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    T細胞亞群、炎癥指標(biāo)及fetuin-A與慢性丙型肝炎的相關(guān)性

    2022-04-01 01:10:42周偉石磊
    海南醫(yī)學(xué) 2022年6期
    關(guān)鍵詞:載量亞群機體

    周偉,石磊

    上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院檢驗科,上海 200120

    慢性丙型病毒性肝炎(chronic hepatitis C,CHC)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)病毒感染引起的慢性傳染性疾病[1],可導(dǎo)致肝臟出現(xiàn)慢性炎癥壞死、肝纖維化,部分患者可發(fā)展為肝硬化、肝癌等,對患者的生命安全造成嚴重威脅。CHC的發(fā)病機制目前尚未明確,但眾多研究表明,T細胞免疫異常、炎癥反應(yīng)、血糖代謝異??赡苁钦T發(fā)CHC發(fā)生、發(fā)展的影響因素[2-3],參與了CHC引起肝組織損傷、肝纖維化的過程。HCV RNA載量反映了HCV病毒復(fù)制的活躍程度和病情變化,是CHC 診斷和抗病毒治療的重要參考指標(biāo)[4]。本研究對我院近年來收治的CHC 患者HCV-RNA 病毒載量與T 細胞亞群、炎癥指標(biāo)、fetuin-A 水平的相關(guān)性進行分析,旨在為進一步探討CHC的病理機制及臨床診治提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 回顧性分析2019 年8 月至2020年10 月上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院收治的140 例CHC 患者的臨床資料,其中男性 61 例,女性 79 例;年齡24~71 歲,平均(48.28±5.11)歲。納入標(biāo)準:(1)均符合《丙型肝炎防治指南(2019 年版)》[5]的診斷標(biāo)準;(2)病歷資料完整齊全。排除標(biāo)準:(1)合并其他病毒性肝炎、酒精性肝病、肝硬化等肝臟疾病;(2)惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病、代謝性疾病和嚴重基礎(chǔ)疾??;(3)檢查前6個月有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)藥物治療史;(4)病歷資料不全者。所有患者按照HCV RNA載量水平進行分組,其中 31 例 HCV RNA 載量<1.00×103copies/mL的患者歸為低載量組,67 例HCV RNA 載量在1.00×103~1.00×105copies/mL 的患者歸為中載量組,42 例HCV RNA 載量>1.00×105copies/mL 的患者為高載量組(42例)。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準。

    1.2 檢測方法

    1.2.1 HCV RNA 定量檢測 晨起采集所有患者的空腹靜脈血3 mL,以3 000 r/min的速度離心后取血清樣本在-70℃環(huán)境下保存待測。采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對血清中的HCV RNA 水平進行測定,檢測儀器為美國ABI 公司生產(chǎn)的Prism 7300熒光定量PCR儀,試劑盒購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司,所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

    1.2.2 T細胞亞群檢測 取EDTA 抗凝血100 μL加入流式細胞專用試管底部,加入5 μL四色熒光抗體(購自美國Beckman-Coulter公司),混合均勻后在室溫避光環(huán)境下孵育20 min,加入250 μL 紅細胞溶解液,充分溶血裂解紅細胞20 min 后以1 200 r/min 的速度離心5 min,去除上清液,PBS 緩沖液沖洗2次,最后采用500 μL PBS 緩沖液懸浮細胞,采用流式細胞儀FC500 檢測患者外周血的 CD3+、CD4+、CD8+水平,計算CD4+/CD8+值。

