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    泛素/ISG15結(jié)合酶E2L6在胰腺癌中的作用及其臨床價值分析

    2022-04-07 02:30:36劉濤周磊肖晶晶江建新
    中國普通外科雜志 2022年3期
    關(guān)鍵詞:泛素胰腺癌癌癥

    劉濤,周磊,肖晶晶,江建新

    (1.貴州醫(yī)科大學臨床醫(yī)學院,貴州貴陽550000;2.貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院肝膽外科,貴州貴陽550000;3.武漢大學人民醫(yī)院肝膽外科,湖北武漢430060)

    胰腺癌是全球癌癥相關(guān)性死亡的主要原因之一,排在美國患者癌癥相關(guān)性死亡的第3位[1],中國男性患者癌癥相關(guān)性死亡的第6位及女性患者的第7位[2],且總體病死率仍呈上升趨勢,5年總體生存率亦只有10%[3]。其病情隱匿,早期不容易發(fā)現(xiàn),約80%以上的患者診斷時可能已達癌癥進展期或并發(fā)遠處轉(zhuǎn)移[4]。胰腺癌具有高度遷移性和侵襲性的特征[5],腫瘤異質(zhì)性明顯,目前群體研究證據(jù)提供的治療方案對改善其預后的效果有限[6],是造成胰腺癌容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移及預后很差的主要因素[4,7]。研究[8-9]表明,癌基因的突變及分子調(diào)控關(guān)系等的改變會影響胰腺癌的惡性生物學特征,而抑制突變癌基因靶點的分子靶向治療策略可能使患者獲益。例如,近期的一項前瞻性III期臨床試驗[10]顯示,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)抑制劑奧拉帕利可以使乳腺癌易感基因(BRCA)突變的轉(zhuǎn)移性胰腺癌患者的無進展生存期得到改善(7.4個月vs.3.8個月)。這一令人鼓舞的結(jié)果同時也凸顯了闡明胰腺癌的分子調(diào)控機制和尋找新的更有效的疾病治療靶點的重要性。

    泛素/ISG15結(jié)合酶E2L6(ubiquitin/ISG15-conjugating enzyme E2 L6,UBE2L6)是編碼E2泛素結(jié)合酶家族的成員,也是翻譯后蛋白修飾的關(guān)鍵酶,有證據(jù)顯示其可以促進干擾素刺激基因15(ISG15)與底物蛋白的共價連接,在白血病細胞分化過程中發(fā)揮重要作用[11]。研究[12]顯示,UBE2L6可能通過泛素化途徑介導了三氧化二砷/全反式視黃酸對C-myc的抑制作用,進而抑制了FLT3-ITD突變引起的急性髓系白血病的進展。另有研究[13]表明,UBE2L6可通過調(diào)控ATP結(jié)合盒亞家族B成員6(ABCB6)參與腫瘤細胞的順鉑耐藥。然而,其在包括胰腺癌在內(nèi)的大多數(shù)癌癥中的表達及生物學功能依然不清楚。筆者擬通過研究癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas Program,TCGA)和基因型-組織表達研究項目(The Genotype-Tissue Expression,GTEx)的相關(guān)數(shù)據(jù)及臨床資料,分析UBE2L6在泛癌及胰腺癌中的表達情況,探究其與胰腺癌的臨床病理相關(guān)性及診斷預后價值,研究其對胰腺癌細胞增殖、遷移侵襲能力的影響,并討論其可能的分子機制。

    1 材料與方法

    1.1 生物信息學工具分析UBE2L6在泛癌及胰腺癌中的表達

    從UCSC Xena(https://xenabrowser.net/datapages)下載泛癌數(shù)據(jù),將經(jīng)過Toil流程統(tǒng)一處理的TCGA和GTEx的TPM格式的RNA-seq數(shù)據(jù)進行Log2轉(zhuǎn)換,用R(4.0.2)軟件的“l(fā)imma”包分析UBE2L6在泛癌中的差異表達,“ggplot2”包可視化其差異表達。進一步在GEO數(shù)據(jù)集(Gene Expression Omnibus DataSets,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)下載GPL570文件,及GSE15471(包含39例胰腺癌組織及相應的癌旁組織)和GSE16515(包含36例胰腺癌組織和16例癌旁組織)數(shù)據(jù)集,利用perl軟件將探針名轉(zhuǎn)換為基因名后,選取UBE2L6的表達數(shù)據(jù)用GraphPad Prism 8繪制散點圖。

