抗核抗體熒光模型作用機(jī)制與抗ENA譜相關(guān)性對自身免疫性疾病的相關(guān)價(jià)值研究

張優(yōu)明 王 丹 石 琳 孔凡靜

(齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院 黑龍江 齊齊哈爾 161000)

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院近兩年間在風(fēng)濕免疫科收治的795例自身免疫性疾病患者，對每一病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析分類計(jì)算，其中包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者311例，干燥綜合(SS)患者155例，過敏性紫癜(AP)患者31例，混合結(jié)締組織病(MCTD)患者129例，硬皮病(PSS)患者88例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者81例,對每種自身免疫抗體陽性患者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算出現(xiàn)頻率，列表統(tǒng)計(jì)如下圖表1，然后再對每種陽性抗體的熒光模型表現(xiàn)形式進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，列表如下圖表2

表1 795例AID患者對應(yīng)自身抗體結(jié)果比較

表2 特異性自身抗體與熒光模型的結(jié)果關(guān)系(%)

1.2 方法:所有自身免疫性疾病病例患者，均于次日清晨無用藥情況下空腹采集靜脈血3ml,于3500轉(zhuǎn)/分，十分鐘離心處理，分離出血清備用?？购丝贵w熒光模型采用間接免疫熒光法,以Hep-2細(xì)胞和鼠肝作為抗原，固定于載玻片上,與受檢者血清反應(yīng)。血清中抗體與抗原結(jié)合后，再加入FITC標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，在熒光顯微鏡下觀察熒光模型表現(xiàn)型。抗核抗體(ANA)抗體陽性以>1：100為準(zhǔn)，有一定熒光但不確定模型時(shí)可判定為可疑。對陽性樣本將血清稀釋一定倍數(shù),確定最終抗體滴度。抗核提取物抗體(ENA)譜采用歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷股份有限公司提供的抗核抗體譜(IgG)檢測試劑盒進(jìn)行檢測. 血清用三羥甲基氨基甲烷樣品緩沖液1:101稀釋后，放置搖床混勻30分鐘，洗滌3次，洗液按1:9比例進(jìn)行配置，加酶結(jié)合物150微升加1350微升樣品緩沖液混勻30分鐘，洗滌3次后，加底物液1500微升輕微晃動(dòng)孵育10分鐘，最后用蒸餾水洗滌3次，干燥后與試劑對應(yīng)型號標(biāo)準(zhǔn)膜條讀取膜條檢測結(jié)果。最后所有數(shù)據(jù)均采用Graph Pad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料應(yīng)用數(shù)值和百分?jǐn)?shù)表示，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用x ± s表示，采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，概率值* P < 0.05表示差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

1.3 結(jié)果 在RA疾病中SSA占40.8%抗RNP占23.0%抗組蛋白占48.9%，SSB抗體占16.7%熒光模型主要存在于核均質(zhì)型和顆粒型,核均質(zhì)型Hep-2細(xì)胞核質(zhì)呈均質(zhì)著色細(xì)胞染色體熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，顆粒型主要與U1RNP,抗SSA, 抗SSB和抗Sm抗體有關(guān), 分為粗顆粒型熒光和細(xì)顆粒型熒光, 粗顆粒熒光染色呈粗顆粒有時(shí)伴有細(xì)小核點(diǎn), 核仁染色呈陰性, 細(xì)胞濃縮染色體陰性。 細(xì)胞核質(zhì)著色呈細(xì)顆粒型熒光, 核仁呈陰性表現(xiàn), 染色體周圍可見細(xì)顆粒熒光, 染色體區(qū)域呈陰性；在SS疾病中SSA抗體占99.3%SSB抗體占87.7%,熒光模型SSA54.6%SSB19.1%存在顆粒型熒光中，SSA33.4%SSB19.1%存在均質(zhì)型熒光；在AP疾病中主要是ScI-70占77.8%抗核小體占9.68%對應(yīng)熒光模型均質(zhì)型占68%核仁型占45.3%，核仁型Hep-2細(xì)胞核仁為熒光加強(qiáng)的均質(zhì)熒光模型；在MCTD疾病中SSA占83.7%RNP占69.0%，SSB占64.3%，ScI-70占18.6對應(yīng)熒光模型為顆粒型54.6%，97.5%，19.1%，30.6%胞漿型16.56%11.7%23.8%6.67%均質(zhì)型33.4%5.52519.0%68.0%；在PSS疾病中抗ScI-70抗體陽性，熒光模型主要存在均質(zhì)型中；在SLE疾病中抗核小體占92.6%，dsDNA占76.5%SM和組蛋白各占46.9%SSA占39.5%RNP占23.5%熒光模型分別為均質(zhì)型，胞漿型，顆粒型所占比例各不相同。

