復(fù)方鹿骨健骨顆粒的制備及藥效學(xué)研究

郭靜茹

摘要：目的：探究復(fù)方鹿骨健骨顆粒的制備及藥效學(xué)研究察。方法：選擇冷凝回流法提取黃精、梅花鹿骨超微粉，通過吸濕性、流動(dòng)性、顆粒成粒率、溶化性等確定最佳制備工藝，并分析藥效學(xué)。 結(jié)果：復(fù)方鹿骨健骨顆粒劑的制劑工藝為浸膏粉：乳糖=1：3，20%乙醇制軟材，80目和12目篩進(jìn)行篩選，烘干2h即得;小鼠血清相關(guān)生化指標(biāo)顯示，給藥組中小鼠血清中鈣離子（Ca2+）、叉頭型基因P3（FOXP3）、骨鈣素（OCN）、小鼠降鈣素（CT）、雌二醇（E2）和小鼠羥輔氨酸（Hyp）的表達(dá)量明顯升高（p<0.05）。WB檢測結(jié)果顯示，與模型組相比較，給予CDBE治療后小鼠股骨中P16和P67 phox相關(guān)因子的蛋白的表達(dá)水平明顯降低（p<0.05）。HE染色觀察到小鼠左側(cè)股骨骨小梁豐度增加明顯，更加寬厚，并且連接較為緊密。結(jié)論：本研究中制備的復(fù)方鹿骨健骨顆粒劑工藝穩(wěn)定可行，能夠?yàn)楣I(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)和指導(dǎo)，對改善骨質(zhì)疏松癥有不錯(cuò)的療效。

關(guān)鍵詞：復(fù)方鹿骨健骨顆粒;藥效學(xué);制備

【中圖分類號】 R282 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）05--01

1.資料與方法

1.1一般資料：

選擇60只3月齡的雌性ICR小鼠，體重24～27 g，衛(wèi)生許可證號SCXK（吉）-2019-0015。將所有小鼠隨機(jī)分為4組（n=10），分別為模型組（Model）、陽性藥組（Positive）、CDBE組（CDBE）以及空白對照組（Control）。梅花鹿骨（安國肖氏康源飲品有限公司）;黃精（安國市?？抵兴庯嬈庸び邢薰荆?BCA蛋白濃度測定試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）;鈣離子（Ca2+）ELISA試劑盒（江西海聯(lián)生物科技有限公司）、叉頭型基因P3（FOXP3）ELISA試劑盒（江西海聯(lián)生物科技有限公司）;骨鈣素（OCN）ELISA試劑盒（江西海聯(lián)生物科技有限公司）;降鈣素（CT）ELISA試劑盒（江西海聯(lián)生物科技有限公司）;雌二醇（E2）ELISA試劑盒（江西海聯(lián)生物科技有限公司）;羥脯胺酸（HyP）ELISA試劑盒（江西海聯(lián)生物科技有限公司）。

1.2方法

按干燥鹿骨超微粉：黃精=1：2的比例精密稱取原料，加15倍體積蒸餾水，浸泡2 h后經(jīng)水浴提取2次，每次2h，合并煎液，濾過，將濾液進(jìn)行濃縮、干燥，除去濾液中多余的水分，即得干燥浸膏粉，不同輔料與干浸膏粉以1：1的比例混合均勻，以不同濃度的乙醇溶液作潤濕劑潤濕，用一號篩和五號篩過篩進(jìn)行整粒，干燥，即得。

各組于術(shù)前記錄體重，腹腔注射濃度為8%烏拉坦進(jìn)行麻醉，麻醉劑量為：0.1ml/10g。除Control組之外的其他三組小鼠需手術(shù)絲線結(jié)扎卵巢及其周圍相連組織，切除雙側(cè)卵巢。Control組小鼠在打開腹腔后，只摘除腹腔內(nèi)適量脂肪。術(shù)后將所有小鼠于原環(huán)境飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。術(shù)后三天，每天腹腔注射8萬單位的青霉素，防止感染。密切觀察小鼠術(shù)后狀態(tài)。CDBE組：每天給予濃度為1.2g/ml的CDBE，給藥劑量為0.28ml/10g小鼠體重;Positive組：每天給予濃度0.073g/ml阿侖膦酸鈉藥液，給藥劑量為0.19ml/10g小鼠體重;Control組和Model組：每天給予同體積蒸餾水。以灌胃方式給藥，持續(xù)給藥12周。