    1.2.3 炎癥指標(biāo)及fetuin-A水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測白細胞介素-2 (IL-2)、白細胞介素-6 (IL-6)、白細胞介素-10 (IL-10)、白細胞介素-32(IL-32)等炎癥指標(biāo)和人胎球蛋白A(fetuin-A)水平,炎癥指標(biāo)試劑盒均購自美國Genzyme公司,fetuin-A試劑盒購自上海西唐生物公司,檢測儀器采用日立7600全自動生化分析儀,所有檢測操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料均符合正態(tài)分布,以均數(shù)±標(biāo)準差()表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩兩間比較采用t 檢驗,采用Pearson 相關(guān)性分析法分析HCV-RNA病毒載量與T細胞亞群、炎癥指標(biāo)、fetuin-A水平的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同HCV-RNA 病毒載量CHC 患者的T 細胞亞群水平比較 不同HCV-RNA 病毒載量CHC 患者的CD3+水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);隨著HCV-RNA 病毒載量的不斷增大,CHC 患者的 CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低,CD8+水平明顯升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 不同HCV-RNA病毒CHC患者的T細胞亞群水平比較()

    表1 不同HCV-RNA病毒CHC患者的T細胞亞群水平比較()

    注:與低載量組比較,aP<0.05;與中載量組比較,bP<0.05。

    組別CD4+/CD8+例數(shù)CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)低載量組中載量組高載量組F值P值1.58±0.21 1.27±0.17a 1.06±0.11ab 88.73 0.000 1 31 67 42 77.23±9.04 76.18±8.71a 75.02±8.36ab 0.59 0.556 1 47.38±5.31 42.12±4.27a 38.33±3.84ab 37.71 0.000 1 30.23±4.42 33.71±4.82a 36.26±5.46ab 13.29 0.000 1

    2.2 不同HCV-RNA 病毒載量CHC 患者的炎癥指標(biāo)和fetuin-A 水平比較 隨著HCV-RNA 病毒載量的不斷增大,CHC 患者的IL-2 水平明顯降低,IL-6、IL-10、IL32 及fetuin-A 水平明顯升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 不同HCV-RNA病毒載量CHC患者的炎癥指標(biāo)和fetuin-A水平比較()

    表2 不同HCV-RNA病毒載量CHC患者的炎癥指標(biāo)和fetuin-A水平比較()

    注:與低載量組比較,aP<0.05;與中載量組比較,bP<0.05。

    組別低載量組中載量組高載量組F值P值IL-32(ng/L)145.74±42.15 237.49±61.17a 414.42±78.09ab 177.45 0.000 1例數(shù)31 67 42 IL-2(ng/L)55.38±9.31 48.82±7.12a 37.15±5.38ab 62.10 0.000 1 IL-6(ng/L)18.32±3.32 27.13±5.81a 47.91±9.28ab 202.19 0.000 1 IL-10(ng/L)156.24±31.29 223.49±45.27a 716.24±103.16ab 896.37 0.000 1 fetuin-A(g/L)5.43±1.26 7.58±1.41a 8.19±1.63ab 34.97 0.000 1

    2.3 HCV-RNA 載量與T 細胞亞群、炎癥指標(biāo)及fetuin-A 的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示,HCV-RNA 載量與T 細胞亞群明顯相關(guān),其中HCV-RNA 載量與 CD8+水平呈正相關(guān)(r=0.472,P=0.027),與 CD4+、CD4+/CD8+水平均呈負相關(guān)(r 值分別為-0.505、-0.529,P 值分別為0.019、0.017);HCV-RNA載量與炎癥指標(biāo)、fetuin-A 水平明顯相關(guān),其中HCV-RNA 與 IL-6、IL-10、IL-32 以及 fetuin-A 水平均呈正相關(guān)(r 值分別為 0.518、0.627、0.553,P 值分別為0.018、0.009、0.011),與 IL-2 水平呈負相關(guān)(r=-0.509,P=0.021)。

    3 討論

    CHC 具有隱匿性、慢性化和高漏診率等特點[6-7],患者在臨床上并無明顯特異性癥狀,處于急性發(fā)作期的患者也僅表現(xiàn)為全身乏力,多數(shù)CHC患者在確診時已延誤最佳治療時機。因此、早期診斷和治療有助于及早控制病情進展,對于減少肝硬化、肝細胞癌的發(fā)生具有重要意義[8]。

