澤瀉對(duì)MSG大鼠IL-6、TNF-α含量和基因表達(dá)的影響

黃春麗 馮光維 余躍生 鄧瑩

【摘 要】 目的：研究澤瀉對(duì)MSG大鼠炎癥相關(guān)因子IL-6、TNF-α含量及基因表達(dá)的影響。方法：使用SD大鼠新生乳鼠皮下注射L-谷氨酸鈉，同時(shí)高脂飼料喂養(yǎng)制備MSG大鼠模型，將成模的48只大鼠隨機(jī)分為模型組、非諾貝特組、諾格列酮組和澤瀉劑量組，另選8只空白大鼠作為正常對(duì)照組。給藥8周后，檢測(cè)血清中IL-6、TNF-α含量并用RT-PCR法檢測(cè)肝臟中IL-6、TNF-α mRNA相對(duì)表達(dá)。結(jié)果：與模型組大鼠相比，澤瀉高、中劑量組血清中IL-6、TNF-α含量顯著下降（P<0.05，P<0.01），肝臟組織中IL-6、TNF-α mRNA相對(duì)表達(dá)顯著下降（P<0.05，P<0.01）。 結(jié)論：澤瀉具有一定抗炎作用，其作用機(jī)制可能與抑制炎癥相關(guān)因子IL-6和TNF-α含量和基因表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 澤瀉;糖尿病;MSG大鼠;炎癥因子

【中圖分類號(hào)】R285.5?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）03-0017-04

Effect of Alismatis Rhizoma on IL-6， TNF-α Content and Gene Expression in MSG Rats

HUANG Chunli FENG Guangwei YU Yaosheng DENG Ying

Qiannan Medical College For Nationalities， Duyun 558013， China

Abstract：Objective To study the effect of Alismatis Rhizoma on IL-6， TNF-α content and gene expression in MSG rats. Methods The rats were injected with L-glutamine sodium under the skin of SD rats and fed with high fat feed to prepare the MSG rats model. 48 rats were randomly divided into model group， fenofibrate group， noglitazone group and Alismatis Rhizoma dose group， and another 8 blank rats were selected as normal control group.Results Compared with the model group， the contents of IL-6 and TNF-α in serum and the relative expression of IL-6 and TNF-α mRNA in liver tissue of Alismatis Rhizoma high and medium dose groups were significantly decreased （P<0.05， P<0.01 ）.Conclusion Alisma Rhizoma has a certain anti-inflammatory effect， and its mechanism may be related to the inhibition of IL-6 and TNF-α content and gene expression.

Key words：Alismatis Rhizoma; Diabetes Mellitus; MSG Rats; Inflammatory Factors

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale（Sam）Juzep 的干燥塊莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，性寒，味甘，味淡，歸膀胱經(jīng)、腎經(jīng)，具有利水滲濕瀉熱、化濁降脂的功效，臨床常用于治療小便不利、水腫漲滿、痰飲眩暈、熱淋澀痛等病癥[1]?，F(xiàn)代研究[2-3]發(fā)現(xiàn)，澤瀉中含有多種化學(xué)成分，主要以三萜類和倍半萜類為主，有利尿、降血脂、降血糖、抗炎、抗腫瘤等多種藥理作用。目前對(duì)澤瀉的研究更多集中在利尿及調(diào)血脂方向，近年來(lái)也有學(xué)者[4-5]研究了對(duì)澤瀉的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，但針對(duì)澤瀉干預(yù)糖尿病相關(guān)炎癥的研究較少，為此本實(shí)驗(yàn)擬通過高糖高脂飲食配合腹腔注射谷氨酸鈉復(fù)制MSG 肥胖大鼠模型，給予澤瀉醇提物治療后，觀察MSG肥胖大鼠血清及肝臟中炎癥相關(guān)因子表達(dá)，為澤瀉治療糖尿病提供更多理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物 SD孕鼠，體重（300～400 g），由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK（湘 ）2014—0011。實(shí)驗(yàn)前 1周飼養(yǎng)于黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲食，溫度 18～22 ℃。

1.2 藥品 澤瀉（黔南州鼎鑫生物科技有限公司，批號(hào)：180431）;非諾貝特（江蘇瑞年前進(jìn)制藥有限公司，批號(hào)：1803241）;羅格列酮（成都瑞恒有限公司，批號(hào)：190512）。

1.3 試劑與儀器 白介素-6（IL-6）試劑盒（批號(hào)：L141118510），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒（批號(hào)：L141118514），均由Uscn Life science Inc公司提供。Trizol試劑（Servicebio公司，批號(hào)：G3013）;HyPure TMMolecular Biology Grade Water（HyClone公司，批號(hào)：SH30538.02）;ServicebioRT First Strand cDNA Synthesis Kit（Servicebio公司，批號(hào)：G3330）;2×SYBR? Green qPCR Master Mix（High ROX）（Servicebio公司，批號(hào)：G3322）;引物合成（上海生工生物工程股份有限公司合成）;D3024R臺(tái)式高速冷凍型微量離心機(jī)（DragonLab公司）;PC-1000 PCR逆轉(zhuǎn)錄儀（PERKIN ELMER公司）;CFX96型Real-Time PCR儀（Bio-Red公司）;SW-CJ-1FD超凈工作臺(tái)（蘇凈安泰公司）;Epoch酶標(biāo)檢測(cè)儀（BioTeK公司）。見表1。

