細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌的效果

在我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的過(guò)程中，人口老齡化進(jìn)程也越來(lái)越嚴(yán)重，惡性腫瘤的患病人數(shù)也越來(lái)越多，而肺癌則是增長(zhǎng)率最明顯的一種惡性腫瘤[1]。就診時(shí)大部分患者都已處于疾病晚期，腫瘤負(fù)荷較大，化療、放療、手術(shù)等傳統(tǒng)治療方法無(wú)法對(duì)殘余病灶進(jìn)行徹底清除，進(jìn)而引起腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)?，F(xiàn)階段臨床中在對(duì)晚期（Ⅲ B或Ⅳ期）或局部晚期患者進(jìn)行治療時(shí)，常用的治療方式包括物理消融、細(xì)胞免疫治療、分子靶向治療、放療、局部化療、全身化療等[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，雖然在一定程度上提升了肺癌患者的綜合治療水平，但是卻并沒有顯著改善其生存期，而在提出了腫瘤是一種慢性疾病這一概念后，在治療腫瘤患者時(shí)，也開始更加關(guān)注其生存的量與質(zhì)，所以選擇耐受性更好、低毒、高效的方法來(lái)治療腫瘤患者就顯得非常關(guān)鍵，近年來(lái)臨床開始更加關(guān)注和重視細(xì)胞免疫治療[3]。本研究主要分析了細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌的療效及不良反應(yīng)，希望能為晚期非小細(xì)胞肺癌的防治提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取醫(yī)院2015年1月—2016年12月收治的50例晚期非小細(xì)胞肺癌患者作為對(duì)照組，選取醫(yī)院2017年1月—2018年12月收治的50例晚期非小細(xì)胞肺癌患者作為試驗(yàn)組。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡為18～75歲；經(jīng)細(xì)胞學(xué)或病理組織學(xué)檢查確診為初治肺鱗癌或者肺腺癌[4]；臨床分期為Ⅲ B或者Ⅳ期；功能狀態(tài)卡氏（Karnofsky performance status，KPS）評(píng)分≥60分；過(guò)往并沒有接受細(xì)胞免疫治療；治療前凝血功能和血常規(guī)無(wú)異常，重要臟器功能無(wú)異常，不存在嚴(yán)重基礎(chǔ)疾??；不存在化療和細(xì)胞免疫治療禁忌證；無(wú)法開展放療或者不愿采用放療的患者；自愿接受細(xì)胞免疫治療或化療，患者或者其家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：腦轉(zhuǎn)移患者；伴嚴(yán)重內(nèi)科系統(tǒng)疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病、重要臟器功能損害的患者；妊娠期或哺乳期女性。對(duì)照組中，28例男性，22例女性；其年齡26～71歲，平均（62.2±6.4）歲；KPS評(píng)分：18例患者≥80分，32例患者＜80分；臨床分期為：15例患者為Ⅲ B期，35例患者為Ⅳ期；病理類型：30例患者為腺癌，20例患者為鱗癌；病灶大?。?8例患者的病灶直徑＞3 cm，22例患者的病灶直徑≤3 cm。試驗(yàn)組中，27例男性，23例女性；其年齡為23～73歲，平均（61.5±6.8）歲；KPS評(píng)分：21例患者≥80分，29例患者＜80分；臨床分期：17例患者為Ⅲ B期，33例患者為Ⅳ期；病理類型：31例患者為腺癌，19例患者為鱗癌；病灶大小為：29例患者的病灶直徑＞3 cm，21例患者的病灶直徑≤3 cm。兩組的各項(xiàng)基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

對(duì)照組接受單純化療治療，試驗(yàn)組接受細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療治療；具體的治療方法如下。

