治巨細(xì)胞病毒病方面具有良好的應(yīng)用前景；HCMV特異性T細(xì)胞在實體器官移植受者中被證明具有保護(hù)作用[37]；HCMV特異性T細(xì)胞治療巨細(xì)胞病毒病有一定的療效，如HCMV視網(wǎng)膜炎[38]；HCMV特異性T細(xì)胞在預(yù)防先天性 HCMV感染中也起到一定作用[39]。但HCMV特異性T細(xì)胞過繼細(xì)胞免疫治療存在持續(xù)時間短、效應(yīng)功能發(fā)揮有限等局限性，仍需進(jìn)一步研究。

2.4HCMV感染后CD4/CD8相互關(guān)系 HCMV特異性免疫應(yīng)答與CD4/CD8密切相關(guān)，HCMV感染研究中CD4/CD8發(fā)生倒置，CD8+T細(xì)胞擴(kuò)張性增多[40]。CD4+T細(xì)胞作為輔助細(xì)胞，在抗病毒反應(yīng)中通過CC趨化因子配體3和CC趨化因子配體4促進(jìn)CD8+T細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞結(jié)合，從而促進(jìn)CD8+T細(xì)胞進(jìn)入感染部位。CD4+T細(xì)胞還能促進(jìn)幼稚的CD8+T細(xì)胞進(jìn)入引流淋巴結(jié)，并通過產(chǎn)生γ干擾素和分泌局部趨化因子，將固有性或抗原特異性的效應(yīng)物導(dǎo)入病毒復(fù)制部位[41]。HCMV特異性CD4+T細(xì)胞的存在是維持HCMV特異性CD8+T細(xì)胞所必需。CD4+T細(xì)胞通過多種機(jī)制促進(jìn)記憶性CD8+T細(xì)胞的發(fā)育，如下調(diào)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的表達(dá)，產(chǎn)生IL-2等細(xì)胞因子[26,42]。但目前這兩種T細(xì)胞亞群的失衡及其在抗HCMV過程中的關(guān)鍵分子事件尚不清楚。

3 HCMV免疫逃逸及免疫衰老

3.1HCMV免疫逃逸特點及主要分子事件 HCMV是一種對病原免疫逃逸的范式，針對復(fù)制的不同步驟而產(chǎn)生抗病毒作用。首先，HCMV編碼細(xì)胞因子模擬物和誘餌受體，以調(diào)節(jié)細(xì)胞因子活性，限制細(xì)胞遷移和分化。其次，HCMV通過阻斷轉(zhuǎn)錄因子的激活來抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生。第三，HCMV微RNA直接抑制機(jī)體信使RNA的轉(zhuǎn)錄，抑制趨化因子和細(xì)胞因子表達(dá)。

表1 HCMV特異性T細(xì)胞過繼細(xì)胞免疫治療HCMV血癥和巨細(xì)胞病毒病的臨床試驗

HCMV基因組在感染過程中編碼多種逃逸蛋白，使病毒能夠調(diào)節(jié)固有性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)，最終即使在免疫能力強(qiáng)的宿主中病毒血癥也會持續(xù)存在，病毒排泄可長達(dá)數(shù)月(健康成人)甚至數(shù)年[27]。HCMV有多種方法來避免適應(yīng)性免疫反應(yīng)，其中一種方法是通過HCMV特異性表位抗原pp71下調(diào)靶細(xì)胞HLAⅠ類分子的表達(dá)，促進(jìn)HCMV增殖復(fù)制。pp71是由UL82基因編碼的磷酸化蛋白，其表觀分子量為71 000。HCMV pp71蛋白被包裝在病毒的被膜內(nèi)，阻止轉(zhuǎn)錄抑制性異染色質(zhì)在病毒基因組上的組裝，促進(jìn)病毒基因的轉(zhuǎn)錄翻譯，通過抑制固有性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的成分來幫助免疫逃逸[43]。

3.2HCMV致免疫衰老的免疫細(xì)胞改變 與其他慢性病毒感染相比，HCMV感染可引起一種不典型的CD8+T細(xì)胞過度增殖，稱為記憶膨脹，而導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞膨脹的主要原因之一是重復(fù)或持續(xù)的抗原暴露刺激。在HCMV感染過程中，T細(xì)胞識別病毒表位并經(jīng)歷增殖性擴(kuò)張，主要以HCMV特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量增多為主，這種現(xiàn)象在老年人中更為突出，大部分HCMV特異性CD8+T細(xì)胞為CD45RA+效應(yīng)記憶細(xì)胞。CD45RA+效應(yīng)記憶細(xì)胞群隨著年齡的增長而逐漸擴(kuò)大，在老年人群中占比達(dá)總效應(yīng)記憶CD8+T細(xì)胞群的一半以上[28]。持續(xù)抗原刺激，如潛伏或持續(xù)的HCMV感染，被認(rèn)為是CD45RA+效應(yīng)記憶T細(xì)胞擴(kuò)展的主要原因。T細(xì)胞受體直接識別HLAⅠ類分子呈遞的病毒肽，介導(dǎo)HCMV特異性T細(xì)胞的產(chǎn)生限制和清除HCMV[19]。在受感染的細(xì)胞中，源自蛋白酶體加工病毒蛋白的抗原肽從胞質(zhì)溶膠運(yùn)輸至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，加載到HLAⅠ類分子上并通過分泌途徑輸出至細(xì)胞表面，HCMV干擾HLAⅠ類分子抗原呈遞途徑的幾乎所有階段，從而避免CD8+T細(xì)胞的識別。