1.4 討論 抗核抗體(ANA)免疫熒光抗體檢測陽性見于各種自身免疫性疾病患者，臨床上ANA熒光檢測是一項(xiàng)重要的篩查實(shí)驗(yàn)，滴度增高提示自身免疫性疾病的可能性，熒光模型分類較為復(fù)雜分為核仁型，核均質(zhì)型，核膜型，著絲點(diǎn)型，周邊型，肌動(dòng)蛋白型等，由于自身抗體的不同可以表現(xiàn)為不同的熒光模型。如在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中抗SSA,RNP，SSB,組蛋白,daDNA抗體均可表現(xiàn)不同程度陽性反應(yīng)，主要表現(xiàn)在顆粒型熒光中；在SS自身免疫性疾病中主要呈現(xiàn)SSA和SSB抗體陽性，主要表現(xiàn)在顆粒型和核仁型熒光核型中；在AP自身免疫性疾病中抗ScI-70抗體表現(xiàn)為陽性，熒光模型表現(xiàn)為均質(zhì)型和核仁型；在SLE自身免疫性疾病中抗RNP抗體，SSA抗體，SSB抗體，抗dsDNA抗體,抗SM抗體均可表現(xiàn)出較高的陽性率，模型主要表現(xiàn)為顆粒型和均質(zhì)型；系統(tǒng)性硬皮病中也表現(xiàn)出抗ScI-70抗體陽性，存在均質(zhì)型熒光和核仁型熒光陽性率較高。每種自身免疫性疾病中都會(huì)檢測到單種或兩種及以上自身抗體，對疾病診斷帶來一定困擾。自身免疫性疾病(autoimmune diseases，AID)是自身免疫應(yīng)答過強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過長，以致造成自身組織細(xì)胞損傷，并引起相應(yīng)的臨床癥狀和體征，其臨床表現(xiàn)多樣，發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，有明顯的遺傳傾向，且女性發(fā)病率高于男性，易反復(fù)發(fā)作等基本特征。通過血清或淋巴細(xì)胞可被動(dòng)轉(zhuǎn)移疾病，應(yīng)用自身抗原或自身抗體可復(fù)制出具有相似病理變化的動(dòng)物模型，用于臨床分析疾病。其誘發(fā)因素主要有物理因素如冷，熱，電離輻射等，藥物影響或生物學(xué)因素細(xì)菌,病毒等均可以改變自身抗原的性質(zhì)。自身免疫性疾病患者根據(jù)自身抗原分布和發(fā)病原因的特點(diǎn)分為器官特異性自身免疫病如格雷夫斯病(Graves disease)和系統(tǒng)性自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。本文主要研究系統(tǒng)性自身免疫病，不同自身免疫性疾病其發(fā)病和組織損傷的機(jī)制各異，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎癥，主要抗原為變性IgG;系統(tǒng)性紅斑狼瘡表現(xiàn)為腎小球腎炎，血管炎，關(guān)節(jié)炎，血細(xì)胞減少等，主要抗原為DNA，核蛋白，血細(xì)胞膜抗原；干燥綜合征主要病損特征為唾液腺和淚腺上皮細(xì)胞炎癥，表現(xiàn)唾液腺，淚腺等腺體細(xì)胞自身抗原。自身抗原一般為多器官組織的共有成分如細(xì)胞核，線粒體等，表現(xiàn)出各種臨床癥狀和體征。目前，臨床上對自身免疫性疾病患者的治療多限于緩解患者的臨床癥狀，但其具體的發(fā)病機(jī)制有待繼續(xù)研究。由于其病因復(fù)雜臨床表現(xiàn)多樣化，加上潛伏期長，患者生活質(zhì)量嚴(yán)重降低等特點(diǎn)，所以對于疾病的早期診斷非常重要。本研究發(fā)現(xiàn)熒光模型與自身抗體聯(lián)合檢測，對疾病的確立更具有診斷價(jià)值。因此，本實(shí)驗(yàn)通過比較不同自身抗體在各自熒光核型中的分布情況，研究抗核抗體熒光核型及自身抗體檢測，對自身免疫性疾病發(fā)生和發(fā)展的作用和具體機(jī)制的相關(guān)性。為自身免疫性疾病診斷提供相應(yīng)依據(jù)，為臨床治療自身免疫性疾病提供充足的理論知識[2]。

通過以上熒光模型和自身抗體統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可以看出，熒光模型對自身免疫性疾病的確診具有一定的提示作用，但僅根據(jù)熒光模型特點(diǎn)來推斷抗體的特異性還不夠確切,需要借助自身抗體和熒光模型綜合分析，通過聯(lián)合檢測抗核提取物抗體(ENA)和抗核抗體熒光模型，可以更準(zhǔn)確對自身免疫性疾病進(jìn)行定位分析。自身抗體的檢測可作為自身免疫性疾病分類的重要參考指標(biāo)。隨著醫(yī)學(xué)免疫學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，抗核抗體熒光模型研究沿著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)方向不斷邁進(jìn)，為疾病帶來更加精密的數(shù)據(jù)。通過研究證實(shí)抗核抗體熒光核型與自身抗體聯(lián)合檢測，可提高對自身免疫性疾病診斷的敏感性和特異性，為疾病的早期診斷提供重要參考價(jià)值，為臨床對于自身免疫性疾病的治療提供新的依據(jù)，減少患者的痛苦，為臨床治療縮短了療程，減輕患者的負(fù)擔(dān)，縮短治療周期。