青藤堿抑制胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲及其與NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系

陳偉毅，洪煉哲，彭靖，陳延，唐峰，陳立軍

（1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南常德415000；2.湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南懷化418000）

胰腺癌是一種常見(jiàn)的惡性程度極高的消化系統(tǒng)腫瘤，起病隱匿，進(jìn)展迅速，預(yù)后很差[1-2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[3-4]，胰腺癌患者5年生存率不超過(guò)8%，平均中位生存期短于6個(gè)月。化療是主要治療方法之一，但胰腺癌化療耐藥性很高，治療效果很不理想[5-6]。因此，尋找新的高靶向性藥物，提高胰腺癌的化療效果，是目前治療胰腺癌的緊迫需要。

青藤堿（sinomenine）是從防己科防己屬植物青風(fēng)藤及毛青藤的干燥藤莖中提取的生物堿單體，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫抑制等藥理作用[7]。多篇文獻(xiàn)[8-10]報(bào)道青藤堿可以抑制肺癌、乳腺癌、胃癌等腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，但對(duì)胰腺癌的作用尚未明確。本研究從核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路探討青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移和侵襲的影響，為青藤堿應(yīng)用于臨床抗胰腺癌治療提供理論依據(jù)，并為研究青藤堿抗腫瘤作用機(jī)制提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥物與試劑鹽酸青藤堿（湖南正清制藥有限公司，純度＞98%），DMEM、胎牛血清（美國(guó)Gibco公司），Matrigel基質(zhì)膠（美國(guó)BD公司），結(jié)晶紫染色試劑（上海碧云天生物技術(shù)公司），Transwell小室（美國(guó)Corning公司），Histone H3 antibody、NF-κB p65 antibody、ICAM-1 antibody、VCAM-1 antibody、β-actin（貨號(hào)分別為9715、4764、4915、32653、4970，美國(guó)CST公司）。

1.1.2 儀器CB060型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（德國(guó)Binder公司），BX63型熒光顯微鏡（日本Olympus公司），AE2000型光學(xué)倒置顯微鏡（美國(guó)Motic公司），Mini-PROTEAN Tetra型聚丙烯酰胺垂直電泳系統(tǒng)、ChemiDoc XRS+型凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞及培養(yǎng)人胰腺癌Capan-1細(xì)胞購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)，用含有10%胎牛血清的DMEM，培養(yǎng)于37℃、5%CO2孵箱中，每48 h用0.25%的胰酶消化傳代進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)胞處理取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的胰腺癌Capan-1細(xì)胞，分別用3個(gè)濃度青藤堿（400、800、1 600 mg/L）處理[7]，或用青藤堿1 600 mg/L+TNF-α20 mg/L處理，以無(wú)處理的Capan-1細(xì)胞作為對(duì)照。

1.2.3 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移率將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Capan-1細(xì)胞以每孔5×105/mL，2 mL/孔接種在6孔板中，常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)到80%融合狀態(tài)，棄DMEM，PBS洗3次，用含有1%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)細(xì)胞，使細(xì)胞饑餓過(guò)夜，棄掉DMEM，PBS再洗3次，用無(wú)菌的10μL Tip頭在6孔板的底部劃一字形痕，根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組加入含有不同濃度的青藤堿、TNF-α和1%胎牛血清的DMEM，在37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，于0、16 h拍照，采用Image J軟件計(jì)算細(xì)胞遷移率=（0 h劃痕距離-16 h劃痕距離）/0 h劃痕距離×100%。

1.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)遷移實(shí)驗(yàn)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Capan-1細(xì)胞，用不含有胎牛血清的DMEM配制成濃度為5×105/mL的單細(xì)胞懸液，取200μL懸液加入Transwell小室上室，下室加入600μL含10%胎牛血清和不同濃度青藤堿、TNF-α的DMEM，放入37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。取出小室，用PBS洗3次，晾干，固定染色，采用Image J軟件計(jì)算細(xì)胞數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)：將Matrigel基質(zhì)膠與無(wú)胎牛血清的DMEM按1∶8比例混合，取100μL平鋪于小室上室中，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中溫育4～5 h，使其凝固成膠狀，后續(xù)操作步驟與遷移實(shí)驗(yàn)一致。

1.2.5 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)分別提取細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞總蛋白，采用BCA法測(cè)量蛋白濃度，每組取50μg蛋白樣品進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后將蛋白轉(zhuǎn)移到NC膜上，封閉后加入一抗4℃過(guò)夜，再加入二抗孵育2 h，曝光顯影，以β-actin、Histon H3為內(nèi)參，檢測(cè)蛋白相對(duì)表達(dá)量，采用Quantity one軟件分析數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移的影響