    1.2 細胞培養(yǎng)及siRNA轉(zhuǎn)染

    所有胰腺癌細胞株BxPC-3、PANC-1、AsPC-1、SW1990、MIA PaCa-2及正常胰腺導管上皮細胞HPDE均購自美國ATCC細胞庫。PANC-1、MIA PaCa-2、SW1990和HPDE、BxPC-3、AsPC-1細胞分別用含10%胎牛血清(Gbico,美國)的DMEM(Gbico,美國)和RPMI 1640(Gbico,美國)培養(yǎng)基置于37℃的5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。采用Lipofectamine 2000(Invitrogen,美國)將UBE2L6的siRNA(Ribobio,中國)及陰性對照(negative control,NC)轉(zhuǎn)染入PANC-1和AsPC-1細胞內(nèi),48 h后進行實時熒光定量PCR檢測或細胞功能實驗。

    1.3 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)

    用RNA-easy Isolation Reagent試劑盒(Vazyme,中國)提取總RNA,并用分光光度計測定產(chǎn)物純度及濃度。然后用HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit(+gDNA wiper)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Vazyme,中國)和ChamQTMUniversal SYBR?qPCR Master Mix試劑盒(Vazyme,中國)進行qPCR檢測,具體操作詳見說明書。本研究設計引物序列如下:UBE2L6 F:5'-TGG ACG AGA ACG GAC AGA TTT-3',R:5'-GGC TCC CTG ATA TTC GGT CTA TT-3';內(nèi)參基因GAPDH F:5'-AGG TCG GTG TGA ACGGATTTG-3',R:5'-GGGGTCGTTGATGGCAAC A-3'。所有引物由上海生工生物股份有限公司合成。

    1.4 CCK-8細胞增殖實驗

    用CCK-8試劑盒(Bosterbio,中國)檢測胰腺癌細胞的增殖能力。PANC-1和AsPC-1細胞轉(zhuǎn)染入siRNA 48 h后以2×103/孔接種于96孔板中,在37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6、24、48、72、96 h后棄除原培養(yǎng)基,每孔加入CCK-8稀釋液(CCK-8:培養(yǎng)基=1∶10)110μL,置于培養(yǎng)箱孵育2 h后測定450 nm波長下的吸光度。

    1.5 克隆形成實驗

    將siRNA轉(zhuǎn)染入PANC-1及AsPC-1細胞48 h后,消化重懸細胞并按800/孔接種于6孔板中,加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基2 mL,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~14 d,磷酸鹽緩沖液漂洗后以4%多聚甲醛室溫下固定30 min,然后以0.1%結(jié)晶紫染色30 min后在顯微鏡下拍照。

    1.6 Transwell遷移及侵襲實驗

    PANC-1及AsPC-1細胞轉(zhuǎn)染入siRNA 48 h后,細胞消化重懸并以無血清培養(yǎng)基200μL稀釋后按5×104/孔接種于Transwell上室中(侵襲實驗預先在上室加入Matrigel膠60μL,Matrigel:無血清培養(yǎng)基=1∶8),下室加入600μL含20%胎牛血清的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16~24 h,磷酸鹽緩沖液漂洗后以4%多聚甲醛室溫下固定30 min,然后以0.1%結(jié)晶紫染色30 min后在顯微鏡下拍照。

    1.7 分子相關(guān)性分析、蛋白相互作用及基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)

    分子相關(guān)性分析:將TCGA數(shù)據(jù)庫中UBE2L6的表達按中位數(shù)分為高表達組和低表達組,Spearman相關(guān)性分析尋找高風險組中相關(guān)性最大的基因,并用R(4.0.2)軟件的“ggplot2”包進行可視化。蛋白互作分析:利用string數(shù)據(jù)庫(https://www.string-db.org/)構(gòu)建UBE2L6的蛋白相互作用網(wǎng)絡圖。GSEA富集分析:根據(jù)TCGA數(shù)據(jù)庫中UBE2L6的mRNA表達中位數(shù),將其分為高表達組和低表達組,使用GSEA 3.0軟件中的KEGG基因集GeneSetsDebates:C2.CP.KEGG.V6.2.Symbols.gmt(Curated)進行GSEA富集分析,設定循環(huán)次數(shù)為1 000次。以錯誤發(fā)現(xiàn)率(false discovery rate,F(xiàn)DR)<0.25,P<0.05為顯著富集的基因集合,進一步篩選與UBE2L6密切相關(guān)的基因集用“ggplot2”進行多基因富集分析及可視化。