3.3HCMV引起免疫衰老主要分子事件 HCMV免疫反應(yīng)的一個特征是效應(yīng)記憶表型CD8+T細(xì)胞的積累(即CD27-CD28-/CD45RA+)，其他特征包括幼稚CD8+T細(xì)胞的頻率和數(shù)量下降(即CD27+CD28+/CD45RA+)和炎癥活性增強(qiáng)(如IL-6水平)[44]。T細(xì)胞的主要共刺激受體是CD28，然而終末分化的CD8+T細(xì)胞失去表達(dá)CD28的能力。相反，抗原驅(qū)動的T細(xì)胞活化后，其他共刺激受體(如4-1BB、OX40)在T細(xì)胞中表達(dá)，并導(dǎo)致小鼠巨細(xì)胞病毒特異性T細(xì)胞膨脹。老年人的HCMV特異性CD8+T細(xì)胞群的這種特殊性質(zhì)與T細(xì)胞的衰老有關(guān)。

在慢性感染情況下，NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞暴露于持久性抗原和(或)炎癥信號，這種過多的信號常導(dǎo)致宿主出現(xiàn)慢性免疫衰竭狀態(tài)[45]。免疫衰竭主要表現(xiàn)為效應(yīng)功能(細(xì)胞因子產(chǎn)生和殺傷功能)的逐漸喪失、多種抑制受體(如程序性細(xì)胞死亡受體1和淋巴細(xì)胞活化基因-3)的表達(dá)、代謝失調(diào)和穩(wěn)態(tài)增殖。NK細(xì)胞在HCMV感染的早期免疫反應(yīng)中必不可少，隨后HCMV進(jìn)化出多種機(jī)制來逃避NK細(xì)胞介導(dǎo)的病毒清除，通過下調(diào)細(xì)胞毒性功能或引發(fā)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致NK細(xì)胞耗竭。研究顯示，在慢性淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)膜腦炎病毒感染過程中，程序性細(xì)胞死亡受體1在功能耗竭的病毒特異性CD8+T細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，阻斷程序性細(xì)胞死亡受體1通路可促進(jìn)病毒特異性T細(xì)胞的效應(yīng)功能，顯著降低實驗動物的病毒載量[30]。但程序性細(xì)胞死亡受體1在HCMV感染狀態(tài)下能否促進(jìn)HCMV特異性T細(xì)胞擴(kuò)增發(fā)揮抗病毒效應(yīng)及發(fā)生機(jī)制尚不清楚，尚待進(jìn)一步闡明。

4 小 結(jié)

HCMV與宿主免疫系統(tǒng)之間的相互作用是一個復(fù)雜的過程，從病毒黏附進(jìn)入宿主靶細(xì)胞開始，隨后引起機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答，最終形成一種特異性的適應(yīng)性免疫反應(yīng)。NK細(xì)胞在HCMV感染早期和潛伏期對病毒的控制起重要作用，通過產(chǎn)生細(xì)胞因子攻擊并清除HCMV感染的細(xì)胞，并在適應(yīng)性免疫過程中與T細(xì)胞共同作用發(fā)揮抗病毒作用，經(jīng)過一系列適應(yīng)性細(xì)胞免疫反應(yīng)過程產(chǎn)生HCMV特異性T細(xì)胞。隨著感染時間的推移，HCMV通過改變T細(xì)胞亞群比例、受體與配體結(jié)合、關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的阻斷等方式產(chǎn)生免疫逃逸，這種狀況隨年齡增長表現(xiàn)愈發(fā)明顯甚至導(dǎo)致免疫衰竭。因此，在HCMV感染宿主的過程中，宿主抵御病毒的免疫機(jī)制復(fù)雜多樣，病毒免疫逃逸的策略也復(fù)雜多變，仍有很多機(jī)制尚未闡明。深入了解HCMV致病的細(xì)胞免疫機(jī)制、免疫逃逸機(jī)制及其對機(jī)體免疫衰老的影響，可為HCMV感染的防控提供新思路。