采用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后細(xì)胞遷移率，結(jié)果顯示，孵育16 h后，對(duì)照組與低、中、高濃度青藤堿處理組的細(xì)胞遷移率分別為（26.70±1.34）%、（18.75±2.05）%、（12.50±1.23）%、（12.12±1.08）%，與對(duì)照組比較，3個(gè)濃度青藤堿處理組的細(xì)胞遷移率均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）（圖1）。采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后遷移細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示：孵育24 h后，對(duì)照組與低、中、高濃度青藤堿處理組的遷移細(xì)胞數(shù)分別為（414±26）、（338±34）、（286±20）、（207±18）個(gè)，與對(duì)照組比較，3個(gè)濃度青藤堿處理組的遷移細(xì)胞數(shù)均明顯減少（P＜0.05或P＜0.01）（圖2）。

圖1 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移率影響Figure 1 Influence of sinomenine on migration rate of pancreatic cancer Capan-1 cells

圖2 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1遷移細(xì)胞的影響Figure2 Influenceof sinomenineon migration number of pancreatic cancer Capan-1 cells

2.2 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞侵襲的影響

采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后侵襲細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示，孵育24 h后，對(duì)照組與低、中、高濃度青藤堿處理組的侵襲細(xì)胞數(shù)分別為（211±17）、（168±11）、（139±14）、（118±12）個(gè)，與對(duì)照組比較，3個(gè)濃度青藤堿處理組的侵襲細(xì)胞數(shù)均明顯減少（P＜0.05或P＜0.01）（圖3）。

圖3 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞侵襲力的影響Figure 3 Influence of sinomenine on invasion ability of pancreatic cancer Capan-1 cells

2.3 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響

采用Western blot檢測(cè)不同濃度青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后細(xì)胞漿、細(xì)胞核NF-κB蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，孵育24 h后，對(duì)照組與低、中、高濃度青藤堿處理組細(xì)胞漿NF-κB蛋白表達(dá)量分別為0.54±0.026、0.68±0.035、0.73±0.048、0.76±0.041；細(xì)胞核NF-κB蛋白表達(dá)量分別為1.46±0.036、1.29±0.042、1.13±0.029、1.02±0.021，與對(duì)照組比較，3個(gè)濃度青藤堿處理組細(xì)胞漿NF-κB蛋白表達(dá)量均明顯上調(diào)，而細(xì)胞核NF-κB蛋白表達(dá)量均明顯下調(diào)（P＜0.05或P＜0.01）（圖4）。

圖4 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響Figure 4 Influenceof sinomenineon NF-κBsignaling pathway in pancreatic cancer Capan-1 cells

2.4 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的影響

采用Western blot檢測(cè)不同濃度青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)，結(jié)果顯示，孵育24 h后，中、高濃度青藤堿作用Capan-1細(xì)胞24 h后，ICAM-1、VCAM-1表達(dá)明顯下降，與對(duì)照組有明顯差異（P＜0.05或P＜0.01）（圖5）。

圖5 青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)的影響Figure5 Influenceof sinomenineon expressionsof ICAM-1 and VCAM-1 in pancreatic cancer Capan-1 cells

2.5 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移的抑制作用

TNF-α是NF-κB信號(hào)通路激活劑，為了明確NF-κB信號(hào)通路是否介導(dǎo)了青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移的抑制作用，采用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TNF-α和青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后細(xì)胞遷移率。結(jié)果顯示：青藤堿1 600 mg/L組細(xì)胞遷移率低于對(duì)照組（P＜0.01），青藤堿1 600 mg/L+TNF-α20 mg/L組細(xì)胞遷移率高于青藤堿1 600 mg/L組（P＜0.05）（圖6）。為了明確NF-κB信號(hào)通路是否介導(dǎo)了青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移的抑制作用，采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TNF-α和青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后遷移細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示，青藤堿1 600 mg/L組遷移細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組（P＜0.01），青藤堿1 600 mg/L+TNF-α20 mg/L組遷移細(xì)胞數(shù)高于青藤堿1 600 mg/L組（P＜0.05）（圖7）。

圖6 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移率的降低作用Figure 6 Migration rate inhibitory action of sinomenine on Capan-1 cells reversed by TNF-α