    1.8 UBE2L6表達水平與胰腺癌患者的臨床病理相關(guān)性分析

    從TCGA數(shù)據(jù)庫(https://portal.gdc.cancer.gov)下載胰腺癌的轉(zhuǎn)錄組、基因表達量、HTSeq-FPKM及臨床數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)集截止到2021年4月20日。胰腺癌臨床數(shù)據(jù)納入標準:⑴病理確診為胰腺腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAAD);⑵臨床相關(guān)資料完整。除去部分信息缺失的個體,將168例胰腺癌納入本研究。根據(jù)UBE2L6的表達平均值分為高表達組和低表達組,用SPSS 26.0軟件分析其與臨床病理的相關(guān)性。用R(4.0.2)軟件的“Survival”包對患者的年齡、性別、分級、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、UBE2L6表達水平等指標進行單因素和多因素Cox回歸分析,探討其對胰腺癌預后的影響。同時,提取TCGA(胰腺癌)和GTEx(正常組織)的RNA-seq數(shù)據(jù)(需要Log2轉(zhuǎn)換),用R(4.0.2)軟件的“pROC”包繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve,ROC),分析UBE2L6對胰腺癌的潛在診斷價值。利用基因表達譜交互式分析數(shù)據(jù)庫(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)(http://gepia.cancer-pku.cn)的Kaplan-Meier生存分析評估UBE2L6對胰腺癌的預后價值。

    1.9 統(tǒng)計學處理

    采用SPSS 26.0軟件進行統(tǒng)計學分析,用GraphPad Prism 8繪制統(tǒng)計圖。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,兩組間比較采用獨立樣本t檢驗;不符合正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)(四分位間距)[M(IQR)]表示,組間比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗;計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法;采用重復測量方差分析比較組內(nèi)及組間不同時間細胞增殖能力的差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 UBE2L6在泛癌中的表達

    分析來自TCGA及GTEx數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)UBE2L6在胰腺癌、膀胱尿路上皮癌、乳腺浸潤癌、宮頸鱗癌和腺癌、膽管癌、結(jié)腸癌、彌漫性大B細胞淋巴瘤、食管癌、多形成性膠質(zhì)細胞瘤、頭頸鱗狀細胞癌、腎嫌色細胞癌、腎透明細胞癌、腎乳頭狀細胞癌、急性髓細胞樣白血病、腦低級別膠質(zhì)瘤、肝細胞肝癌、卵巢漿液性囊腺癌、前列腺癌、直腸腺癌、皮膚黑色素瘤、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、胸腺癌等24種癌癥中表達增高(圖1)。

    圖1 UBE2L6在泛癌中的表達Figure1 Expressionsof UBE2L6 in pan-cancer

    2.2 UBE2L6在胰腺癌組織及細胞系中的表達

    為了探討UBE2L6在胰腺癌組織中的表達情況,分析其在GEO數(shù)據(jù)集中的表達,發(fā)現(xiàn)UBE2L6在胰腺癌組織中的表達水平相較于癌旁組織顯著增高(GSE15471:t=6.549,P<0.001,GSE16515:t=4.502,P<0.001)(圖2A-B)。同時,qRT-PCR檢測顯示,相比于正常胰腺上皮細胞HPDE,UBE2L6在胰腺癌細胞系BxPC-3(t=33.82,P<0.000 1)、PANC-1(t=7.36,P=0.001 8)、AsPC-1(t=9.61,P=0.000 7)、SW1990(t=10.26,P=0.000 5)及MIA PaCa-2(t=12.65,P=0.000 2)中表達均升高(圖2C)。

    圖2 UBE2L6在胰腺癌組織及細胞系中的表達A:UBE2L6在GSE15471中的表達水平;B:UBE2L6在GSE16515中的表達水平;C:胰腺癌細胞中UBE2L6的相對mRNA表達Figure 2 Expressions of UBE2L6 in pancreatic cancer tissues and cell lines A:Expression of UBE2L6 in GSE15471;B:Expression of UBE2L6 in GSE16515;C:RelativemRNA expression of UBE2L6 in pancreatic cancer cell lines