    CHC 除了與HCV 病毒復(fù)制、變異等因素有關(guān)以外,機體免疫反應(yīng)機制在其病情進展中也發(fā)揮重要作用[9]。機體免疫反應(yīng)機制的核心是細胞免疫功能,T淋巴細胞具有識別抗原、激活并產(chǎn)生調(diào)節(jié)因子和趨化因子的功能[10],其數(shù)量和各亞群比例能夠反映機體細胞免疫水平,對病情發(fā)展和轉(zhuǎn)歸具有重要意義。本研究結(jié)果顯示,隨著HCV-RNA病毒載量的不斷增大,CHC患者的CD4+、CD4+/CD8+水平顯著降低,CD8+水平顯著升高,HCV-RNA 載量與CD8+水平呈正相關(guān),與CD4+、CD4+/CD8+水平均呈負相關(guān)。CHC 患者 CD4+水平的降低使相關(guān)免疫細胞增殖分化能力明顯下降[11],CD8+水平升高代表機體免疫攻擊能力增強,CD4+/CD8+比值發(fā)生明顯變化,機體免疫平衡被打破,機體清除病毒能力明顯下降[12]。

    另外,HCV病毒還能夠?qū)C體固有的免疫應(yīng)答造成破壞,進而刺激單核巨噬細胞分泌IL-6、IL-10、IL-32等一系列炎癥因子[13],此類炎性因子可激活機體免疫細胞,引發(fā)細胞免疫和體液免疫,導(dǎo)致溶酶體、白介素等更多炎癥因子大量釋放,進而損傷肝細胞。機體肝臟的持續(xù)性損傷導(dǎo)致清除炎癥因子的能力下降,持續(xù)存在的炎癥因子損害肝臟,引發(fā)肝纖維化、肝硬化及肝癌的發(fā)生[14]。本研究結(jié)果顯示,隨著HCV-RNA病毒載量的不斷增大,CHC 患者的IL-2 水平明顯降低,IL-6、IL-10、IL-32 水平明顯升高。HCV-RNA 載量與IL-6、IL-10、IL-32水平均呈正相關(guān),與IL-2水平呈負相關(guān)。說明IL-2、IL-6、IL-10、IL-32 等炎癥指標(biāo)與CHC病情程度密切相關(guān)。

    肝臟在機體血糖代謝中發(fā)揮重要作用,CHC的發(fā)生可影響機體胰島素的分泌,產(chǎn)生胰島素抵抗,進而引發(fā)肝源性糖尿病的發(fā)生[15]。fetuin-A 是胰島素受體的天然抑制因子,能夠與胰島素受體的亞基結(jié)合,結(jié)合后可抑制胰島素受體的自身磷酸化,使胰島素信號通路中多種因子的表達受到抑制,進而使機體胰島素抵抗得到顯著增強,實現(xiàn)對機體糖脂代謝的調(diào)控[16]。本研究結(jié)果顯示,隨著HCV-RNA 病毒載量的不斷增大,CHC 患者的 fetuin-A 水平明顯升高,HCV-RNA 載量與fetuin-A 水平均呈正相關(guān)。上述結(jié)果提示,CHC患者的血糖代謝存在異常,胰島素抵抗明顯,其嚴重程度與CHC患者的病情程度密切相關(guān)。檢測fetuin-A水平對于臨床評價CHC患者病情、預(yù)測胰島素抵抗發(fā)生都具有重要意義。

    綜上所述,HCV感染后,CHC患者的T細胞亞群、炎癥指標(biāo)和fetuin-A 水平均出現(xiàn)異常變化,其變化與CHC患者的病情程度密切相關(guān),檢測上述指標(biāo)有助于了解CHC 的發(fā)病機制和慢性化過程,對于其臨床診治、療效評價和預(yù)后轉(zhuǎn)歸都具有重要意義。

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