蔬菜中農(nóng)藥殘留酶抑制法快速檢測(cè)與氣相色譜法的比較研究

張艷艷

摘 要：采用酶抑制法快速檢測(cè)與氣相色譜法分別對(duì)購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的40批次蔬菜樣品進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)比快速檢測(cè)方法與傳統(tǒng)儀器方法的檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)驗(yàn)證快速檢測(cè)方法。結(jié)果表明，蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法與氣相色譜檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果基本相符，可用于基層食品質(zhì)量監(jiān)管部門監(jiān)控蔬菜質(zhì)量的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，對(duì)超標(biāo)批次樣品應(yīng)委托有資質(zhì)的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)通過(guò)色譜、質(zhì)譜方法進(jìn)一步驗(yàn)證。

關(guān)鍵詞：快速檢測(cè);農(nóng)藥殘留;蔬菜;酶抑制法

Comparative Study on Pesticide Residues in Vegetables by Enzyme Inhibition Rapid Determination and Gas Chromatography

ZHANG Yanyan

（Fushan County General Inspection and Testing Center， Linfen 042600， China）

Abstract： 40 batches of vegetable samples purchased from farmers’ markets were detected by enzyme inhibition method and gas chromatography. The rapid detection method was evaluated and verified by comparing the detection results of rapid detection method and traditional instrument method. The results show that the rapid detection method of organophosphorus pesticide residues in vegetables is basically consistent with the detection results of gas chromatography， which can be used for the on-site rapid detection of vegetable quality monitored by the grass-roots food quality supervision department. For the samples of excessive batches， qualified inspection institutions should be entrusted to further verify them by chromatography and mass spectrometry.

Keywords： rapid detection; pesticide residue; vegetables; enzyme inhibition method

有機(jī)磷農(nóng)藥是蔬菜生產(chǎn)中防治病、蟲(chóng)、草害的一類重要農(nóng)藥，使用范圍廣泛，導(dǎo)致近年來(lái)蔬菜質(zhì)量抽檢中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留占比較高。因此，準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留成為有效控制蔬菜質(zhì)量、保障人們食菜安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。農(nóng)藥殘留量的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要有氣相色譜法與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，二者的準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)，但檢測(cè)周期較長(zhǎng)、成本較高，難以在基層食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)推廣普及，且蔬菜產(chǎn)品批次多、貨架期短，對(duì)檢測(cè)時(shí)效要求高。因此，基層食品監(jiān)管部門主要通過(guò)快速檢測(cè)法滿足日常監(jiān)管的需求[2]。本研究參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.199—2003中酶抑制率法對(duì)日常抽檢的8種蔬菜的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殘留進(jìn)行檢測(cè)，參照標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761—2008中第1部分方法二對(duì)8種蔬菜中的8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留組分進(jìn)行檢測(cè)，比較2種方法的檢測(cè)數(shù)據(jù)，利用靈敏度與準(zhǔn)確度較高的氣相色譜法評(píng)價(jià)驗(yàn)證快速檢測(cè)方法[3-4]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

胡蘿卜、冬瓜、豆角、茄子、西葫蘆、白菜、西紅柿和生菜均購(gòu)自某農(nóng)貿(mào)市場(chǎng);敵敵畏、對(duì)硫磷、辛硫磷、甲胺磷、樂(lè)果、氧化樂(lè)果、毒死蜱和乙酰甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，農(nóng)業(yè)部農(nóng)村環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所;乙腈、丙酮，色譜純;氯化鈉，分析純;農(nóng)藥殘留檢測(cè)試劑盒（1 250次/盒），含緩沖液、顯色劑、底物、酶試劑，廈門海葒興儀器股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TRACE 1300（配火焰光度檢測(cè)器，美國(guó)賽默飛世爾）;HHX-VD48NC農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀（廈門海葒興儀器股份有限公司）;JJ200 電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）;HY-4A 數(shù)顯調(diào)速多用振蕩器（杰瑞爾電器有限公司）;HSC-B水浴氮吹儀（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 快速檢測(cè)方法