    2.3 UBE2L6促進胰腺癌的增殖、遷移及侵襲

    為探討UBE2L6對胰腺癌增殖、遷移及侵襲等生物學功能的影響,設計了針對UBE2L6靶序列的siRNA(GCT GGT GAA TAG ACC GAA T)。qRT-PCR檢測提示,在PANC-1及AsPC-1細胞中轉(zhuǎn)染UBE2L6的siRNA能明顯下調(diào)其表達水平(t=39.18,P<0.000 1;t=47.87,P<0.000 1)(圖3A)。隨后,將siRNA轉(zhuǎn)染入PANC-1及AsPC-1細胞行CCK-8、克隆平板及Transwell實驗。結(jié)果顯示,同NC組比較,si-UBE2L6組的細胞增殖能力(均P<0.05)及克隆形成能力均明顯下降(t=9.169,P=0.000 786;t=7.547,P=0.001 652)(圖3B-C),細胞遷移能力(t=6.510,P=0.002 874;t=7.562,P=0.001 639)及侵襲能力(t=9.999,P=0.000 562;t=9.651,P=0.000 645)亦明顯下降(圖3D-E)。

    圖3 UBE2L6對胰腺癌細胞PANC-1和AsPC-1的增殖、遷移及侵襲的影響A:在UBE2L6敲低的PANC-1和AsPC-1細胞中UBE2L6的相對mRNA表達水平;B:CCK-8檢測PANC-1和AsPC-1細胞的增殖;C:克隆平板實驗檢測PANC-1和AsPC-1細胞的克隆形成;D:Transwell遷移實驗檢測PANC-1和AsPC-1細胞的遷移;E:Transwell侵襲實驗檢測PANC-1和AsPC-1細胞的侵襲Figure 3 Influences of UBE2L6 on proliferation,migration,and invasion of pancreatic cancer PANC-1 and AsPC-1 cells A:Relative mRNA expression of UBE2L6 in UBE2L6-knockdown PANC-1 and AsPC-1 cells;B:The proliferation of PANC-1 and AsPC-1 cells detected by CCK-8 assay;C:The colony-forming capacity of PANC-1 and AsPC-1 cells detected by colony formation assay;D:The migration of PANC-1 and AsPC-1 cells detected by Transwell migration assay;E:Theinvasion of PANC-1 and AsPC-1 cellsdetected by Transwell invasion assay

    2.4 UBE2L6的分子相關(guān)性、蛋白相互作用及GSEA富集分析

    為進一步探討UBE2L6的分子機制,Spearman相關(guān)性分析提示,B細胞淋巴瘤2相關(guān)蛋白A1(BCL2A1)與UBE2L6的相關(guān)性最大(r=0.442)(圖4A)。蛋白相互作用分析顯示,排名前10位的關(guān)鍵蛋白分別為HERC6、RPS27A、HERC5、UBA52、ISG15、UBA7、DDX58、UBC、UBB、ARIH1(圖4B)。同時,GSEA富集分析提示,UBE2L6與腫瘤及免疫微環(huán)境等通路密切相關(guān),ggplot2可視化展現(xiàn)10個[antigen processing and presentation,標準化富集分數(shù)(normalized enrichment score,NES)=2.201;apoptosis,NES=2.153;B cell receptor signaling pathway,NES=2.049;Chemokine signaling pathway,NES=2.216;cytokinecytokine receptor interaction,NES=2.223;MAPK signaling pathway,NES=2.108;natural killer cell mediated cytotoxicity,NES=2.207;pancreatic cancer,NES=2.056;pathways in cancer,NES=2.059;T cell receptor signaling pathway,NES=2.072]與癌癥及腫瘤免疫微環(huán)境相關(guān)且NES≥2.0、FDR<0.001的數(shù)據(jù)集(圖4C)。

    圖4 UBE2L6的分子相關(guān)性、蛋白相互作用及多基因GSEA富集分析A:UBE2L6分子相關(guān)性熱圖;B:UBE2L6的蛋白相互作用網(wǎng)絡圖;C:UBE2L6的多基因GSEA富集分析Figure4 Molecular correlation heatmap,protein interaction,and multi-genesetsenrichmentanalysisof UBE2L6 A:Molecular correlation heatmap of UBE2L6;B:Protein interaction network of UBE2L6;C:Multi-gene sets enrichment analysis of UBE2L6