（1）細(xì)胞免疫治療：①采集血細(xì)胞：化療前1 d，通過(guò)血細(xì)胞分離機(jī)對(duì)患者外周血進(jìn)行采集，采集大約30～50 mL的血細(xì)胞，采集后應(yīng)及時(shí)送到GMP實(shí)驗(yàn)室。②分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）：新鮮外周血在采集完成之后，應(yīng)轉(zhuǎn)入到離心管內(nèi)，進(jìn)行10 min的離心處理，離心速率為1 500 r/min，選取表面血漿，選擇裝有淋巴細(xì)胞分離液的離心管分裝底層的有核細(xì)胞，并進(jìn)行20 min的離心處理，離心速率為2 000 r/min，選取離心管內(nèi)的白膜層，也就是PBMC。③計(jì)數(shù)細(xì)胞：選擇生理鹽水進(jìn)行2次洗滌，每次進(jìn)行8 min離心處理，離心速率為1 800 r/min，將上清去除，選擇無(wú)血清的RPMI1 640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，選擇計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，細(xì)胞終濃度調(diào)整為2×106/mL。④培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）：在6孔板內(nèi)接種分離出的PBMC混懸液，每孔所加入的細(xì)胞混懸液為2 mL，放置在標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行2 h孵育。孵育完成后，選擇懸浮細(xì)胞用于培養(yǎng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine induced killer，CIK），在6孔板的每一個(gè)孔中加入DC完全培養(yǎng)液2 mL，放置在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。定時(shí)換液，并對(duì)細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行觀察。在培養(yǎng)到第5 d時(shí)，將腫瘤裂解物加入到6孔板內(nèi)，在第6 d加入腫瘤壞死因子-α，促進(jìn)DC成熟，對(duì)內(nèi)毒素、真菌、細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)，加強(qiáng)質(zhì)量監(jiān)控，第8 d進(jìn)行回輸，回輸之前應(yīng)對(duì)內(nèi)毒素、真菌以及細(xì)菌進(jìn)行再次檢測(cè)。⑤培養(yǎng)CIK細(xì)胞：對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行離心洗滌處理，選擇無(wú)血清RPMI1 640培養(yǎng)液重懸，細(xì)胞密度控制為2×106/mL，在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)進(jìn)行接種處理，加入包含干擾素-γ的無(wú)血清RPMI1 640培養(yǎng)液，放置在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行24 h的培養(yǎng)。第2 d加入白介素-1α、CD3單抗和白介素-2，同時(shí)將細(xì)胞轉(zhuǎn)入到細(xì)胞培養(yǎng)袋內(nèi)。每隔2～3 d進(jìn)行1次細(xì)胞計(jì)數(shù)，同時(shí)應(yīng)加入CIK細(xì)胞完全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度維持在2×106/mL，并加入白介素-2。當(dāng)培養(yǎng)到第8天時(shí)，根據(jù)DC：CIK為1：10～30的比例，在細(xì)胞培養(yǎng)帶內(nèi)加入抗原致敏的DC，進(jìn)行3～5 d配天則可以進(jìn)行回輸。⑥細(xì)胞回輸：細(xì)胞回輸時(shí)間為第1周期、第2周期化療間期，從第8 d開始進(jìn)行DC回輸，隔天進(jìn)行1次回輸，共進(jìn)行4次回輸，從第12 d開始進(jìn)行CIK細(xì)胞回輸，每天進(jìn)行2次回輸，持續(xù)進(jìn)行3 d回輸。收集到的DC和CIK細(xì)胞，選擇100 mL包含1%人的自體血清白蛋白的生理鹽水開展混懸處理，經(jīng)外周靜脈完成回輸。

（2）化療方案：放療方案為多西他賽或者紫杉醇聯(lián)合鉑類，按照藥物劑量標(biāo)準(zhǔn)、患者一般情況、體表面積對(duì)藥物劑量進(jìn)行確定，化療周期為3周。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）近期療效：在結(jié)束第2周期化療后3周，按照實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臨床療效進(jìn)行評(píng)估[5]，具體可分為完全緩解（complete response，CR）、部 分緩 解（partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）、疾病進(jìn)展（progressive disease，PD），CR例數(shù)與PR例數(shù)之和則為有效（response rate，RR）例數(shù)，CR例數(shù)、PR例數(shù)、SD例數(shù)之和則為疾病控制（disease control rate，DCR）例數(shù)。（2）檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞表型：分別在第1周期化療前、第3周期化療前，選擇流式細(xì)胞儀對(duì)外周血中的CD4+細(xì)胞百分比、CD8+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細(xì)胞百分比進(jìn)行檢測(cè)。（3）對(duì)治療期間的不良反應(yīng)發(fā)生情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)記錄。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本試驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 21.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以（n，%）表示，組間數(shù)據(jù)比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 近期療效觀察

對(duì)照組、試驗(yàn)組的RR分別為38.0%、48.0%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；試驗(yàn)組的DCR為66.0%，明顯高于對(duì)照組的44.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），如表1。

表1 近期療效觀察 [例（%）]

2.2 外周血中淋巴細(xì)胞表型變化情況觀察

治療前兩組的CD4+細(xì)胞百分比、CD8+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細(xì)胞百分比的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后試驗(yàn)組的CD4+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細(xì)胞百分比均明顯高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而兩組治療后的CD8+細(xì)胞百分比比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與治療前相比，試驗(yàn)組治療后的CD4+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細(xì)胞百分比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而CD8+細(xì)胞百分比則明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與治療前相比，對(duì)照組治療后的CD4+細(xì)胞百分比、CD8+細(xì)胞百分比以及NK細(xì)胞百分比均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療前后對(duì)照組的CD4+/CD8+比值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），如表2。