2 方法

2.1 澤瀉醇提物的制備 先將澤瀉藥材粉粹成粗粉，取粗粉1 kg加80%乙醇回流提取3次，每次2 h，減壓回收溶劑得澤瀉醇提取物。

2.2 模型建立及分組 SD大鼠新生乳鼠從第2天開始皮下注射L-谷氨酸鈉，劑量為4 g·kg-1·d-1連續(xù)注射7 d，正常對(duì)照組給予等量生理鹽水。MSG組給予高脂飼料喂養(yǎng)，正常對(duì)照組普通飼料，8周后眼眶采血檢測(cè)空腹血糖及血脂變化，以空腹血糖及血脂水平顯著高于正常組為造模成功標(biāo)準(zhǔn)。將符合模型標(biāo)準(zhǔn)的48只大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，分別為模型組、羅格列酮5 mg/kg組、非洛貝特100 mg/kg組、澤瀉4 g生藥/kg組、澤瀉2 g生藥/kg組及澤瀉1 g生藥/kg組，另取8只空白大鼠作為正常對(duì)照組。各組每日灌胃相應(yīng)藥物，連續(xù) 8周，給藥期間自由進(jìn)食，飲水。

2.3 標(biāo)本采集 給藥8周后，末次給藥前禁食12 h，給藥1 h后，3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，3500 r·min-1，離心15 min，分離血清，分裝凍存?zhèn)溆?迅速摘除肝臟、脾臟與胰腺組織剝離周圍脂肪組織，稱重后液氮凍存。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 臟器系數(shù)的計(jì)算 將剖取的脾臟、胰腺組織，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分后，稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=臟器重量（mg）/大鼠體重（g）×100%

2.4.2 血清中IL-6、TNF-α含量檢測(cè) 采用免疫熒光法檢測(cè)血清中IL-2，TNF-α含量，具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行。

2.4.3 肝臟組織IL-6 mRNA，TNF-α mRNA的檢測(cè) 取肝臟研磨后，加入TRIzol按說明提取RNA，按照試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，進(jìn)行PR-PCR實(shí)驗(yàn)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用 SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用 LSD法 ，若方差不齊采用 Dunnetts T3法，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 澤瀉對(duì)MSG大鼠脾臟及胰腺系數(shù)的影響 給藥8周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組脾臟系數(shù)顯著降低（P<0.01），胰腺系數(shù)顯著升高（P<0.01）;與模型對(duì)照組相比，羅格利酮組胰腺系數(shù)顯著降低（P<0.01），非諾貝特組脾臟系數(shù)顯著升高（P<0.01）;澤瀉高、中劑量組脾臟系數(shù)顯著升高（P<0.01，P<0.05），澤瀉高、中劑量組胰腺系數(shù)顯著降低（P<0.01，P<0.05）。澤瀉低劑量組對(duì)脾臟及胰腺系數(shù)沒有明顯影響。見表2。

3.2 澤瀉對(duì)MSG大鼠血清中IL-6、TNF-α含量的影響 給藥8周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組血清IL-6和TNF-α含量顯著升高（P<0.01）;與模型對(duì)照組相比，羅格利酮、非諾貝特組血清IL-6和TNF-α含量顯著降低（P<0.01，P<0.05）;澤瀉高、中劑量組肝臟血清IL-6和TNF-α含量顯著降低（P<0.01，P<0.05）。澤瀉低劑量組對(duì)血清IL-6和TNF-α含量沒有明顯影響。見表3。

3.3 澤瀉對(duì)MSG大鼠肝臟中IL-6 mRNA，TNF-α mRNA表達(dá)的影響 給藥8周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組肝臟IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相對(duì)含量顯著升高（P<0.01）;與模型對(duì)照組相比，羅格利酮、非諾貝特組肝臟IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相對(duì)含量顯著降低（P<0.01，P<0.05）;澤瀉高、中劑量組肝臟IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相對(duì)含量顯著降低（P<0.01，P<0.05）;澤瀉低劑量組肝臟IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相對(duì)含量沒有明顯變化。見表4。

4 討論

2型糖尿病是一種受環(huán)境和遺傳因素影響的慢性代謝性疾病，前期患者出現(xiàn)高血糖、高血脂等癥狀，近年來(lái)大量的實(shí)驗(yàn)及臨床研究[6]發(fā)現(xiàn)炎癥因子紊亂也是糖尿病特征之一，因此抑制2型糖尿病患者前期體內(nèi)炎癥反應(yīng)有重要的臨床意義。IL-6是一種由脂肪分泌的具有免疫活性的細(xì)胞，不僅參與能量代謝與機(jī)體炎性反應(yīng)也密切相關(guān)[7]，作為研究糖尿病最突出的炎癥因子之一，研究[8]表明IL-6能使胰島β細(xì)胞受損進(jìn)而引起胰島素抵抗，最終使血糖水平升高，故IL-6的水平可作為判斷糖尿病的重要指標(biāo)。TNF-α也是一種由脂肪分泌的促炎因子，TNF-α能作用于脂肪及周圍組引起胰島素抵抗，還可以刺激其他炎癥因子如IL-6的分泌加重胰島素抵抗。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示采用MSG加高脂飼料復(fù)制的MSG肥胖大鼠血清及肝臟中IL-6和TNF-α含量及基因表達(dá)都顯著升高，經(jīng)過澤瀉醇提物干預(yù)后各組大鼠血清中IL-6和TNF-α含量下降，肝臟中IL-6和TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)下降，說明澤瀉具有一定抗炎作用，其作用機(jī)制與抑制炎癥相關(guān)因子IL-6和TNF-α的含量及基因表達(dá)密切相關(guān)。

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（收稿日期：2021-06-12 編輯：陶希睿）