    2.5 UBE2L6表達水平與胰腺癌患者的臨床病理相關(guān)性及預后分析

    臨床病理相關(guān)性分析結(jié)果顯示,UBE2L6的高表達與胰腺癌組織病理學分級相關(guān)(χ2=6.966,P=0.031)(表1)。單因素Cox回歸分析表明,患者年齡、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及UBE2L6的表達水平與胰腺癌患者的預后相關(guān)(P<0.05);但是,多因素Cox回歸分析提示年齡及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胰腺癌患者的獨立危險因素(P<0.05),UBE2L6不是其獨立預后因素(P>0.05)(表2)。進一步利用TCGA數(shù)據(jù)庫的胰腺癌數(shù)據(jù)進行GSEA富集分析,顯示UBE2L6與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)(NES=2.056,F(xiàn)DR=0.000)(圖5A)。同時,ROC曲線分析提示UBE2L6對胰腺癌具有較高的臨床診斷價值(AUC=0.970,95%CI=0.950~0.989)(圖5B),來自GEPIA數(shù)據(jù)庫的生存曲線分析亦提示UBE2L6的表達水平與胰腺癌患者的預后相關(guān)(P<0.05)(圖5C)。

    圖5 UBE2L6與胰腺癌的關(guān)系A(chǔ):UBE2L6富集于胰腺癌通路;B:UBE2L6的ROC曲線;C:UBE2L6的生存曲線Figure 5 Relationship between UBE2L6 and pancreatic cancer A:Enrichment of UBE2L6 in pancreatic cancer signaling pathway;B:ROCcurve of UBE2L6;C:Kaplan-Meier survival curve of UBE2L6

    表1 UBE2L6表達水平與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]Table 1 Relationship between theexpression of UBE2L6 and theclinicopathologic characteristics of pancreatic cancer[n(%)]

    表2 單因素及多因素Cox回歸分析Table 2 Univariateand multivariate Cox regression analysis

    3 討論

    根據(jù)國際癌癥研究中心的數(shù)據(jù)[14],2020年全球發(fā)生了1 930萬新癌癥病例和近1 000萬的癌癥死亡病例。預計2040年全球癌癥負擔將達到2 840萬例,比2020年增加47%。癌癥的異質(zhì)性是其診療困難的難點所在,泛癌的研究可以探討不同腫瘤間的差異及相似性,對腫瘤的分子機制、預后評價及個體化臨床診療有指導意義[15-16]。為探索UBE2L6在泛癌中的表達情況,本研究分析了TCGA及GTEx數(shù)據(jù)庫中33種腫瘤組織及正常組織的RNAseq數(shù)據(jù),首次發(fā)現(xiàn)UBE2L6在胰腺癌等24種癌癥中表達增高,提示其可能是一個重要的癌癥基因,為后續(xù)揭示其在腫瘤中的作用提供了研究基礎(chǔ)。

    UBE2L6作為一種翻譯后修飾的關(guān)鍵酶參與了蛋白質(zhì)的泛素化修飾[17],在腫瘤細胞凋亡等病理生理過程中發(fā)揮作用[18]。Murakami等[13]的研究提示,UBE2L6在順鉑耐藥的腫瘤細胞系中表達上調(diào),本研究結(jié)果也顯示,UBE2L6在結(jié)直腸癌、乳腺癌、腎細胞癌、腦膠質(zhì)瘤等組織或細胞系中表達上調(diào),表明UBE2L6可能在這些腫瘤中扮演著促癌基因的角色。然而,Liang等[12]的研究卻發(fā)現(xiàn)UBE2L6在FLT3-ITD突變的急性髓系白血病中可能起抑癌作用,這提示UBE2L6具有組織特異度表達的特征,在不同類型的腫瘤中可能發(fā)揮不同的生物學功能。GEO數(shù)據(jù)庫存儲了大量高通量測序數(shù)據(jù),可信度高,挖掘及分析整理這些數(shù)據(jù)可以為各種疾病的研究提供重要線索[19-20]。并且,多維度數(shù)據(jù)挖掘及分析驗證也有利于排除樣本選擇偏倚,增加數(shù)據(jù)可信度[21],而恰當?shù)膶嶒烌炞C又可以更確切地佐證研究結(jié)果[22-23]。本研究利用多個在線數(shù)據(jù)集分析發(fā)現(xiàn)UBE2L6在胰腺癌組織中高表達,并通過qRT-PCR實驗驗證其在胰腺癌細胞系中亦呈現(xiàn)高表達。為進一步了解UBE2L6在胰腺癌中的生物學功能,筆者構(gòu)建靶向UBE2L6的siRNA進行細胞功能學實驗,結(jié)果顯示,UBE2L6在體外促進了胰腺癌細胞的增殖、遷移及侵襲能力,首次揭示了UBE2L6在胰腺癌中的促癌作用,并具有成為胰腺癌治療靶點的潛力,為后續(xù)的分子生物學實驗研究奠定了基礎(chǔ)。