（1）快檢試劑配制。緩沖液：將1袋緩沖液試劑倒入燒杯中，加入500 mL蒸餾水，溶解、混勻，室溫保存。底物：向標(biāo)有“底物”的試劑瓶中加入5.2 mL蒸餾水，溶解、混勻，0～5 ℃冰箱中冷藏貯存。顯色劑：已配成溶液，可直接使用，0～5 ℃冰箱中冷藏貯存。酶試劑：向標(biāo)有“酶試劑”的試劑瓶中加入5 mL蒸餾水溶解，2～4 ℃冰箱中冷藏保存。

（2）樣液制備。稱取2 g蔬菜樣品（葉菜剪成寬1 cm菜樣，塊根菜取1 cm表皮樣品，西紅柿取整體浸提）放入三角瓶中，加入10 mL緩沖液，置于振蕩器中振蕩提取2 min。若提取液顏色較淺，直接轉(zhuǎn)移至離心管中待測(cè);若提取液較混濁，可離心至上層澄清后取上清液轉(zhuǎn)移至離心管中待測(cè);若提取液色素干擾嚴(yán)重，可加入0.1～0.5 g活性炭振蕩5 min，再離心至澄清后轉(zhuǎn)移至離心管中待測(cè)。

（3）樣品測(cè)定。①將酶、顯色劑、底物等倒入V型槽中。②用移液器在測(cè)試微孔板孔條內(nèi)分別加入20 μL酶。③用移液器加入250 μL對(duì)照緩沖液或樣品待測(cè)液。④將微孔板放入儀器中啟動(dòng)振板10 s，使酶和樣品混勻，靜置10 min，待酶試劑與緩沖液或待測(cè)液反應(yīng)。⑤向微孔板加入10 μL顯色劑。⑥再向微孔板加入10 μL底物，立即放入儀器測(cè)量。⑦儀器開(kāi)機(jī)后以緩沖液為對(duì)照液，其他待測(cè)液依次測(cè)量。

（4）結(jié)果判定。試樣抑制率≥50%時(shí)為陽(yáng)性結(jié)果，試樣抑制率<50%時(shí)為陰性結(jié)果。

1.3.2 氣相色譜方法

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。用移液器分別吸取一定量的敵敵畏等8種有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，用丙酮逐一稀釋配制成10 μg/mL的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再根據(jù)各農(nóng)藥殘留組分的檢出限及最大殘留限量用丙酮逐級(jí)稀釋為8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)工作系列。

（2）試樣前處理。準(zhǔn)確稱取25.0 g切碎、混勻的蔬菜試樣于三角瓶中，加入50.0 mL乙腈，振蕩提取30 min，用濾紙過(guò)濾，加入6 g氯化鈉振搖1 min，待靜置分層后，準(zhǔn)確移取10.0 mL上層乙腈相，80 ℃下氮吹至近干，用丙酮溶解，并將備用液全部轉(zhuǎn)移至10.0 mL比色管中，定容至5.0 mL，混勻待測(cè)。

（3）氣相色譜條件。色譜柱：TG-17MS（30 m×0.53 mm，1.0 μm）;柱流量：10 mL/min;柱溫：150 ℃保持2 min，以8 ℃/min升至250 ℃保持20 min;進(jìn)樣口溫度：220 ℃;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣量：1 μL;檢測(cè)器FPD溫度：250 ℃;H2流量：75 mL/min;Air流量：100 mL/min;尾吹流量：10 mL/min。

（4）樣品測(cè)定。由自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取標(biāo)準(zhǔn)工作系列與試樣待測(cè)液注入色譜儀，以色譜峰保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)際樣品不同檢測(cè)方法的比較

按照1.3.1快速檢測(cè)方法和1.3.2氣相色譜方法分別對(duì)40批次蔬菜樣品（8種蔬菜各5批次）中農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。以氣相色譜檢測(cè)結(jié)果判定快檢方法檢測(cè)結(jié)果。對(duì)37批次快檢陰性樣品進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，有1批次樣品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，該快檢方法的假陰性率為2.7%。因此，經(jīng)快檢的蔬菜仍存在農(nóng)藥殘留漏檢隱患。原因可能是快檢方法的檢出限較高，樣品中的農(nóng)藥殘留含量低于快檢最低檢出量。對(duì)3批次快檢陽(yáng)性樣品進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，白菜（批次4）檢出毒死蜱0.21 mg/kg，生菜（批次3）檢出敵敵畏0.28 mg/kg和樂(lè)果0.41 mg/kg，茄子（批次3）樣品為未檢出有機(jī)磷農(nóng)藥，分析原因可能是茄子（批次3）中含有1.1中的8種有機(jī)磷農(nóng)藥以外的其他有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液不同檢測(cè)方法的比較

