雞源8a 型腺病毒感染的診斷

吳通奎 包濤濤＊ 黃智明 莫興虎

（1.黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心 貴州凱里 556000；2.鎮(zhèn)遠縣動物疫病預(yù)防控制中心 貴州鎮(zhèn)遠 557700）

禽腺病毒（Fowl adenovivus，F(xiàn)AdV）是禽的一種無囊膜雙鏈DNA 病毒，通常分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3 種亞群， 其中Ⅰ亞群和Ⅱ亞群與火雞的出血性腸炎及雞的相關(guān)病毒病關(guān)系較為密切， 而Ⅲ亞群則主要與禽的產(chǎn)蛋下降相關(guān)。 Ⅰ亞群包含5 個基因型（A、B、C、D、E），5 個基因型涵蓋 12 種血清型，如 A 型中血清1 型，B 型中血清 5 型，C 型中血清 4 型和 10 型，D型中血清 2、3、9 及 11 型，E 型中血清 6、7、8a 及 8b型[1]。

目前在我國主要流行C、D、E 3 種基因型，以其中的血清 4 型、8a 型、8b 型及 11 型更為常見， 主要感染肉雞、肉鴨及蛋雞[2]。 2015 年在我國山東、湖北及河南等多地發(fā)生以心包積液及肝炎為典型病變的禽類疾病，經(jīng)診斷為禽腺病毒感染，對養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失[3]。2021 年9 月，貴州黔東南某養(yǎng)雞場90 日齡雞出現(xiàn)發(fā)病及異常死亡，本文對該例臨床疑似腺病毒感染的患雞開展臨床癥狀觀察、 病理剖檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)及病原學(xué)檢測，旨在為雞腺病毒感染的診斷提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 發(fā)病情況 2021 年9 月，貴州黔東南某林下養(yǎng)雞場90 日齡雞發(fā)病。 經(jīng)調(diào)查，該養(yǎng)殖場前期已按場內(nèi)免疫程序?qū)θ珗鲭u群做過禽流感H7、禽流感H9、雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性法氏囊病等疫苗免疫。 飼養(yǎng)接近90 日齡時，場內(nèi)個別雞群開始出現(xiàn)精神沉郁，頸部無力而導(dǎo)致頭部自然下垂，站立不穩(wěn)，排白色稀糞，發(fā)病率約70%，病死率約65%。應(yīng)養(yǎng)殖場主需求，對該養(yǎng)殖場患雞進行檢測分析。

1.2 病料來源 病料采自貴州黔東南地區(qū)某養(yǎng)雞場具有典型癥狀的90 日齡患雞。

1.3 主要試劑 DNA/RNA 提取試劑盒， 購自北京天根生化科技有限公司；2×Taq PCR Master Mix 及DL2000 DNA Marker，購自莫納生物；AIV 通用型及NDV 實時熒光定量RT-PCR 檢測試劑盒，購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司； 其它試驗試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.4 臨床癥狀觀察及病理剖檢 觀察患雞的典型臨床癥狀，同時對患雞進行病理剖檢，記錄患雞的臨床癥狀及病理變化情況。

1.5 細(xì)菌分離培養(yǎng) 無菌采集患雞心（含心包液）、肝、脾、肺及腦等組織，劃線接種于鮮血及普通瓊脂培養(yǎng)基，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24~48 h，觀察是否有細(xì)菌生長。

1.6 病原學(xué)檢測 采集患雞的腦、氣管、心（含心包液）、肺、肝及脾等組織，使用DNA/RNA 提取試劑盒提取病變組織中的DNA/RNA，置于-20 ℃冰柜中保存，備用。

分別對提取的核酸樣本開展雞的疑似疾病病原檢測。 首先參照試劑盒說明開展禽流感病毒（AIV）及新城疫病毒（NDV）實時熒光定量RT-PCR 檢測；然后參考文獻分別開展禽腺病毒4 型（FAdV-4）、禽腺病毒 8a 型（FAdV-8a）、禽腺病毒 8b 型（FAdV-8b） 及禽腺病毒 11 型 （FAdV-11）PCR 檢測， 所得PCR 產(chǎn)物于1.5%瓊脂糖凝膠進行電泳分析，將試驗所檢出的陽性條帶送測序公司測序驗證。

2 結(jié) 果

2.1 臨床癥狀及病理剖檢 患雞臨床主要表現(xiàn)為精神沉郁、站立不穩(wěn)、頭部無力自然下垂及排白色稀糞；病理剖檢可見患雞心包積液明顯，肝臟變性、質(zhì)脆，肺部少量出血。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果顯示，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24~48 h 的鮮血及普通瓊脂培養(yǎng)基上均未見細(xì)菌生長。

2.3 病原核酸檢測 分別開展雞的疑似疾病病原的核酸檢測， 結(jié)果顯示，AIV、NDV、FAdV-4、FAdV-8b 及 FAdV-11 檢測結(jié)果均為陰性， 僅能檢出FAdV-8a 陽性（見圖1），經(jīng)測序公司測 序分析，所得陽性片段與預(yù)擴增片段大小一致， 且與NCBI 上載錄的FAdV-8a 序列同源性高達98%以上。

圖1 FAdV-8a 擴增結(jié)果

3 討 論

我國是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國， 畜禽養(yǎng)殖業(yè)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)具有十分重要的作用， 但不可忽視的是， 近年來，隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，禽類的疾病也開始不斷增加。 其中FAdV 感染便是一種近幾年在我國養(yǎng)禽業(yè)中一直困擾著養(yǎng)殖戶的禽類疾病， 該病呈典型世界性分布，但自2015 年以來，關(guān)于該病在禽類養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中發(fā)生的報道屢見不鮮， 不同日齡的禽類均可發(fā)病，對我國養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。

本文從一例患雞上檢出FAdV-8a 病原核酸，這就意味著在當(dāng)?shù)匾汛嬖贔AdV 感染， 對當(dāng)?shù)仞B(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展也帶來了新的挑戰(zhàn)。 鑒于FAdV 血清型的多樣性及不同血清型致病力存在的差異， 當(dāng)前市面上尚無效果特別顯著的商品化疫苗。 因此， 為了有效避免該病的發(fā)生而帶來的經(jīng)濟損失， 在日常禽類疾病防控中，一方面必須加強飼養(yǎng)管理，做好環(huán)境衛(wèi)生消毒工作；另一方面實施動態(tài)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)該病要早日送樣確診，以便制定有效的防控策略。