1.3觀察指標(biāo)：分析復(fù)方鹿骨健骨顆粒的制備及藥效學(xué)情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對本次結(jié)果數(shù)據(jù)由統(tǒng)計(jì)員處理分析，并獲取最終結(jié)論，處理軟件為SPSS22.0，統(tǒng)計(jì)的全部資料中，用χ2檢驗(yàn)計(jì)量最后差異、t檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料最后差異，表示方式為用“x±s”和（%）等，若得到結(jié)論P(yáng)<0.05，則表明結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析要求。

2.結(jié)果

2.1復(fù)方鹿骨健骨顆粒的制備

當(dāng)物料與輔料的比例為1：3時(shí)，該顆粒劑的吸濕性最弱。所以，最終選擇物料：乳糖=1：3進(jìn)行復(fù)方鹿骨健骨顆粒劑的制備。在72 h后，使用濃度為20%乙醇作為潤濕劑的顆粒吸濕性最小，80%與60%的濃度乙醇在吸濕性無明顯差別。同時(shí)，在顆粒劑的制備過程中，在乙醇濃度為20%的時(shí)候，潤濕劑的使用量最少。結(jié)合吸濕性考察結(jié)果，可以確定選擇濃度為20%的乙醇作為潤濕劑最為合適。

2.2復(fù)方鹿骨健骨顆粒的藥效學(xué)

Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與Control組相比，Model組小鼠右側(cè)股骨中P16和P67 phox蛋白表達(dá)水平明顯增加;與Model組相比。CDBE給藥治療后，小鼠股骨中蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

Control組小鼠的骨小梁結(jié)構(gòu)致密且規(guī)則。與Control組相比較，Model組小鼠的骨小梁豐度明顯降低，骨髓腔明顯增大，骨小梁結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)大量空白的區(qū)域，不能連接成完整的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。CDBE組的小鼠的HE染色切片與Model組相比較，骨小梁豐度增加明顯，更加寬厚，并且連接較為緊密，與Control組較為接近。

3.討論

復(fù)方鹿骨健骨顆粒由梅花鹿骨、黃精提取制成，顆粒劑具有便于服用與攜帶、劑量準(zhǔn)確，方便儲(chǔ)存與運(yùn)輸，是最接近傳統(tǒng)湯劑的現(xiàn)代中藥劑型，具有良好的市場開發(fā)前景。所以，復(fù)方鹿骨健骨顆粒緩解骨質(zhì)疏松作用具有較好的理論基礎(chǔ)。骨質(zhì)疏松癥模型小鼠的骨吸收會(huì)增強(qiáng)，會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)中膠原分解加速，但是成骨細(xì)胞合成的膠原蛋白質(zhì)會(huì)減少，HyP可以加速體內(nèi)膠原蛋白的重建以及彈性蛋白的再生和更新，通過補(bǔ)充體內(nèi)HyP可以促進(jìn)骨形成，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松[4]。作為一種骨骼健康補(bǔ)充劑，CDBE可以刺激膠原蛋白質(zhì)的合成與增加，促進(jìn)骨質(zhì)疏松小鼠血清中的Ca2+、FOXP3、OCN、CT、HyP表達(dá)。以上這些結(jié)果表明CDBE對骨形成的刺激起主導(dǎo)作用。

綜上所述，把CDBE治療的方式用于骨質(zhì)疏松模型小鼠，可以升高小鼠血液中Ca2+、FOXP3、OCN、CT、E2、和HyP的表達(dá)量，使小鼠骨骼中P16及P67 phox蛋白表達(dá)水平降低，并且可以改善絕經(jīng)后小鼠的骨的微組織結(jié)構(gòu)，有效增加脛骨骨小梁的數(shù)目、厚度，使骨小梁連接緊密，使小鼠骨的健康情況得到很好的改善，說明復(fù)方鹿骨健骨顆粒用于骨質(zhì)疏松癥療效顯著。

參考文獻(xiàn)：

[1] 倪立堅(jiān)，嚴(yán)錦賢，宋紅梅，等. 復(fù)方巴戟天健骨顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)升級研究[J]. 海峽藥學(xué)，2021，33（4）：78-81.