按照1.3.1快速檢測(cè)方法對(duì)不同含量的敵敵畏、對(duì)硫磷、辛硫磷、甲胺磷、樂(lè)果、氧化樂(lè)果、毒死蜱和乙酰甲胺磷8種單一標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。本研究中酶抑制快速檢測(cè)方法對(duì)8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的靈敏度依次為敵敵畏、毒死蜱、辛硫磷、氧化樂(lè)果、對(duì)硫磷、乙酰甲胺磷、甲胺磷和樂(lè)果。

2.3 不同檢測(cè)方法檢出限的比較

以表2中8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的最低檢出量為酶抑制快速檢測(cè)方法的檢出限，以3倍信噪比對(duì)應(yīng)的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留目標(biāo)物濃度計(jì)算氣相色譜方法的檢出限?？鞕z方法的檢出限分別為敵敵畏0.10 mg/kg、毒死蜱0.20 mg/kg、辛硫磷0.30 mg/kg、氧化樂(lè)果0.80 mg/kg、對(duì)硫磷1.00 mg/kg、乙酰甲胺磷1.15 mg/kg、甲胺磷2.00 mg/kg和樂(lè)果3.00 mg/kg;氣相色譜法的檢出限分別為敵敵畏0.01 mg/kg、毒死蜱0.02 mg/kg、辛硫磷0.30 mg/kg、氧化樂(lè)果0.02 mg/kg、對(duì)硫磷0.02 mg/kg、乙酰甲胺磷0.03 mg/kg、甲胺磷0.01 mg/kg和樂(lè)果0.02 mg/kg。因此，對(duì)硫磷、乙酰甲胺磷等4種農(nóng)藥殘留組分快檢方法的檢出限≥1.00 mg/kg，超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2021規(guī)定的蔬菜中農(nóng)藥殘留的最大殘留限量，這也是導(dǎo)致快檢中產(chǎn)生假陰性樣品的原因[5]。

3 結(jié)論

綜上所述，蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法基本與氣相色譜檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果相符，快檢方法使用成本低、檢測(cè)速度快，在基層食品質(zhì)量監(jiān)管部門監(jiān)控蔬菜質(zhì)量中可作為現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的首選方法。但快檢方法由于檢出限較高，蔬菜基質(zhì)復(fù)雜凈化不完全等會(huì)導(dǎo)致假陰性和假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，基層食品質(zhì)量監(jiān)管部門抽檢蔬菜時(shí)對(duì)超標(biāo)批次樣品應(yīng)委托有資質(zhì)的食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢驗(yàn)，省市級(jí)有檢驗(yàn)?zāi)芰Φ氖称繁O(jiān)管機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)蔬菜中易超標(biāo)農(nóng)藥殘留的重點(diǎn)檢測(cè)，國(guó)家層面需完善相關(guān)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，快檢產(chǎn)品的生產(chǎn)研發(fā)企業(yè)應(yīng)注重提升快檢試劑盒、儀器的靈敏度和準(zhǔn)確度，使快檢方法能在基層食品安全抽檢中發(fā)揮更大的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]劉姣，劉雪峰，樊寶娟，等.市售食品用農(nóng)藥殘留快檢試劑盒及儀器對(duì)18種中藥材適用性驗(yàn)證[J].中成藥，2017，39（2）：407-410.

[2]劉桂芳.蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)卡準(zhǔn)確性和靈敏性的驗(yàn)證研究[J].河北省科學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，33（1）：53-57.

[3]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定：NY/T 761—2008[S].北京：農(nóng)業(yè)出版社，2008.

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)：GB/T 5009.199—2003[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[5]國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量：GB 2763—2021[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2021.