圖7 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1遷移細(xì)胞數(shù)的降低作用Figure7 Migration number inhibitory action of sinomenineon Capan-1 cellsreversed by TNF-α

2.6 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞侵襲的抑制作用

為了明確NF-κB信號(hào)通路是否介導(dǎo)了青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞侵襲的抑制作用，采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TNF-α和青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后侵襲細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示，青藤堿1 600 mg/L組侵襲細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組（P＜0.01），青藤堿1 600 mg/L+TNF-α20 mg/L組侵襲細(xì)胞數(shù)高于青藤堿1 600 mg/L組（P＜0.05）（圖8）。

圖8 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞侵襲的抑制作用Figure8 Invasion inhibitory action of sinomenineon Capan-1 cellsreversed by TNF-α

2.7 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的下調(diào)作用

為了明確NF-κB信號(hào)通路是否介導(dǎo)了青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的下調(diào)作用，采用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TNF-α和青藤堿作用Capan-1細(xì)胞后ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)。結(jié)果顯示，青藤堿1 600 mg/L組ICAM-1、VCAM-1表達(dá)低于對(duì)照組（P＜0.01），青藤堿1 600 mg/L+TNF-α20 mg/L組ICAM-1、VCAM-1表達(dá)高于青藤堿1 600 mg/L組（均P＜0.05）（圖9）。

圖9 TNF-α逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的下調(diào)作用Figure 9 Effectsof sinomenine down-regulating ICAM-1 and VCAM-1 expressions in Capan-1 cells reversed by TNF-α

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)青藤堿通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路激活下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)，抑制胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移和侵襲。通過(guò)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)首先發(fā)現(xiàn)青藤堿抑制胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移和侵襲。通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)青藤堿抑制胰腺癌Capan-1細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路激活，下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)。為了明確NF-κB信號(hào)通路是否介導(dǎo)了青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞的作用，采用NF-κB信號(hào)通路激活劑TNF-α干預(yù)，結(jié)果表明TNF-α可以逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移和侵襲的抑制作用，以及對(duì)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的下調(diào)作用。因此，筆者認(rèn)為青藤堿通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)，抑制胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移和侵襲。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，青藤堿具有鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫抑制、鎮(zhèn)靜、抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等藥理作用[11]。目前已有毛青藤堿片、青藤堿緩釋片、鹽酸青藤堿注射劑、正清風(fēng)痛寧片等多種制劑應(yīng)用于臨床，在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各種風(fēng)濕病以及心律失常取得較好的療效[12]。Gao等[13]發(fā)現(xiàn)青藤堿可以通過(guò)調(diào)節(jié)miR-29/PDCD-4軸來(lái)抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。Xu等[14]發(fā)現(xiàn)青藤堿通過(guò)降低miR-23a表達(dá)抑制前列腺癌P3細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。Zhao等[15]表明青藤堿通過(guò)減少Smad蛋白產(chǎn)生減輕EMT抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞遷移和侵襲。Li等[16]發(fā)現(xiàn)青藤堿能以劑量依賴的方式通過(guò)調(diào)控原癌基因MCM2和Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)抑制卵巢癌細(xì)胞IGROV1和HeyA8轉(zhuǎn)移。本研究表明青藤堿通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路激活下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)，抑制胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲。上述證據(jù)表明青藤堿具有抗腫瘤活性，可能通過(guò)多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲，是一種潛在的抗腫瘤藥物。

NF-κB是一種真核生物中廣泛存在的細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控多種炎癥因子的轉(zhuǎn)錄?；罨腘F-κB能與多種細(xì)胞因子基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子區(qū)NF-κB結(jié)合位點(diǎn)特異度結(jié)合，調(diào)控其轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，進(jìn)一步影響細(xì)胞的周期、衰老、自噬、凋亡、免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)等病理生理過(guò)程[17]。NF-κB信號(hào)通路與腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著很重要的作用，Jain等[18]發(fā)現(xiàn)采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）激活NF-κB信號(hào)通路后，可以促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，Geng等[19]表明選用RNF183激活NF-κB信號(hào)通路后，可以刺激多功能趨化因子IL-8的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而促進(jìn)大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，Sun等[20]認(rèn)為抑制NFκB信號(hào)通路激活可以抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，其機(jī)制與減輕EMT有關(guān)，He等[21]發(fā)現(xiàn)減少NF-κB信號(hào)通路激活可以抑制胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，其原因與下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-7、MMP-9有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)抑制NF-κB信號(hào)通路激活可以下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)，抑制胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。上述資料表明NF-κB信號(hào)通路可以通過(guò)調(diào)控多種因子、蛋白表達(dá)影響腫瘤轉(zhuǎn)移，是抗腫瘤治療的一個(gè)潛在的重要靶點(diǎn)。