    目前,生物信息學技術(shù)已廣泛應用于生物醫(yī)學領(lǐng)域,為分子生物學機制研究提供了新的見解[24-25]。本研究利用R語言等生物信息學技術(shù)探討了UBE2L6可能潛在的分子調(diào)控機制,發(fā)現(xiàn)其與BCL2A1的相關(guān)性最大,而BCL2A1是重要的細胞死亡調(diào)節(jié)劑和核因子κB(NF-κB)的靶基因,在多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤和實體癌癥中過度表達對抗凋亡[26-27],并有助于部分腫瘤的化療耐藥而促進腫瘤進展[28]。研究[12,17]表明,UBE2L6可以通過泛素化途徑降解并抑制C-myc的表達,也可以與塞內(nèi)卡病毒A的3D聚合酶相互作用并泛素化RNA依賴性RNA聚合酶。本研究中UBE2L6相互作用蛋白分析亦提示,UBE2L6可能與HERC6等與泛素相關(guān)的蛋白存在相互作用[29],進而通過蛋白質(zhì)降解、細胞周期調(diào)節(jié)等途徑對腫瘤的發(fā)展產(chǎn)生影響[30]。進一步的GSEA富集分析顯示UBE2L6主要富集在MAPK通路、自然殺傷細胞介導的細胞毒性、細胞因子受體、抗原加工與呈遞、B細胞及T細胞受體等信號通路,揭示其還可能通過調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境參與對腫瘤的調(diào)控[31-32]。

    為了探索,筆者通過GSEA富集分析發(fā)現(xiàn),UBE2L6在胰腺癌中顯著富集(FDR<0.05),說明UBE2L6參與胰腺癌的病理生理過程,有一定的臨床研究價值。另外,ROC曲線分析顯示UBE2L6的AUC>0.9,提示其在胰腺癌中具有較高的診斷效能,而Kaplan-Meier生存分析也發(fā)現(xiàn)其表達水平與胰腺癌的不良預后緊密相關(guān)(P<0.05),預示著UBE2L6表達量高的患者的中位生存時間可能更短。UBE2L6與胰腺癌的臨床病理相關(guān)性分析進一步提示,雖然UBE2L6的表達水平與患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM臨床分期等無關(guān)(P>0.05),但卻與胰腺癌的組織病理學分級顯著相關(guān)(P<0.05),意味著有血管浸潤等組織病理學分級晚的胰腺癌患者其UBE2L6的表達水平也更高。并且,后續(xù)的單因素Cox回歸分析亦發(fā)現(xiàn)UBE2L6的低表達可以改善胰腺癌患者的預后,這些結(jié)果都表明UBE2L6在胰腺癌的進展中可能扮演著癌基因的角色,開發(fā)靶向抑制UBE2L6表達的藥物可能具有治療胰腺癌的潛力。遺憾的是,受到TCGA數(shù)據(jù)庫樣本量的限制,本研究的多因素Cox回歸分析顯示UBE2L6不是胰腺癌的獨立預后因素,這可能與本次納入的樣本量較少有關(guān),有待進一步的大數(shù)據(jù)庫整合研究證實。

    綜上,本研究確定了UBE2L6在泛癌中普遍高表達,其高表達與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,并與其診斷及預后顯著相關(guān)。同時,UBE2L6可促進胰腺癌細胞的增殖、遷移及侵襲,其分子機制可能與細胞凋亡、泛素化修飾、MAPK信號通路以及對腫瘤免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)等有關(guān)。未來,需要收集更多的臨床數(shù)據(jù)并增加生物學實驗進一步探索UBE2L6在胰腺癌中的功能及分子機制。

    利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。

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