表2 外周血中淋巴細(xì)胞表型變化情況觀察（±s）

表2 外周血中淋巴細(xì)胞表型變化情況觀察（±s）

注：*表示與治療前相比，P＜0．05。

組別 CD4+細(xì)胞（%） CD8+細(xì)胞（%） CD4+/CD8+ NK細(xì)胞（%）治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后試驗(yàn)組（n=50）32．61±7．96 34．77±8．79* 27．42±7．42 25．76±8．91* 1．33±0．74 1．61±1．03* 16．22±7．76 18．65±7．94*對(duì)照組（n=50）32．68±9．43 29．36±7．01* 28．71±8．36 26．23±6．76* 1．27±0．53 1．16±0．34 18．64±9．03 15．36±8．09*t值 0．040 1 3．402 5 0．816 0 0．297 2 0．466 1 2．933 6 1．437 2 2．052 3 P值 0．968 1 0．001 0 0．416 5 0．767 0 0．642 2 0．004 2 0．153 8 0．042 8

2.3 不良反應(yīng)觀察

試驗(yàn)組患者在CIK細(xì)胞回輸24 h內(nèi)，僅5例患者發(fā)生寒戰(zhàn)、發(fā)熱等癥狀，經(jīng)對(duì)癥支持治療后患者癥狀顯著改善；并沒有患者因?yàn)镃IK細(xì)胞回輸而出現(xiàn)腎臟、心臟功能損害。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組治療后的惡心、骨髓抑制Ⅲ～Ⅳ度發(fā)生率均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而兩組治療后的骨髓抑制Ⅰ～Ⅱ度、外周神經(jīng)毒性、肝功能損害發(fā)生率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），如表3。

表3 不良反應(yīng)發(fā)生情況觀察 [例（%）]

3 討論

腫瘤患病人數(shù)的不斷增加以及臨床病死率的不斷增長(zhǎng)，也導(dǎo)致腫瘤治療模式得到了不斷完善和變化，細(xì)胞免疫治療現(xiàn)階段開始受到了臨床的關(guān)注和重視，成為了現(xiàn)階段臨床中的研究熱點(diǎn)[6]?；熥鳛楝F(xiàn)階段臨床治療晚期非小細(xì)胞肺癌的首選方式，雖然化療能對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效殺傷，讓瘤體明顯縮小，同時(shí)讓患者生存期明顯延長(zhǎng)，但是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞的增殖速度較快，對(duì)化療藥物容易出現(xiàn)耐藥性，多程化療后患者體內(nèi)蓄積大量的化療藥物毒物，可能對(duì)機(jī)體免疫功能和重要臟器功能造成損傷，進(jìn)而讓治療失敗，導(dǎo)致病情進(jìn)展[7-9]。

動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)以及體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，CIK細(xì)胞能有效殺傷膠質(zhì)瘤、胃癌、腎癌、肺癌以及肝癌等腫瘤細(xì)胞[10]。相關(guān)臨床研究結(jié)果表明，采用CIK細(xì)胞免疫治療不但能讓腫瘤患者的近期治療效果明顯提升，同時(shí)還能對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)進(jìn)行預(yù)防，對(duì)患者生活質(zhì)量進(jìn)行顯著改善，讓其無(wú)進(jìn)展生存率明顯提高，毒副作用也比較輕微[11-12]。本研究中，對(duì)照組、試驗(yàn)組的RR分別為38.0%、48.0%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；試驗(yàn)組的DCR為66.0%，明顯高于對(duì)照組的44.0%（P＜0.05）；結(jié)果表明，化療與細(xì)胞免疫治療具有比較理想的協(xié)同效果，能對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌患者的疾病控制率明顯提高；因?yàn)榛颊吣[瘤負(fù)荷大，隨訪時(shí)間并不長(zhǎng)，所以臨床有效率比較無(wú)明顯差異。DC、CIK細(xì)胞能促進(jìn)NK細(xì)胞核T細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌，讓外周血NK細(xì)胞百分比和CD4+百分比、CD4+/CD8+細(xì)胞比值提高，最終對(duì)患者免疫功能進(jìn)行改善[13]，本研究結(jié)果也證實(shí)了上述觀點(diǎn)。另外，本研究中，試驗(yàn)組患者在CIK細(xì)胞回輸24 h內(nèi)，僅5例患者發(fā)生寒戰(zhàn)、發(fā)熱等癥狀，經(jīng)對(duì)癥支持治療后患者癥狀顯著改善；并沒有患者因?yàn)镃IK細(xì)胞回輸而出現(xiàn)腎臟、心臟功能損害。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組治療后的惡心、骨髓抑制Ⅲ～Ⅳ度發(fā)生率均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)果表明，細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療的毒副作用比較輕微，具有較高的安全性。

總之，細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療能讓晚期非小細(xì)胞肺癌患者的疾病控制率明顯提高，對(duì)其免疫功能進(jìn)行顯著改善，而且毒副作用比較輕微，具有臨床推廣價(jià)值。