青藤堿可以抑制NF-κB信號(hào)通路激活，Yao等[22]報(bào)道青藤堿可以抑制人成纖維樣滑膜細(xì)胞NF-κB的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，Shen等[23]表明青藤堿通過(guò)抑制人骨肉瘤MG-63細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路，調(diào)節(jié)兒童踝關(guān)節(jié)骨折的炎癥反應(yīng)，Xiong等[24]研究發(fā)現(xiàn)青藤堿可以通過(guò)抑制結(jié)腸黏膜NF-κB信號(hào)通路的激活，減少結(jié)腸黏膜炎癥，治療實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎。而在本研究首先發(fā)現(xiàn)青藤堿可以抑制NF-κB信號(hào)通路激活，并同時(shí)抑制胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲。而采用TNF-α激活NF-κB信號(hào)通路后，可以逆轉(zhuǎn)青藤堿對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的抑制作用。

TNF-α是一種具有廣泛生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，參與機(jī)體多種生理和病理過(guò)程[25]。首先TNF-α的表達(dá)受NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，在TNF-α的基因啟動(dòng)子區(qū)域有NF-κB結(jié)合位點(diǎn)，NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，可以與TNF-α基因啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)TNF-α的表達(dá)，引起炎癥反應(yīng)[26]。同時(shí)TNF-α是誘導(dǎo)NF-kB活化的重要細(xì)胞因子。在TNF-α的作用下，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的NF-κB會(huì)與抑制蛋白（inhibitory protein of NF-κB，IκB）解聚分離，從而使NF-κB被釋放出來(lái)，被釋放出來(lái)的NF-κB隨即從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核，又進(jìn)一步刺激TNF-α等細(xì)胞因子的分泌，參與炎癥反應(yīng)，同時(shí)通過(guò)正反饋?zhàn)饔茫M(jìn)一步激活NF-κB，引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)和擴(kuò)大炎癥反應(yīng)。阻斷NF-κB信號(hào)通路后可以顯著抑制TNF-α所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[27]。因此，TNF-α和NF-κB二者相互依賴，相互制約，共同參與機(jī)體對(duì)各種刺激因素的反應(yīng)。

黏附分子是細(xì)胞在炎癥反應(yīng)過(guò)程中所釋放的一類糖蛋白分子，包括ICAM-1、VCAM-1等。ICAM-1是人體內(nèi)廣泛分布的一種細(xì)胞間黏附分子，它可以介導(dǎo)細(xì)胞和細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞的結(jié)合和黏附[28]。VCAM-1廣泛表達(dá)于成纖維細(xì)胞、活化內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞表面，參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、細(xì)胞和組織的分化、發(fā)育、免疫應(yīng)答等[29]。ICAM-1和VCAM-1在介導(dǎo)腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲中起著重要作用，有研究[30]表明ICAM-1通過(guò)與其受體的特異度結(jié)合，使腫瘤細(xì)胞之間的黏附力降低，促使腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生黏附并向血管外基質(zhì)遷移，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。也有研究[31]發(fā)現(xiàn)VCAM-1通過(guò)與VLA-4相互結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)采用青藤堿抑制NF-κB信號(hào)通路激活后，可以下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)，從而抑制胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，提示青藤堿可能通過(guò)調(diào)控NF-κB/ICAM-1、VCAM-1通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞之間的黏附，減少腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附，從而減少腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)青藤堿通過(guò)調(diào)控NF-κB信號(hào)通路下調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)抑制胰腺癌Capan-1細(xì)胞遷移和侵襲，為胰腺癌的治療找到一種潛在有效藥物，并從NF-κB信號(hào)通路探討了青藤堿的抗腫瘤作用，為研究青藤堿抗腫瘤機(jī)制提供了新的思路。由于青藤堿是一種中草藥，來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉、毒副作用少，因此具有良好的開發(fā)前景[32]。但本研究只進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)而未進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，青藤堿除了抑制胰腺癌Capa-1細(xì)胞外，是否抑制其他胰腺癌細(xì)胞系尚未明確，除了通過(guò)NF-κB信號(hào)通路抑制胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲外，是否還有其他通路，還需進(jìn)一步研究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。